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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:龔建榮
研究生(外文):Chien-rong Kung
論文名稱:利用逆向液相層析儀搭配電噴灑游離串聯質譜法進行大白鼠血漿中丹參酚酸B濃度之偵測
論文名稱(外文):Determination of Salvianolic Acid B in Rat Plasma by RPLC Coupled with ESI-tandem Mass Spectrometry
指導教授:王少君王少君引用關係
指導教授(外文):Shau-Chun (Paul) Wang
學位類別:碩士
校院名稱:國立中正大學
系所名稱:化學所
學門:自然科學學門
學類:化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2005
畢業學年度:93
語文別:中文
論文頁數:62
中文關鍵詞:液相質譜電噴灑丹參酚酸B
外文關鍵詞:electrosprayLC-MSSalvianolic acid B
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LC-MS/MS是近年來快速發展的檢測技術,在MRM的模式下可去除一些基質干擾物質,所以更具高靈敏度和高特異性,且所需樣本量少,分析時間短等優點。其精確的分析與鑑定能力,不但在蛋白質體(proteomics)等生化分析已經成為一項不可或缺的技術。而且在製藥領域同樣也倚賴這項技術。近來新藥開發仍常聚焦在天然物,尤其是中草藥的研究上。經由萃取草本植物的根莖葉來得到新的藥物成份,這類的藥物常具有抗氧化、抗濾過性病毒、抗癌等幼纂C將這些藥物以各種途徑進入動物活體,經抽血或微透析技術將體液抽出,搭配如LC-MS/MS等先進分析技術來進行藥理研究。
丹參(Salvia miltiorrhiza)是神農本草經列為上品的中國古老藥材,廣泛用於治療心血管等疾病。丹參主要水溶性成分以酚酸類化合物為主,而丹參酚酸B(Salvianolic acid B)含量最高且活性最強,對腦與心臟局部缺血再灌注引起的細胞膜損傷有明顯的保護作用及抗肝纖維化、抗血栓作用等。但在文獻中對動物實驗樣品如血漿中的丹參酚酸濃度偵測與品質控管(QC)只有極少數的發表,而且現有LC-UV方法之偵測極限(LOD)高達2.7 μg/mL,並不適合支援超微量藥理研究的要求。為了得到更好的結果,我們使用高靈敏度的ESI-MS/MS三極式四極柱質譜儀,搭配添加三氟醋酸(TFA)的水溶液調控移動相的酸鹼值,以等位沖提的方式,再配合液相-液相萃取血漿等樣品前處理技巧,所建立的分析標準相關係數高達0.9996以上,濃度偵測極限也至少可改善至10 ng/mL,濃度定量極限(LOQ)則為50 ng/mL,皆合乎支援超微量藥理研究的要求。
LC-MS/MS is a newly emerging detection technique. It has several analytical advantages such as least interference by chemical matrix, high sensitivity, high specificity, the capabilities of high throughput biological sample analysis, and accurate quantitation of trace impurities in drug products. LC-MS/MS has also become an indispensable technology for proteomics analysis because of its accurate analysis and qualification ability. In addition, in the field of drug discovery and development, LC-MS/MS is a core technology as well. Recently, several newly developed drugs are extracted from the crude materials of natural products, especially traditional Chinese medicines. The chemical constituents isolated from the herbs are mostly efficiency of anti-oxidant, anti-virus and anti-cancer etc. In pharmacological research, LC-MS/MS are employed to assay the medicines that dosed on experimental animals via various kinds of administration routes. These pharmacological samples are typically the body fluids taken out by blood drawing or microdialysis technology.
Radix Salvia miltiorrhiza (danshen), the dried root of Salvia miltiorrhiza Bunge, is a well-known herb of traditional Chinese medicine. Dashen has extensive curative effects in cardiovascular disease treatment. Danshen contains a series of water-soluble salvianolic acid derivatives. These salvianolic acids, especially salvianolic acid B, exhibit strong antioxidant and antithrombosis activities, which are able to protect brain and heart from the damages caused by ischemia-reperfusion and avoid heptic damage. But there are only limited reports on studying the determination of salvianolic acid B in biological samples with adequate quality controls. The limit of detection (LOD) of the published LC-UV method is up to 2.7 μg/mL, which is not suitable to support pharmacological studies. To develop better methods, we use liquid chromatography coupled with a triple-quadrupole mass spectrometer. One liquid-liquid extraction protocol is adopted to prepare animal samples. Separation is accomplished using one C18 column with isocratic elution, of which the mobile phase consists of acetonitrile and aqueous trifluoroacetic acid. The standard curve has a coefficient correlation higher than 0.9996. The limit of detection of our method is 10 ng/mL and the limit of quantitation is 50 ng/mL. This method is adequate to support pharmacological studies.
