臺灣博碩士論文加值系統

隨著工業的發展，重金屬污染物已然造成許多環境上的問題，其主要污染源包括製革業、冶金業、電鍍業、積體電路業及印刷電路板業等產業，就新竹科學園區某印刷電路板業而言，其廢水中含有五種重金屬如銅、鋅、鎳、鉻及鎘，其中以銅、鋅、鎳的濃度相對較高。而利用硫酸還原菌 (SRB) 之生物沈澱技術產生不溶性金屬硫化物，以去除水中及廢水中之有毒重金屬具有很高的生物復育潛能。因此，本研究主要目的在於利用硫酸還原菌之生物沈澱技術去除混合重金屬如：銅、鋅、鎳，藉由混合實驗設計法探討重金屬對生物沈澱效能的影響，並藉由分子生物技術—螢光原位雜交法 (FISH)、聚合酶鏈鎖反應 (PCR) 及變性梯度膠體電泳法 (DGGE) 等方法，找出微生物菌相變化。
此研究主題主要分成二部分，首先利用混合實驗設計法探討三種不同濃度重金屬 (銅、鋅、鎳) 對於硫酸還原菌進行生物沈澱程序之影響，其次藉由螢光原位雜交法計算出硫酸還原菌佔總菌之百分比，並透過變性梯度膠體電泳法探究反應過程中微生物族群之變化。
研究結果顯示，當溶液中不存在重金屬銅及鎳離子，且鋅離子濃度高達 180 mg/L 時，其最大硫酸還原效率可高達 37%，且當水溶液中含有鋅離子時，其硫酸還原率皆較含銅及鎳時為高，由此結果可間接證明為何實驗所得之重金屬鋅去除率較銅及鎳離子高，而鋅離子的平均去除率可達97%，最大去除率則近乎 100%。由混合實驗所得之等高線圖得知三種重金屬對 SRB 之毒性順序依序為銅 > 鎳 > 鋅。而由 FISH 實驗結果發現，當分析樣品中含有重金屬鋅時，會對本實驗所採用的探針專一性產生干擾，而影響特殊菌種的計數；而單由控制組分析結果可之，反應槽中總 bacteria (EUB338) 佔總微生物 (DAPI) 百分比約為 80%，而 SRB 族群佔總微生物族群約介於 55-60%。而單由控制組分析其染上 DAPI 的微生物計數結果發現，反應槽中總微生物數量約為 109 cell/mL。在確認實驗控制組及實驗組的 DGGE 分析結果中更發現，控制組在反應 14 天內微生物菌相幾乎維持不變，而實驗組中的分析結果中則可明顯看出在反應時間為 20 小時及 92 小時處，分別有不同種類的微生物產生及銷匿，顯示重金屬鋅的添加會引起 SRB 菌相的改變，使在重金屬存在的環境下亦能生長之 SRB 菌種成為優勢菌種。

Heavy metal contamination is a serious problem from various industries such as leather manufacturing industry, metallurgy industry, electroplating industry, integrated circuit industry and printed circuit board industry, etc. Printed circuit board industry wastewater is contaminated with five heavy metals such as copper, zinc, nickel, chromium and cadmium. Among these heavy metals contamination, copper, zinc and nickel are relatively higher concentration than cadmium and chromium. The sulfate-reducing bacteria (SRB) have bioremediation potential to precipitate toxic heavy metals from water and wastewater as highly insoluble metal sulfides. Therefore, the present investigations are to optimize the bio-precipitation of copper, zinc and nickel using sulfate-reducing bacteria by mixture design and examine the bacterial population using FISH, DGGE and PCR.
The objective of this research consists of two parts. In the first part, the heavy metals such as copper, zinc and nickel will be taken to study the effect on SRB during bioprecipitation process using mixture design. In the second part, bacteria population will be examined thoroughly using molecular techniques such as FISH, DGGE and PCR.
