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研究生:賴怡臻
研究生(外文):Yi-Chen Lai
論文名稱:小鼠Hurp基因的構造及功能
論文名稱(外文):Structure and Function of Hurp Gene in Mouse
指導教授:蔡亭芬老師
學位類別:碩士
校院名稱:國立陽明大學
系所名稱:遺傳學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物訊息學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2003
畢業學年度:91
語文別:中文
中文關鍵詞:Hurp
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HURP (Hepatoma Up-Regulated Protein) 被發現是在人類肝癌組織中會過量表現的蛋白質。HURP mRNA在正常人體組織中的分布在胸腺、睪丸和大腸有高量表現。由同步化HeLa cells 的實驗知道HURP 是細胞週期相關的基因,在G2/M時期表現量上升。HURP蛋白質在細胞分裂時會移動到spindle poles 的位置。HURP 可能是一個新穎的細胞週期調控者,在肝癌形成過程中可能扮演某種角色。
小鼠Hurp 是人類HURP 的同源基因,兩者都有19個exon, 在轉錄蛋白質時,start codon 在第2個exon ,而stop codon在第19個exon, 在基因的構造上很相似。它們在核苷酸上有72%的相似度,在胺基酸上有61﹪的相似度。在小鼠切肝實驗中再生的肝臟於G2/M 時期Hurp表現量也會上升。所以本論文以小鼠作動物模式來研究HURP 基因的構造及生物功能。
首先本論文觀察小鼠Hurp mRNA 在不同組織和不同發育時期的mRNA表現情形,觀察到在成鼠睪丸有很高的表現量,其次是大腸、脾臟、卵巢和小腸等。另外在出生後第9天的胸腺和胚胎幹細胞也有很高的表現。本論文觀察胚胎發育時期(embryonic stage) E11.5 到E18.5 的肝臟,發現Hurp 表現量在出生前會漸下降,在出生後(postnatal)也可觀察到表現但是在第14天及成鼠時期的肝臟用北方墨點法幾乎偵測不到。Hurp 在不同組織和肝臟不同發育時期有不同的表現量。
觀察Hurp 基因的構造,在啟動子 (promoter) 附近有高密度的CpG dinucleotides 和對甲基化敏感的限制酶切點,又由前人的實驗得知在啟動子附近DNA甲基化的改變會調控基因的表現,所以本論文想研究在不同組織和肝臟不同發育時期的基因表現情形和啟動子附近DNA甲基化模式的關聯性。我們用甲基化特有南方墨點法來檢查啟動子附近DNA甲基化模式,發現在成鼠睪丸HhaI和SmaI甲基化模式與其他組織不同。隨著肝臟發育,Hurp啟動子附近DNA甲基化模式會改變。我們偵測到在Hurp啟動子附近一個HhaI 限制酶切點由部分不甲基化到完全甲基化。此點預測為Sp1 transcription factor binding site。Hurp啟動子DNA甲基化模式的改變和基因的表現相關。
為了分析Hurp 在小鼠發育過程中所扮演的生物和生理功能,本論文製作Hurp 單一allele 標的的胚胎幹細胞。經由顯微注射得到六隻chimera。胚胎幹細胞經由變成chimera的生殖細胞遺傳到下一代即是Hurp 基因剔除小鼠。目前共得到6隻Hurp heterozygous knockout 小鼠,其中5隻是公鼠,1隻是母鼠。把heterozygous knockout 公鼠與heterozygous knockout母鼠交配,預期可以得到WT, heterozygous knockout , homozygous knockout 三種基因型小鼠,進一步作表現型分析。Hurp 基因剔除小鼠將可成為重要的小鼠疾病模式。
另外在胚胎幹細胞中剔除2 個Hurp alleles ,觀察失去Hurp 基因功能對胚胎幹細胞的細胞週期之影響。由Flow cytometric cell-cycle analysis 實驗,發現單一allele 剔除(heterozygous knockout)、2 個Hurp alleles 剔除(homozygous knockout)和野生型的胚胎幹細胞的細胞週期分布並無不同。

中文摘要………………………………………………………….……2
英文摘要……………………………………………………………….4
壹、緒論………………………………………………………….……5
貳、材料與方法…………………………………………………….…8
參、結果………………………………………………………….…...27
肆、討論 ……………………………………………………….…….31
伍、參考資料…………………………………………………………34
陸、附圖………………………………………………………………25