目錄………………………………………………………………………I
圖目錄……………………………………………………………………V
表目錄……………………………………………………………………VI
附錄……………………………………………………………………VIII
中文摘要…………………………………………………………………IX
Abstract…………………………………………………………………XI
第一章 緒論
1-1 前言……………………………………………………………………1
1-2 質譜儀簡介……………………………………………………………1
1-2-1 電噴灑游離法簡介…………………………………………………3
(1)電噴灑游離法的發展歷史…………………………………….4
(2)電噴灑游離法中帶電荷離子的形成與機制………………….7
1-3 液相層析與電噴灑串聯質譜儀………………………………………11
1-3-1 液相層析與電噴灑串聯質譜儀的結合歷史…………………11
1-3-2 串聯質譜法的原理與應用……………………………………13
(1)串聯質譜法的基本原理…………………………………….14
(2)串聯質譜法的應用………………………………………….16
1-4 生物樣品與質譜儀的偵測………………………………………….17
1-4-1 生物樣品基質對質譜儀偵測的影響…………………………17
1-4-2 生物樣品的前處理方式………………………………………18
1-5 中草藥丹參的簡介………………………………………………….19
1-5-1 丹參的成分……………………………………………………….20
1-5-2 丹參酚酸的化學結構…………………………………………….21
1-5-3 丹參酚酸的藥性簡介…………………………………………….21
1-6 文獻探討…………………………………………………………….22
1-7 研究動機與目的…………………………………………………….23
第二章 研究方法
2-1 材料與溶劑………………………………………………………….29
2-1-1 材料……………………………………………………………….29
2-1-2 溶劑……………………………………………………………….29
2-2 實驗儀器…………………………………………………………….30
2-3 藥品與溶液配置…………………………………………………….30
2-3-1 移動相溶液配置………………………………………………….30
2-3-2 丹參酚酸B標準溶液配置…………………………………………31
2-3-3 標準濃度生理食鹽水配置……………………………………….31
2-3-4 血液樣品之前處理……………………………………………….32
2-4 高效能液相層析條件選擇………………………………………….32
2-4-1 移動相水溶液成分的影響…………………………..………32
2-4-2 移動相有機溶劑的影響……………………………..………33
2-5 LC-MS/MS對丹參酚酸B的濃度分析…………………………….33
2-5-1 初始質譜偵測條件…………………………………..………33
2-5-2 LC-MS/MS偵測血漿中丹參酚酸B之條件………………...34
2-5-3 在MRM偵測模式下其他參數設定………………………...35
2-6 檢量線的建立………………………………………….…………..35
2-7 LC-MS/MS分析法之確效……………………………...………….36
2-7-1 專一性(specificity)………………………………………..36
2-7-2 回歸曲線之線性……………………………..………………36
2-7-3 再現性:精確度與準確度(precision & accuracy)………36
2-7-4 偵測極限(LOD)與定量極限(LOQ)……………….…….37
第三章 實驗結果與討論
3-1 丹參酚酸B的初始質譜條件…………………….………………..38
3-1-1 丹參酚酸B斷裂可能途徑…………………………………..38
3-2 高效能液相層析對偵測的影響…………………………….……..39
3-2-1 移動相水溶液成分的影響……………………………..……39
3-2-2 移動相有機溶劑的影響……………………………..………39
3-3 血漿中丹參酚酸B的偵測………………………………….…….40
3-3-1 LC-MS/MS條件之比較……………………………………...40
3-3-2 以生理食鹽水為基質偵測丹參酚酸B……………………..41
3-3-3 血液樣品之前處理……………………………………..……42
3-3-4 利用LC-MS/MS偵測血漿中丹參酚酸B……………….....42
(1) 檢量線的建立……………………………………….……42
(2) 同日內與異日內偵測結果………………………….……43
第四章 結論及未來方向……………………………………………..55
第五章 參考資料……………………………………………………..56
1.B. K. Choi, D. M. Hercules, T. Zhang, A.I. Gusev, Spectroscopy, 18, 24 (2003).