The results demonstrated that the sulfate reduction ratio was 37% in the absence of copper and nickel when the concentration of zinc was 180 mg/L. This finding concluded that the removal of zinc was significantly higher because of the higher sulfate-reduction activity than nickel and copper. The experiment results confirmed that the average removal of Zn2+ was 97% by sulfate reducing bacteria (SRB), and the maximum removal ratio was 100%. The contour plot also indicated that the toxic order of the three heavy metals were: Cu2+ > Ni2+ > Zn2+. By the experimental result of FISH, we can find that the ratio of EUB338/DAPI was about 80%. And the SRB/DAPI ratio was between 55% and 60%. From the calculation of DAPI, we can also find that the microorganism number of the reactor were 109 cells/mL. From the photograph of DGGE, we can also find that the bacterial population of control was almost constant during the period of reaction time. However in the experimental reactor, the bacterial population has altered at the 20 and 92 hour.

目錄
中文摘要 ………………………………………………………………i
英文摘要 ……………………………………………………………iii
誌謝 ………………………………………………………………v
目錄 ………………………………………………………………vi
圖目錄 ………………………………………………………………x
表目錄 ……………………………………………………………xiv
縮寫對照表……………………………………………………………xvii
第一章 前言…………………………………………………………1
1-1 研究緣起……………………………………………………1
1-2 研究目的……………………………………………………2
第二章 文獻回顧……………………………………………………3
2-1 重金屬污染源………………………………………………3
2-1.1 物化處理程序………………………………………………4
2-1.2 生物處理程序………………………………………………6
2-2 硫循環………………………………………………………10
2-2.1 硫的同化還原作用 (assimilatory reduction)………10
2-2.2 硫的異化還原作用 (dissimilatory reduction)………11
2-3 硫酸還原菌 (sulfate-reducing bacteria, 簡稱 SRB) 簡介………………………………………………………………13
2-4 硫酸還原作用之抑制與競爭………………………………14
2-5 硫酸還原菌之其他應用……………………………………17
2-5.1 應用硫酸還原菌降解難分解有機物質……………………17
2-5.2 硫酸還原菌結合薄膜技術處理含重金屬廢水……………17
2-5.3 硫酸還原菌直接應用於含重金屬廢水之處理……………19
2-6 分子生物技術應用於 SRB 菌分析之簡介………………26
2-6.1 螢光原位雜交法 (Fluorescence In-Situ Hybridization, 簡稱 FISH)…………………………………………26
2-6.2 聚合酶連鎖反應 (Polymerase Chain Reaction, 簡稱 PCR)……………………………………………………………………28
2-6.3 變性梯度凝膠電泳法 (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis, 簡稱 DGGE)………………………………………30
第三章 實驗方法與設備……………………………………………33
3-1 實驗流程與架構……………………………………………33
3-2 各項水質分析方法及使用儀器……………………………35
3-3 植種污泥之來源及馴養……………………………………36
3-3.1 培養基成分…………………………………………………36
3-3.2 厭氧污泥之批次馴養………………………………………37
3-4 印刷電路板業模擬廢水之水質及成分……………………38
3-5 以混合設計法及反應曲面分析法建立實驗組數…………39
3-6 反應槽的設置………………………………………………45
3-7 分子生物技術………………………………………………47
3-7.1 FISH 實驗步驟……………………………………………48
3-7.2 DNA 萃取實驗步驟…………………………………………55