伍、參考資料
1. Bisceglie AM, Rustgi VK, Hoofnagle JH., Dusheiko GM, Lotze MT.(1988). NIH conference. Hepatocellular carcinoma. Ann Intern Med., 108, 390-401.
2. Feitelson MA, Duan LX.(1997). Hepatitis B virus X antigen in the pathogenesis of chronic infections and the development of hepatocellular carcinoma. Am J Pathol., 150, 1141-57.
3. Okuda, K.(2000). Hepatocellular carcinoma. J Hepatol, 32, 225-37.
4. Su Q, Liu YF, Zhang JF, Zhang SX, Li DF, Yang JJ. ( 1994). Expression of insulin-like growth factor II in hepatitis B, cirrhosis and hepatocellular carcinoma: its relationship with hepatitis B virus antigen expression. Hepatology,. 20, 788-99.
5 Okabe H, Satoh S, Kato T, Kitahara O, Yanagawa R, Yamaoka Y, Tsunoda T, Furukawa Y, Nakamura Y.(2001). Genome-wide analysis of gene expression in human hepatocellular carcinomas using cDNA microarray: identification of genes involved in viral carcinogenesis and tumor progression.Cancer Res., 61, 2129-37.
6. Cahill DP, Lengauer C, Yu J, Riggins GJ, Willson JK, Markowitz SD, Kinzler KW, Vogelstein B.(1998). Mutations of mitotic checkpoint genes in human cancers. Nature, 392, 300-3.
7. Tsukasaki K, Miller CW, Greenspun E, Eshaghian S, Kawabata H, Fujimoto T, Tomonaga M, Sawyers C, Said JW, Koeffler HP.(2001) Mutations in the mitotic check point gene, MAD1L1, in human cancers. Oncogene, 20, 3301-5.
8. Tsou AP, Yang CW, Huang CY, Yu RC, Lee YC, Chang CW, Chen BR, Chung YF, Fann MJ, Chi CW, Chiu JH, Chou CK. (2003)Identification of a novel cell cycle regulated gene, HURP, overexpressed in human hepatocellular carcinoma. Oncogene, .22, 298-307.
9. Iyer VR, Eisen MB, Ross DT, Schuler G, Moore T, Lee JC, Trent JM, Staudt LM, Hudson J Jr, Boguski MS, Lashkari D, Shalon D, Botstein D, Brown PO. (1999). The transcriptional program in the response of human fibroblasts to serum. Science, 283, 83-7.
10. Bassal S, Nomura N, Venter D, Brand K, McKay MJ, van der Spek PJ.( 2001). Characterization of a novel human cell-cycle-regulated homologue of Drosophila dlg1.Genomics, 77, 5-7.
11. Darlington, GJ.(1999). Molecular mechanisms of liver development and differentiation. Curr Opin Cell Biol, .11, 678-82.
12. Zaret KS (2001). Hepatocyte differentiation: from the endoderm and beyond. Curr Opin Genet Dev, 11, 568-74.
13. Zaret KS.(2002). Regulatory phases of early liver development: paradigms of organogenesis. Nat Rev Genet, 3, 499-512.
14. Connolly KM, Bogdanffy MS.(1993). Evaluation of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) as an endogenous marker of cell proliferation in rat liver: a dual-stain comparison with 5-bromo-2'-deoxyuridine. J Histochem Cytochem, 41, 1-6.
15. Sanders EJ, Varedi M, French AS.(1993). Cell proliferation in the gastrulating chick embryo: a study using BrdU incorporation and PCNA localization. Development, 118, 389-99.
16. Waldman FM, Carroll PR, Cohen MB, Kerschmann R, Chew K, Mayall (1993). 5-Bromodeoxyuridine incorporation and PCNA expression as measures of cell proliferation in transitional cell carcinoma of the urinary bladder. Mod Pathol, 6, 20-4.
17. Ehrlich, M.( 2003). Expression of various genes is controlled by DNA methylation during mammalian development. J Cell Biochem,. 88, 899-910.
18. Esteller, M.( 2002) CpG island hypermethylation and tumor suppressor genes: a booming present, a brighter future. Oncogene,. 21, 5427-40.
19. Turker, M.S.( 2002). Gene silencing in mammalian cells and the spread of DNA methylation. Oncogene,. 21, 5388-93.
20. Ariel M, McCarrey J, Cedar H. (1991). Methylation patterns of testis-specific genes. Proc Natl Acad Sci U S A, .88, 2317-21.
21. Clark SJ, Harrison J, Molloy PL. (1997). Sp1 binding is inhibited by (m)Cp(m)CpG methylation. Gene, 195, 67-71.
22. Michalopoulos GK, DeFrances MC. (1997). Liver regeneration. Science, 276, 60-6.
23. Brandeis M, Frank D, Keshet I, Siegfried Z, Mendelsohn M, Nemes A, Temper V, Razin A, Cedar H.(1994). Sp1 elements protect a CpG island from de novo methylation. Nature, 371, 435-8.
24. Grange T, Cappabianca L, Flavin M, Sassi H, Thomassin H.(2001). In vivo analysis of the model tyrosine aminotransferase gene reveals multiple sequential steps in glucocorticoid receptor action. Oncogene, .20, 3028-38.
25. Xie W, Han S, Khan M, DeJong J.(2002) Regulation of ALF gene expression in somatic and male germ line tissues involves partial and site-specific patterns of methylation. J Biol Chem, .277, 17765-74.
26. Ludwig DL, Chen F, Peterson SR, Nussenzweig A, Li GC, Chen DJ.(1997) Ku80 gene expression is Sp1-dependent and sensitive to CpG methylation within a novel cis element. Gene, 199, 181-94.
27. Hallmann D, Trumper K, Trusheim H, Ueki K, Kahn CR, Cantley LC, Fruman DA, Horsch D.(2003). Altered signaling and cell cycle regulation in embryonal stem cells with a disruption of the gene for phosphoinositide 3-kinase regulatory subunit p85alpha. J Biol Chem,. 278,5099-108.
28. Kim JM, Nakao K, Nakamura K, Saito I, Katsuki M, Arai K, Masai H.(2002) Inactivation of Cdc7 kinase in mouse ES cells results in S-phase arrest and p53-dependent cell death. Embo J, 21,2168-79.
29. Xu D, Wilson TJ, Chan D, De Luca E, Zhou J, Hertzog PJ, Kola I.(2002). Ets1 is required for p53 transcriptional activity in UV-induced apoptosis in embryonic stem cells. EMBO J, .21, 4081-93.

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