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研究生:張立同
論文名稱:金黃色葡萄球菌新型腸毒素K、L、M基因引子之設計及其應用於食品及臨床菌株腸毒素型之分佈調查
論文名稱(外文):Development of PCR primers of new staphylococcal enterotoxin genes sek, sel, sem and its application of enterotoxigenic distribution for staphylococcus aureus isolates obtained from food poisoning cases and clinical samples
指導教授:曾浩洋曾浩洋引用關係
學位類別:碩士
校院名稱:國立中興大學
系所名稱:食品科學系
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2004
畢業學年度:92
語文別:中文
論文頁數:122
中文關鍵詞:金黃色葡萄球菌腸毒素新型腸毒素KLM基因
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金黃色葡萄球菌為重要的病原菌之一,產生的腸毒素乃造成食品中毒及中毒性休克症候群的主因。其依血清學上的分類可分為五種主要的傳統腸毒素SEA、SEB、SEC、SED及SEE,與近年來新發現的腸毒素,如:SEG、SEH、SEI、SEJ、SEK、SEL及SEM等。隨著這些新型腸毒素之漸次發現,關於其在食品中毒所擔任的角色實值得更進一步研究瞭解。故本研究之主要目的有二:第一部分是發展新型腸毒素基因sek、sel及sem特異性檢測之PCR引子組。第二部分結合前人文獻所整理之PCR特異性引子組,進行金黃色葡萄球菌臨床分離株腸毒素基因之檢測,藉此探討腸毒素基因的分布情形及相關性。
在本研究中針對金黃色葡萄球菌新型腸毒素所設計之特異性引子組,可順利篩檢出新型腸毒素基因sek、sel及sem。而在引子組 PCR 檢測之特異性方面,以非金黃色葡萄球菌之葡萄球菌屬菌株和其他病原菌進行PCR檢測,除了金黃色葡萄球菌實驗室標準菌株會有PCR產物外,其他非金黃色葡萄球菌皆不會有PCR產物。至於引子組之 PCR 靈敏度方面,針對目標基因之檢測可達到N×100 CFU per assay,而在食品檢測應用上,無論是以市售鮮乳或肉品作為檢驗樣品,在10小時預培養後,以引子組檢測牛乳及豬肉中之金黃色葡萄球菌腸毒素sek、sel及sem基因,靈敏度皆可達到N×100 CFU per assay。
金黃色葡萄球菌其傳統及新型腸毒素之分布情形與相關性方面,乃是利用自行設計的三組特異性引子組,並結合其他腸毒素的特異性引子組進行調查檢測。實驗中所用的菌株為台中榮民總醫院醫學及衛生署疾病管制局中部檢驗站所提供共283 株之 S. aureus臨床分離株,其中有204株 (70%) 帶有一種或一種以上之腸毒素型基因,而在傳統腸毒素中大致以具A型腸毒素基因之菌株為最多,有95株 (34%),其次是B、C、D 型腸毒素基因,各有56株、22株及4株,至於傳統腸毒素 E 型基因在此實驗所收集之金黃色葡萄球菌臨床檢體中並沒有觀察到。在新型腸毒素中則是以K型腸毒素基因之菌株為最多 (66株)。
藉由此研究之腸毒素基因的分布情形,我們可以了解其基因間的關聯性,當檢測到含有腸毒素SEG基因的菌株時,通常也會伴隨著I型基因的出現,且含J型腸毒素基因的菌株也均含有腸毒素基因型D型。因此由上述可知,單一S. aureus本身即可能帶有一種或一種以上的腸毒素基因,如staphylococcus aureus pathogenicity island (SaPI) 或enterotoxin gene cluser (egc)。而在實驗中我們也發現到可能帶有SaPI3、SaPIbov & 4 及egc等病原性區段的菌株。但不論是 SaPI或egc等病原性片段,均依菌株來源的不同而呈現差異性的腸毒素分布,即 SaPI3 可能多存在於 1992 年台中榮總與 2003 年中檢站所分離之 S. aureus臨床菌株;egc區域則在 2003 年台中榮總發現較多,因此依據實驗所收集之臨床檢體來源的差異,腸毒素基因分布可能也隨之不同。
中文摘要
英文摘要
第一章、文獻整理
一、葡萄球菌的特性及所造成的疾病
二、金黃色葡萄球菌之檢測
三、金黃色葡萄球菌產生之毒性因子
四、葡萄球菌的抗生素耐性
五、金黃色葡萄球菌侵入細胞之機
六、金黃色葡萄球菌產生之超級抗
七、金黃色葡萄球菌腸毒素分佈情
八、各型腸毒素之介紹
九、腸毒素的動物試驗
十、金黃色葡萄球菌腸毒素之檢
十一、聚合酶鏈鎖反應
第二章、金黃色葡萄球菌新型腸毒素K、L、M基因引子之設計及其應用於
食品及臨床菌株腸毒素型之分佈調查展及其應用
壹、前言
貳、材料與方法
一、實驗材料
二、實驗方法
參、結果與討論
第一部分 金黃色葡萄球菌新型腸毒素K、L、M特異性引子組
之設計與應用
第二部分、金黃色葡萄球菌之傳統及新型腸毒素之分布情形
肆、結論
參考文獻
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