3-7.3 PCR 實驗步驟………………………………………………57
3-7.4 DGGE 實驗步驟……………………………………………59
第四章 結果與討論…………………………………………………62
4-1 混合設計實驗………………………………………………62
4-1.1 碳源利用率…………………………………………………62
4-1.2 硫酸鹽還原率………………………………………………63
4-1.3 硫離子產生率………………………………………………65
4-1.4 重金屬對硫酸還原活性的影響……………………………68
4-2 大反應槽實驗………………………………………………75
4-2.1 SRB 對碳源利用……………………………………………75
4-2.2 硫酸鹽還原變化……………………………………………76
4-2.3 硫離子產生變化……………………………………………78
4-2.4 MLVSS 變化…………………………………………………79
4-2.5 重金屬變化…………………………………………………80
4-2.6 反應速率分析………………………………………………81
4-3 混合設計與大反應槽實驗結果比較………………………84
4-4 吸附作用與沈澱作用的探討………………………………85
4-5 FISH 分析結果……………………………………………87
4-5.1 微生物生長生長變化………………………………………88
4-5.2 FISH 的干擾………………………………………………93
4-5.3 FISH 的數量計算…………………………………………97
4-6 DGGE 分析結果……………………………………………103
第五章 結論與建議………………………………………………105
5-1 結論………………………………………………………105
5-2 建議………………………………………………………108
參考文獻 ……………………………………………………………109
附錄一 實驗原始數據……………………………………………117
附錄二 反應槽發生問題解決與改善……………………………137
附錄三 螢光原位雜交法相關藥品配製…………………………139

圖目錄
圖 2-1 硫循環………………………………………………………12
圖 2-2 硫酸還原菌結合萃取式薄膜反應槽………………………1
圖 2-3 雙股 DNA 開鏈示意圖……………………………………31
圖 3-1 實驗流程圖…………………………………………………34
圖 3-2 厭氧污泥馴養槽及pH, ORP, 溫度偵測器………………37
圖 3-3 混合實驗設計實驗組分佈圖………………………………43
圖 3-4 裝入培養基的混合實驗批次式反應槽……………………45
圖 3-5 加入不同重金屬濃度的混合實驗批次式反應槽…………46
圖 3-6 植入厭氧濃縮污泥後的混合實驗批次式反應槽…………46
圖 3-7 反應時間 t = 0 hr採樣後的混合實驗批次式反應槽…46
圖 3-8 混合實驗批次式反應槽恆溫震盪…………………………47
圖 3-9 螢光原位雜交法專用之雜交玻片…………………………51
圖 3-10 螢光原位雜交裝置…………………………………………52
圖 3-11 螢光顯微鏡照相設備………………………………………54
圖 3-12 聚合酶連鎖反應器…………………………………………61
圖 3-13 變性梯度膠體電泳槽………………………………………61
圖 3-14 顯影照相設備………………………………………………61
圖 4-1 混合試驗各組反應槽之碳源變化情形……………………63
圖 4-2 混合試驗各組反應槽之硫酸鹽濃度變化情形……………64
圖 4-3 混合試驗各組反應槽之硫離子濃度之變化情形…………68
圖 4-4 不同重金屬組合下之硫酸鹽還原率等高線圖……………69
圖 4-5 確認試驗反應 14 天中碳源濃度隨時間變化……………76
圖 4-6 確認試驗反應 14 天中硫酸鹽濃度隨時間變化…………77
圖 4-7 確認試驗反應 14 天中硫離子濃度隨時間變化…………79
圖 4-8 確認試驗反應14天中 MLVSS 濃度隨時間變化…………80
圖 4-9 確認試驗反應 14 天中重金屬鋅濃度隨時間變化………81
圖 4-10 確認試驗之碳源利用、硫酸鹽還原及硫離子產生對時間之相關線性圖………………………………………………………………83
圖 4-11 控制組硫酸鹽、硫離子及 DOC 對時間變化圖…………84
圖 4-12 實驗組硫酸鹽、硫離子及 DOC 對時間變化圖…………85
圖 4-13 確認試驗實驗組植種前之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片…………………………………………………………………………89
圖 4-14 確認試驗實驗組 t = 0 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片……………………………………………………………………89
圖 4-15 確認試驗實驗組 t = 20 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片……………………………………………………………………90
圖 4-16 確認試驗實驗組 t = 44 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片……………………………………………………………………90
圖 4-17 確認試驗實驗組 t = 92 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片……………………………………………………………………91