2.J. T. Watson, Introduction to Mass Spectrometry, New York: Raven Press (1985).
3.Skoog, D. A.; Leary, J. J. Priciples of Instrumental Analysis Forth Edition.
4.Cole, R. B. Electrospray Ionization Mass Spectrometry 1997.
5.G. T. Lputer, A. J. H. Boerboom, P. F. M. Stalmeier, H.H. Tuithof, J. Kistemaker, Int. J.Mass Spectrom. Ion Phys. 1980, 33, 335.
6.R. Pesch. Spectra. 1983, 9.4, 13.
7.R. A. Yost, C.G. Enke, J. Am. Chem. Soc. 1978, 100, 2274.
8.Zeleny, J. Phys. Rev. 1917, 10, 1.
9.Hines, R. L. J. Applied Physics 1966, 37, 2730
10.Dole, M., Mack, L. L., Hines, R. L.; Mobley, R. C.; Ferguson, L. D.; Alice, M. B. J. Chem. Phys. 1968, 49, 2240.
11.Mack, L. L., Kralic, P., Rheude, A., Dole, M. J. Chem. Phys. 1970, 52, 4977.
12.Yamashita, M., Fenn, J. B. J. Phys. Chem. 1984, 88, 4451.
13.Aleksandrov, M. L., Gall, L. N., Shkurov, V. A., Pavlenko, V. A., Krasnov, N. V., Nikolaev, V. I. J. Anal. Chem., 1984, 39, 1268.
14.Wong, S. F., Meng, C. K., Fenn, J. B. J. Phys. Chem. 1988, 92, 546.
15.Fenn, J. B., Mann, M., Meng, C. K., Wong, S. F., Whitehouse, C. M. Science, 1989, 246, 64.
16.Bruins, A. P., Covey, T. R., Henion, J. D. Anal. Chem. 1987, 59, 2642.
17.Loo, J. A.; Udseth, H. R.; Smith, R. D. Anal. Biochem. 1989, 179, 404.
18.Wahl, J. A.; Goodlett, D. R.; Udseth, H. R.; Smith, R. D. Anal. Chem. 1992, 64, 3194.
19.Gale, D. C.; Smith, R. D. Rapid Commun. Mass Spectrom. 1993, 7, 1017.
20.Wilm, S.; Mann, M. J. Mass Spectrom. Ion Processes 1994, 136, 167.
21.Wilm, S.; Mann, M. Anal. Chem. 1996, 68, 1.
22.Gaskell, S. J. J. Mass Spectrom. 1997, 32, 677.
23.Gomez, A.; Tang, K. Phys. Fluid. 1994, 65, 404.
24.Agnes, G. R.; Stewart, I. I.; Horlick, G. Appl. Spectrosc. 1994, 48, 1347.
25.Kebarle, P.; Tang, L. Anal. Chem. 1993, 65, 972A.
26.Dole, D.; Mack, L. L.; Hines, R. L. J. Chem. Phys. 1968, 49, 2240.
27.Iribarne, J. V.; Thornson, B. A. J. Chem. Phys. 1976, 64, 15.
28.Tal'roze,V. L.; Karpov, G. V.; Gordetskii, I. G.; Skurat, V. E. J. Phys. Chem. 1968, 42, 1658.
29.Scott, R. P. W.; Scott, C. G.; Munroe, M.; Hess, J. Jr. J. Chromatogr. 1974, 99, 395.
30.Horning, E. C.; Carroll, D. I.; Dzidic, I.; Haegele, K. D.;Hornig, M. G.; Stillwell, R. N. J. Chromatogr. 1974, 12, 725.
31.Blakley, C. R.; Carmody, J. J.; Vestal, M. L. Adv. Mass Spectrom. 1980, 8B, 1616.
32.Willoughby, R. C.; Browner, R. F. Anal. Chem. 1984, 56, 2625.
33.Capriol, R. M.; Fan, T.; Cottrell, J. S. Anal. Chem. 1986, 58, 2949.
34.Voress, L. Anal. Chem. 1994, 66, 481.

35.Bursey, M. M.; Hass, J. R. Tandem Mass Spectrometry, F.W. McLafferty, Editor. 1983, John Wiley & Sons: New York,NY. p. 465-477.
