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研究生:鄭茼允
研究生(外文):Cheng, Torng-Yun
論文名稱:高密度脂蛋白對SR-BI接受器在巨噬細胞生成之泡沫細胞的表現與分佈的影響
論文名稱(外文):The effect of HDL to the expression and distribution of SR-BI receptor in macrophage-derived foam cells
指導教授:鄭 葳
指導教授(外文):Vie Cheng
學位類別:碩士
校院名稱:東海大學
系所名稱:生物學系
學門:生命科學學門
學類:生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2004
畢業學年度:92
語文別:中文
論文頁數:51
中文關鍵詞:高密度脂蛋白SR-BI接受器巨噬細胞泡沫細胞
外文關鍵詞:HDLSR-BImacrophagefoam cell
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本實驗以免疫螢光共軛焦顯微鏡與西方點墨法,探討人類血漿高密度脂蛋白對SR-BI接受器在巨噬細胞、低密度脂蛋白引發的泡沫細胞和氧化態低密度脂蛋白引發之泡沫細胞的分佈與表現的影響。鼠系巨噬細胞 (J-774.A1) 經低密度脂蛋白或氧化態低密度脂蛋白培養形成泡沫細胞後,再以高密度脂蛋白培養0、15、60和120分鐘。發現在低密度脂蛋白引發的泡沫細胞中,含HDL-FITC的細胞比例則隨培養時間先增後減,在60分鐘時,表現量達到最高。而氧化態低密度脂蛋白所含的HDL-FITC比例則與巨噬細胞無異。利用序列495至509的SR-BI多作為抗原製作的抗體標定SR-BI後,觀測SR-BI在細胞中的分佈與表現。結果發現在巨噬細胞和低密度脂蛋白引發的泡沫細胞中,高密度脂蛋白與SR-BI位於同一位置。而在氧化態低密度脂蛋白引發的泡沫細胞中,高密度脂蛋白與SR-BI卻未發現位於同一位置。在巨噬細胞中,SR-BI的表現量會隨高密度脂蛋白培養時間的增加而漸增;低密度脂蛋白引發的泡沫細胞中,則隨時間增加而遞減。相較之下,由氧化態低密度脂蛋白引發的泡沫細胞SR-BI表現量在高密度脂蛋白處理後則幾乎沒有改變。由此結果,我們認為在高密度脂蛋白的影響下,SR-BI的分佈與表現與細胞中脂質的含量與種類相關。
In this study, we have used immuofluorescence confocal microscopy and immunoblotting analysis to investigate the effect of HDL to the distribution and expression of SR-BI receptor in macrophages, LDL-derived foam cells, and oxLDL-dirived foam cells. Murine macrophage cell line-J774A.1 were treated with LDL or oxLDL for foam cell formation. Cells were then incubated with HDL for 0, 15, 60, 120 mins. The ratio of LDL-derived foam cells which contained HDL-FITC increased from 0 to 60 mins and then decreased after HDL incubation, but the ratios of macrophages and oxLDL-derived foam cells were almost the same. A peptide containing residues 495 to 509 from mSR-BI was used to generate mSR-BI antibody to detect SR-BI receptor. We found that HDL and SR-BI were colocalized in the macrophages and the LDL-derived foam cells, but not in the oxLDL-derived foam cells. In macrophages, the expression of SR-BI increased in a time-dependent manner. The expression of SR-BI in the LDL-derived foam cells decreased after HDL incubation. In contrast, the level of SR-BI did not change in the oxLDL-derived foam cells after HDL incubation. According to these results, we conclude that the distributions and expression of SR-BI in the macrophages and foam cells after HDL treatment are related to the contents and the oxidation of the lipids in the cells.
目錄………………………………………………………………………1
中文摘要…………………………………………………………………3
英文摘要…………………………………………………………………4
前言………………………………………………………………………5
材料與方法………………………………………………………………9
一、 高密度脂蛋白的分離……………………………………………..9
二、 氧化態低密度脂蛋白的製備…………………………………..…9
三、 細胞的培養與泡沫細胞的形成…………………………………10
四、 抗小鼠多株抗體的製備、純化與測試………………………….11
五、 免疫螢光顯微鏡法……………………………………………….14
六、 西方點墨法……………………………………………………….14
七、免疫螢光共軛焦顯微鏡法…………………………………………18
結果……………………………………………………………………..20
一、 高密度脂蛋白的分離…………………………………………....20
二、 氧化態低密度脂蛋白的製備……………………………………20
三、 泡沫細胞的形成與鑑定…………………………………………20
四、 抗小鼠SR-BI多株抗體的測試…………………………………21
五、 HDL在以低密度脂蛋白及以氧化態低密度脂蛋白所引發的泡沫細胞及去世細胞上的分佈……………………………………21
六、 經HDL處理後,SR-BI在細胞上的分佈與表現………………22
七、 高密度脂蛋白對低密度脂蛋白及氧化態低密度脂蛋白引發的泡沫細胞上SR-BI表現量的影響………………………………….23
討論……………………………………………………………………..24
參考文獻………………………………………………………………..29
圖目錄…………………………………………………………………..35
圖說明…………………………………………………………………..36
附圖目錄………………………………………………………………..48
附圖說明………………………………………………………………..49
個人資料………………………………………………………………..51
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