圖 4-18 確認試驗實驗組 t = 140 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片…………………………………………………………………91
圖 4-19 確認試驗實驗組 t = 212 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片…………………………………………………………………92
圖 4-20 確認試驗實驗組 t = 336 小時之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片…………………………………………………………………92
圖 4-21 確認試驗實驗組 t = 92 小時之污泥雜 EUB338 之螢光顯微照片……………………………………………………………………93
圖 4-22 氯化鋅溶液有雜 EUB338 探針之 DAPI 螢光顯微照片…95
圖 4-23 氯化鋅溶液有雜 EUB338 探針之 Cy3 螢光顯微照片…95
圖 4-24 氯化鋅溶液沒有雜任何探針之 DAPI 螢光顯微照片……96
圖 4-25 氯化鋅溶液沒有雜任何探針之 Cy3 螢光顯微照片……96
圖 4-26 軟體計算 Probe stain 結果……………………………98
圖 4-27 軟體計算 DAPI stain 結果………………………………99
圖 4-28 確認試驗控制組之污泥 DAPI stain 螢光顯微照片…101
圖 4-29 DAPI stain 螢光顯微照片計數方式……………………101
圖 4-30 確認試驗控制組 DGGE 之微生物相變化 (二重複) …104
圖 4-30 確認試驗實驗組 DGGE 之微生物相變化………………104

表目錄
表 2-1 國內各類重金屬廢水處理程序之優缺點…………………8
表 2-1 國內各類重金屬廢水處理程序之優缺點 (續)……………9
表 2-2 硫酸還原菌、甲烷菌及醋酸菌之生長反應方程式………16
表 2-3 硫酸還原菌及甲烷菌對醋酸利用之反應方程式…………16
表 2-4 重金屬對 SRB 造成毒性的濃度…………………………20
表 2-4 重金屬對 SRB 造成毒性的濃度 (續)……………………21
表 2-5 碳源種類對SRB 之硫酸還原效率之影響…………………22
表 2-5 碳源種類對SRB 之硫酸還原效率之影響 (續一)………23
表 2-5 碳源種類對SRB 之硫酸還原效率之影響 (續二)………24
表 2-5 碳源種類對SRB 之硫酸還原效率之影響 (續三)………25
表 3-1 各項水質分析方法及其使用儀器…………………………35
表 3-2 修正後之SRB1 培養基組成成分及含量…………………36
表 3-3 一般印刷電路板業放流水中所含之重金屬濃度…………38
表 3-4 設計比例編碼與重金屬濃度及調配添加量之對照表……40
表 3-5 混合實驗之三種重金屬混合比例編碼表 (Design Table)……………………………………………………………………………41
表 3-6 各組反應之試劑添加量及植種量…………………………42
表 3-7 實驗規劃所需調配的培養基配取量………………………44
表 3-8 硫酸還原菌族群所使用之探針……………………………49
表 3-9 聚合酶連鎖反應所使用之引子……………………………57
表 3-10 聚合酶連鎖應實驗控制條件………………………………58
表 4-1 混合試驗各組反應槽第 0 天及第 14 天之重金屬去除率…………………………………………………………………………67
表 4-2 混合試驗各組反應槽之硫酸鹽還原率……………………70
表 4-3 各項式之回歸係數統計表…………………………………72
表 4-4 各次方項式之 ANOVA 分析表……………………………72
表 4-5 確認試驗之各項反應速率分析表…………………………82
表 4-6 確認試驗控制組 Probe 佔 DAPI 百分比………………98
表 4-7 確認試驗控制組 DAPI stain 數量計算………………102
表一 混合實驗溶解性有機碳濃度原始數據…………………117
表一 混合實驗溶解性有機碳濃度原始數據 (續)……………118
表二 混合實驗硫酸鹽濃度原始數據…………………………119
表二 混合實驗硫酸鹽濃度原始數據 (續) …………………120
表三 混合實驗硫離子濃度原始數據…………………………121
表三 混合實驗硫離子濃度原始數據 (續) …………………122
表四 混合實驗銅離子濃度原始數據…………………………123
表五 混合實驗鋅離子濃度原始數據…………………………124
表六 混合實驗鎳離子濃度原始數據…………………………125
表七 確認試驗溶解性有機碳濃度原始數據…………………126
表八 確認試驗硫酸鹽濃度原始數據…………………………127
表八 確認試驗硫酸鹽濃度原始數據 (續) …………………128
表九 確認試驗硫離子濃度原始數據…………………………129
表十 確認試驗鋅離子濃度原始數據…………………………130
表十一 確認試驗 EUB338 佔 DAPI 面積百分比原始數據……131
表十一 確認試驗 EUB338 佔 DAPI 面積百分比原始數據 (續)…………………………………………………………………………132
表十二 確認試驗 SRB385 佔 DAPI 面積百分比原始數據……133
表十二 確認試驗 SRB385 佔 DAPI 面積百分比原始數據 (續)…………………………………………………………………………134
表十三 確認試驗 SRB385Db 佔 DAPI 面積百分比原始數據…135
表十三 確認試驗 SRB385Db 佔 DAPI 面積百分比原始數據 (續)…………………………………………………………………………136
