臺灣博碩士論文加值系統

喜樹(Camptotheca acuminata)，為特有的多年生落葉喬木，因其果實似蓮，又稱「旱蓮」。特產於中國大陸長江流域及南方各省區。全株內含喜樹鹼(camptothecin，CPT)，對血癌具有控制作用，臨床試驗並證實對腸癌治療有明顯功效；但因地理因素及氣候影響，生長品質不穩定，故本研究主要是希望利用癒合組織誘導技術，建立喜樹細胞株，繼而利用懸浮培養技術探討喜樹鹼的合成。
故本論文研究目的，為探討喜樹癒合組織培養之適合誘導及培養條件，作為日後懸浮培養誘導生產喜樹鹼的基礎研究。結果顯示以喜樹嫩葉及莖段為培植體，培養於含1mgL-1 BA及3mgL-1 2,4-D之MS培養基3週後，能順利誘導癒合組織生長。將癒合組織繼代於添加1 mgL-1 BA及1 mgL-1 NAA 的MS 培養基中，能獲得增生良好的癒合組織。懸浮培養方面，以添加1.5 mgL-1 BA及0.5mgL-1 NAA 的MS 培養基作為懸浮培養之條件，可獲得3.95 g/L良好癒合組織。CPT含量約為0.06(dry weight %)。

Camptotheca acuminata dence. is one of the unique perennial tree, fruit resembling the lotus. It grows in mainland China Yangtze valley and south various provincial capital areas. Camptothecin, one of its major metabolite, has the ability to control the leukemia. It has been confirmed that camptothecin has obvious effect on intestines cancer treatment. Depending on the geography factor and the weather effect, the content of camptothecin in tree is unstable, therefore the objective of the present investigation is to establish an Camptotheca acuminata dance. callus.

Callus induction was obtained by culturing leaves and stem segments on MS basal medium supplemented with 1 mgL-1 BA and 3 mgL-1 2,4-D for 3 weeks. The callus were maintained and proliferated on MS basal medium supplemented with 1 mgL-1 BA, 1 mgL-1 NAA. Suspension cells were cultured on MS basal liquid medium supplemented with 1 mgL-1 BA, 1 mgL-1 NAA on a rotation shaker in the light condition. After 4 weeks culture, the dry weight of cells was about 3.95 g/L and CPT content achieved about 0.06(dry weight %).

目錄

摘要………..……..………………………………………………………………..……I
目錄……….…………………………………………………………………………. III
表目錄……..…………………………………………………………………………VII
圖目錄……………...…………………………………….………………………….VIII


第一章 前言 ………………………………………………………………………………1
第二章 文獻回顧 …………………………………………………………………………2
2.1 喜樹 2
2.1.1 喜樹的地理分佈與繁殖現況 2
2.1.2 喜樹的基礎研究 3
2.2 喜樹鹼介紹 3
2.2.1 喜樹鹼的研究及應用 3
2.2.2 喜樹鹼抗癌作用機轉 4
2.2.3 喜樹鹼藥理作用及其毒性 7
2.2.4 喜樹鹼的臨床應用 7
2.3 喜樹鹼的生合成路徑 8
2.4 喜樹的栽培技術 13
2.5 植物組織培養定義及背景 13
2.5.1 喜樹之組織培養 14
2.6 組織培養褐化現象的產生與回應措施 16
2.7 植物細胞懸浮培養與二次代謝生產 18
第三章 材料與方法 ……………………………………………………………………..21
3.1 植物材料 21
3.2 試驗方法 21
3.2.1喜樹葉片及莖段表面消毒 21
3.2.2 培養基製備 21
3.3 癒合組織的誘導 22
3.3.1 實驗目的 22
3.3.2 培植體來源 22
3.3.3 實驗流程及步驟 22
3.3.3 培養環境 23
3.3.4 癒合組織鮮、乾重測定 23
3.4 懸浮培養系統的建立 23
3.4.1 實驗目的 23
3.4.2 培植體來源 23
3.4.3實驗流程及步驟 23
3.4.4 細胞乾重 25
3.4.5 喜樹鹼的測定 25
3.5 喜樹的萃取及分析 25
3.5.1 儀器設備 25
3.5.2 樣品配製 25
3.5.3 UV偵測波長的選擇 26
3.5.4 HPLC 分析條件 27
3.5.5 實驗藥品 28
第四章 結果 ……………………………………………………………………………..29
4.1 癒合組織的誘導 29
4.1.1 培植體殺菌條件的建立 29
4.1.2 植物生長調節劑的影響 29
4.1.3 喜樹鹼含量的測定 37
4.2 懸浮細胞系統的建立 42
4.2.1 細胞生長曲線 42
4.2.2 喜樹鹼含量測定 45
第五章 討論 ……………………………………………………………………………..50
5.1 喜樹癒合組織誘導與維持培養 50
5.2 懸浮培養 51
第六章 結論 ……………………………………………………………………………..52
參考文獻 …………………………………………………………………………………53

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