36.Price, P. J. Amer. Soc. Mass Spectrom. 1991, 2, 336.
37.中國醫學科學院 中草藥現代研究(第二冊)[M] 北京:北京醫科大學 中國協和醫科大學聯合出版社 1996, 472.
38.Du, G.-H.; Zhang, J.-T. Basic Medical Sciences and Clinics 2000, 2, 394.
39.李政雄;顧文華;黃慧珠 [J] 藥學通報 1981, 16, 24.
40.Zhang, J.-L.; Cui, M.; He, Y.; Yu, H.-L.; Gao, D.-A. J. Pharm. Biomed. Anal. 2005, 36, 1029.
41.Zhou, C.-X.; Luo, H.-W.; Niwa, M. Journal of China Pharmaceutical University 1999, 80, 411.
42.Tang, M.-K.; Ren, D.-C.; Zhang, J.-T.; Du, G.-H. Phytomedicine 2000, 9, 405.
43.黃詒森;張均田 藥學學報 1992, 27, 6.
44.王潔;張均田 [J] 中國藥理學通報 1999, 15, 204.
45.Du, G.-H.;Qiu, Y.; Zhang, J.-L. Asian Natural Prducts Research 2000
46.Chen, Y.-H.; Du, G.-H.; Zhang, J.-L. Sino Acta Pharmacal 2000
47.Feng, Z.; Zhang, J.-L. Acta Pharm.Sinica 2000, 35, 881.
48.Lay, I.-S. Planta Med. 2003, 69, 26.
49.Hung, H.-H.; Cheng, Y.-L. Hisˉ. tol Histopathol 2001, 16, 175.
50.Zhang, J.-L.; He, Y.; Cui, M.; Li, L.; Yu, H.-L.; Zhang, G.-F.; Guo, D.-A. Biomed. Chromatogr. 2005, 19, 51.
51.Zhang, J.-L.; Yu, H.-L.; Sheng, Y.-X.; Li, L.; Ye, M.; Guo, D.-A. Biomed. Chromatogr. 2005, 19, 15.
52.Bressole, F.; Bromet-Petit, M.; Audran, M. J. Chromatogr. B 1996, 686, 3.
53.Hu, P.; Liang, Q.-L.; Luo, G.-A.; Zhao, Z.-Z.; Jiang, Z.-H. Chem. Pharm. Bull. 2005, 53, 677.
54.施馨惠 國立中正大學化學暨生物化學研究所碩士論文 2004
55.黃志民 國立中正大學化學研究所碩士論文 2003
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1. 17.陳立夫,土地利用限制與是否應予損失補償--日本法理論之介紹,人與地雜誌140期,84年8月。
2. 11.林明鏘,私有既成道路與損失補償請求權,月旦法學雜誌112期,93年9月。
3. 11.林明鏘,私有既成道路與損失補償請求權,月旦法學雜誌112期,93年9月。
4. 5.李建良,行政法上損失補償制度之基本體系,東吳法律學報11卷2期,88年5月。
5. 5.李建良,行政法上損失補償制度之基本體系,東吳法律學報11卷2期,88年5月。
6. 17.陳立夫,土地利用限制與是否應予損失補償--日本法理論之介紹,人與地雜誌140期,84年8月。
7. 19.陳立夫,闡釋保留徵收與公共設施保留地之區別,月旦法學雜誌28期,86年8月。
8. 19.陳立夫,闡釋保留徵收與公共設施保留地之區別,月旦法學雜誌28期,86年8月。
9. 20.陳立夫,公共設施保留地之使用限制與損失補償,月旦法學教室7期,92年7月。
10. 20.陳立夫,公共設施保留地之使用限制與損失補償,月旦法學教室7期,92年7月。
11. 24.陳明燦,私有既成道路使用受限與損失補償相關問題,月旦法學雜誌112期,93年9月。
12. 24.陳明燦,私有既成道路使用受限與損失補償相關問題,月旦法學雜誌112期,93年9月。
13. 27.陳清秀,既成道路相關法律問題探討,月旦法學雜誌112期,93年9月。
14. 27.陳清秀,既成道路相關法律問題探討,月旦法學雜誌112期,93年9月。
15. 35.賴樹奎,健全多元配套機制解決私有既成道路補償問題,土地問題研究季刊3卷第1期,93年3月。