表十四 問題解決對策表…………………………………………137
表十四 問題解決對策表 (續) …………………………………138

參考文獻
1.Amann R. I., Ludwig W. and Schleifer K. “Phylogenetic indentification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation”, Microbiology Review, 59, pp. 143-169, 1995.
2.Beech I. B. and Cheung C. W. S. “Interactions of exopolymers produced by sulphate reducing bacteria with metal irons”, International Biodeterioration & Biodegradation, 35, pp. 59-72, 1995.
3.Booth G. H. and Mercer S. J. “Resistance to copper of some oxidizing and reducing bacteria”, Nature, 10, pp. 199-622, 1963.
4.Chang L. Y. “A waste minimixation study of a chelated copper complex in wastewater – treatability and process analysis”, Waste Management, 15, pp. 209-220,1995.
5.Chuichulcherm S., Nagpal S., Peeva L. and Livingston A. “Treatment of metal-containing wastewaters with a novel extractive membrane reactor using sulfate-reducing bacteria”, Journal of Chemical Technology & Biotechnology, 76, pp. 61-68, 2001.
6.Correia S. L., Hotza D., Segadaes A. M. “Simultaneous optimization of linear firing shrinkage and water absorption of triaxial ceramic bodies using experiments design”, Ceramicx International, 30, pp. 917-922, 2004.
7.Diels L., Spaans P. H., Roy S. V., Hooyberghs L., Ryngaert A., Wouters H., Walter E., Winters J., Macaskie L., Finlay J., Pernfuss B., Woebking H., Pumpel T. and Tsezos M. “Heavy metals removal by sand filters inoculated with metal sorbing and precipitating bacteria”, Hydrometallurgy, 71, pp. 235-241, 2003.
8.El Bayoumy M. A., Bewtra J. K., Ali H. I. and Biswas N. “Removal of heavy metals and COD by SRB in UAFF reactor”. Journal of Environmental Engineering, 125, pp. 532-539, 1999.
9.Elliott P., Ragusa S. and Catcheside D. “Growth of sulfate-reducing bacteria under acidic conditions in an upflow anaerobic bioreactor as a treatment system for acid mine drainage”, Water Research, 32, pp. 3724-3730, 1998.
10.Ensley B. D. and Suflita J. M. “Metabolism of environmental contaminants by mixed and pure cultures of sulfate-reducing bacteria”, In: Sulfate-reducing Bacteria (Edited by Barton, L.L.). Plenum Press, New York and London, pp. 293-332, 1995.
11.Esposito G., Weijma J., Pirozzi F. and Lens P. N. L. “Effect of the sludge retentiontime on H2 utilization in a sulphate reducing gas-lift reactor”, Process Biochemistry, 39, pp. 491-498, 2003.
12.Gan Q. “A case study of microwave processing of metal hydroxide sediment sludge from printed circuit board manufacturing wash water”, Waste Management, 20, pp. 695-701, 2000.
13.Gibert O., de Pablo J., Cortina J. L. and Ayora C. “Treatment of acid mine drainage by sulphate-reducing bacteria using permeable reactive barriers: A review from laboratory to full-scale experiments”, Re/Views in Environmental Science & Bio/Technology, 1, pp. 327-333, 2002.
14.Hao O.J., Huang L., Chen J.M. and Buglass R.L. “Effects of metal additions on sulfate reduction activity in wastewaters”, Toxicology Environmental Chemistry, 46, pp. 197-212, 1994.
15.Head I. M., Saunders J. R. and Pickup R. W. “Microbial Evolution, Diversity, and Ecology: A Decade of Ribosomal RNA Analysis of Uncultivated Microorganisms”, Microbial Ecology, 35, pp. 1-21, 1998.
16.Ito T., Nielsen J. L., Okabe S., Watanabe Y. and Nielsen P. H. “Phylogenetic identification and sbustrate uptake patterns of sulfate-reducing bacteria inhabiting an oxic-anoxic sewer biofilm determined by combining microautoradiography and fluorescent in situ hybridization”, Applied and Environmental Microbiology, 68, pp. 356-364, 2002.
17.Jong T. and Parry D. L. “Removal of sulfate and heavy metals by sulfate reducing bacteria in short-term bench scale upflow anaerobic packed bed reactor runs”, Water Research, 37, pp. 3379-3389, 2003.
18.Kolmert A. and Johnson D. B. “Remediation of acidic waste water using immobilised, acidophilic sulfate-reducing bacteria”, Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 76, pp. 836-843, 2001.
19.Labrenz M., Druschel G. K., Thomsen-Ebert T., Gilbert B., Welch S. A., Kemner K. M., Logan G. A., Summons R. E., Stasio G. D., Bond P. L., Lai B., Kelly S. D. and Banfield J. F. “Formation of sphalerite(ZnS) deposites in natural biofilms of sulfate-reducing bacteria”, Science, 209, pp. 1744-1747, 2000.
20.Lens P. N. L. and Hulshoff Pol L. “Environmental technologies to treat sulfur pollution”, IWA publishing, London, 2000.
21.Lock K. and Janssen C. R. “Mixture Toxicity of Zinc, Cadmium, Copper, and Lead to the Potworm Enchytraeus albidus”, Ecotoxicology and Environmental Safety, 52, pp. 1-7, 2002.
22.Nardi J. V., Acchar W. and Hotza D. “Enhancing the properties of ceramic products through mixture design and response surface analysis”, Journal of European Ceramic Society, 24, pp. 375-379, 2004.
23.Poulson S. R., Colberg P. J. S. and Derver J. I. “Toxicity of heavy metals (Ni, Zn) to Desulfovibrio desulfuricans”, Geomicrobiology Journal, 14, pp. 41-49, 1997.
24.Rabus R., Fukui M., Wilkes H. and Widdel F. “Degradative capacities and 16S rRNA-targeted whole-cell hybridization of sulfate-reducing bacteria in an anaerobic enrichment culture utilizing alkylbenzenes from crude oil”, Applied and Environmental Microbiology, 62, pp. 3605-3613, 1996.
25.Ravenschlag K., Sahm K., Knoblauch C., Jorgensen B. B. and Amann R. “Community structure, cellular rRNA content, and activity of sulfate-reducing bacteria in marine arctic sediments”, Applied and Environmental Microbiology, 66, pp. 3592-3602, 2000.
26.Saleh A. M., Macpherson R and Miller J. D. A., “The effect of inhibitors on sulfate reducing bacteria: a compilation”, Journal of Applied Bacteriology, 27, p. 281-293, 1964.
27.Shokes T. E. and Moller G. “Removal of dissolved heavy metals from acid rock drainage using iron metal”, Environmental Science & Technology, 33, pp. 282-287, 1999.
28.Stackebrandt E., Stahl D. A. and Devereux R. “Taxonomic relationships. In: Sulfate-reducing bacteria”. (Edited by L. L. Barton) Plenum Press, New York and London, pp. 49-87, 1995.
29.Tsukamoto T. K., Killion H. A. and Miller G. C. “Column experiments for microbiological treatment of acid mine drainage: low-temperature, low-pH and matrix investigations”, Water Research, 38, pp. 1405-1418, 2004.
30.Utgikar V. P., Chen B. Y., Chaudhary N., Tabak H. H. ,K Haines J. R. and Govind R. “Acute toxicity of heavy metals to acetate-utilizing mixed cultures of sulfate-reducing bacteria: EC100 and EC50”, Environmental Toxicology and Chemistry, 20, pp. 2662-2669, 2001.
31.Utgikar V. P., Harmon S. M., Chaudhary N., Tabak H. H., Govind R. and Haines J. R. “Inhibition of sulfate-reducing bacteria by metal sulfide formation in bioremediation of acid mine drainage”, Environmental Toxicology, 17, pp. 40-48, 2002.
32.Utgikar V. P., Tabak H. H., Haines J. R. and Govind R. “Quantification of toxic and inhibitory impact of copper and zinc on mixed cultures of sulfate-reducing bacteria”, Biotechnology and Bioengineering, 82, pp. 306-312, 2003.
33.Waybrant K. R., Blowes D. W. and Ptacek C. J. “Selection of reactive mixtures for use in permeable reactive walls for treatment of mine drainage. Environmental Science and Technology, 32, pp. 1972-1979, 1998.
34.Werner M., Wilkens L., Aubele M., Nolte M., Zitzelsberger H. and Komminoth P. “Interphase cytogenetics in pathology: principles, methods, and applications of fluorescence in situ hybridization (FISH)”, Histochemistry and Cell Biology, 108, pp. 381-390, 1997.
35.White C. and Gadd G. M. “An internal sedimentation bioreactor for laboratory-scale removal of toxic metals from soil leachates using biogenic sulphide precipitation”, Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 18, pp. 414-421, 1997.
36.White C., Sharman A. K. and Gadd G. M. “An integrated microbial process for the bioremediation of soil contaminated with toxic metals”, Nature Biotechnology, 16, pp. 572-575, 1998.
37.White C. and Gadd G. M. “Accumulation and effects of cadmium on sulphate-reducing bacterial biofilms”, Microbiology, 144, pp. 1407-1415, 1998.
38.高銘木，「利用真菌去除電鍍廢水中重金屬之應用研究」，國科會計畫編號：NSC83-0410-E006-025，民國八十四年。
39.高思懷，周錦東，「電聚浮除法處理廢水中重金屬銅之基礎研究」，國科會計畫編號：NSC 89-2211-E-009-061，民國八十九年。
40.蕭立鼎，蔡月珠，陳嘉和，「利用流體化床結晶方式處理含重金屬廢水之研究」，國科會計畫編號：NSC 90-2214-E-006，民國九十年。
41.張順欽，「含高濃度硫酸鹽廢水生物處理法之基礎研究」，國立交通大學，碩士論文，民國七十八年。
42.張維欽，「厭氧選種系統併除廢水重金屬之研究」，國科會計畫編號：NSC 87-2211-E-182-006，民國八十七年。
43.朱昱學，「節水善其事必先利其器」，節約用水季刊，Vol. 19，民國八十九年。
44.陳文懿，「硫酸鹽生物還原程序之基礎研究」，國立交通大學，碩士論文，民國七十七年。
45.蔡德華，「離子交換劑萃取分離重金屬之研究」，國科會計畫編號：NSC 89-2214-E-027-011，民國八十九年。
46.蘇慧慈，「原位分子生物學技術」，徐氏基金會出版，民國八十五年。
47.吳坤龍，「高溫厭養菌分解 PAN 廢水之族群變化與功能評估」，國立成功大學，碩士論文，民國九十二年。
48.吳世全，「電鍍銅製成之廢液處理」，奈米通訊，第七卷第一期，13~17 頁，民國八十九年。
49.王姮娟，蔡士昌，「重金屬廢水處理技術 (上)」，台灣環保產業雙月刊，第二十六期，16~18 頁，民國九十三年。