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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:宋美蘭
研究生(外文):Mei-Lan Sung
論文名稱:以NIH3T3作為脂肪細胞新生的體外模式
論文名稱(外文):NIH3T3 as an in vitro model of adipogenesis
指導教授:葉日弌葉日弌引用關係
學位類別:碩士
校院名稱:慈濟大學
系所名稱:人類遺傳研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2006
畢業學年度:94
語文別:中文
論文頁數:60
中文關鍵詞:脂肪新生胰島素阻抗糖尿病肥胖脂肪細胞分化
外文關鍵詞:RosiglitazoneC/EBPαInsulin3T3-L1NIH3T3PPARγadipogenesis
相關次數:
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摘要

3T3L1是ㄧ般常用來研究脂肪新生的過程的研究模式,3T3L1在經過適當的誘導分化下可以分化成脂肪細胞,但是它還存在一些實驗操作上的缺點如:不易轉染外源基因且無法持續表達,爲了解決這個問題我們選擇NIH3T3作為新的材料來研究脂肪新生的過程。
在過去的研究中指出,即使利用相同的方法來誘導NIH3T3還是無法使其分化成脂肪細胞,除非透過轉染與脂肪新生相關的重要基因如PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ和Krox20後才可以將NIH3T3誘導分化成脂肪細胞。所以我們模擬相同的實驗方法在NIH3T3轉染PPARγ、P467L(PPARγ的突變型)後再經過誘導其分化,在我們的實驗過程中發現未轉染PPARγ的NIH3T3也可以分化。
所以我們測試了不同的分化條件找出最適合NIH3T3分化的條件,也分別測試了分化後的NIH3T3脂肪細胞對外來基因的表達能力,也觀察外源基因是否會影響NIH3T3分化效率,利用胰島素之訊息傳遞基因晶片(Mouse Insulin Signaling Pathway Microarray)來分析相關基因的表現。
實驗結果發現以含有20%FBS的DMEM加入DEX、MIX和BRL所組成的分化培養液,可以達到最快且分化效率和3T3L1一樣好的培養條件,更可以持續穩定的表達外源基因直到分化完成後,且不會影響分化的效率,冀望此一體外培養脂肪細胞的新模式,可以提供研究脂肪新生另一個更好的材料。
目錄
目錄……………………………………………………………………………I
圖表目錄………………………………………………………………………II
摘要……………………………………………………………………………IV
緒論……………………………………………………………………………1
研究目的………………………………………………………………………9
研究方法與材料………………………………………………………………11
一、 3T3-L1 細胞株之培養…………………………………………………11
二、細胞繼代 ……………………………………………………………… 11
三、細胞分化…………………………………………………………………11
四、Oil red-O 染色法………………………………………………………12
五、NIH3T3 細胞株之分化 …………………………………………………13
六、NIH3T3 脂肪細胞RNA抽取 ……………………………………………14
七、反轉譯cRNA的合成 ……………………………………………………15
八、細胞的轉殖 (transfection) …………………………………………15
九、DAPI 螢光染色法 ………………………………………………………16
實驗結果………………………………………………………………………18
一、不同分化條件對於NIH3T3細胞在脂肪細胞分化的影響 ……………18
二、NIH3T3 細胞分化成脂肪細胞的基因表現 ……………………………20
三、於NIH3T3表現外源性基因pdsRED對細胞分化的影響………………23
討論……………………………………………………………………………26
參考文獻………………………………………………………………………29
實驗圖表………………………………………………………………………32



圖表目錄

圖一、NIH3T3 纖維母細胞分化成脂肪細胞……………………………………32
圖二、測試脂肪細胞分化條件的時間流程圖 …………………………………33
圖三、不同分化條件對NIH3T3 的影響…………………………………………34
圖四、以添加BRL的分化培養液進行7天的誘導分化後NIH3T3的分化
情形…………………………………………………………………………………35
圖五、以添加INS 的分化培養液進行7天的誘導分化後NIH3T3的分化
情形…………………………………………………………………………………36
圖六、以只含DEX/MIX的分化培養液進行7天的誘導,分化後NIH3T3的
分化情形……………………………………………………………………………37
圖七、以只含DEX/MIX的分化培養液進行14天的誘導,分化後NIH3T3的
分化情形……………………………………………………………………………38
圖八、以添加BRL的分化培養液進行14天的誘導分化後NIH3T3的
分化情形……………………………………………………………………………39
Table1、Genes Over-Expressed in NIH3T3 (BRL) vs. 3T3L1 adipocyte …………………………………………………………………………40
Table2、Genes Over-Expressed in 3T3L1 vs. NIH3T3 adipocyte (BRL) ………………………………………………………………………………41
Table3、Genes Over-Expressed in3T3L1 vs.NIH3T3 adipocyte (non-BRL) …………………………………………………………………………42
Table4、Genes Over-Expressed in NIH3T3 adipocyte (non-BRL) vs. 3T3L1 ………………………………………………………………………………43
Table5、Genes Over-Expressed in NIH3T3 adipocyte (BRL) vs. Mouse
Adipocyte …………………………………………………………………………44
Table6、Genes Over-Expressed in Mouse adipocyte vs. NIH3T3 adipocyte
(BRL)………………………………………………………………………………45
Table7、Genes Over-Expressed in NIH3T3 adipocyte (BRL) vs. NIH3T3
adipocyte (non-BRL) ……………………………………………………………47
Table8、Genes Over-Expressed in NIH3T3 adipocyte (non-BRL) vs. NIH3T3 adipocyte (BRL) …………………………………………………………………48
Table9、PPARγ在不同分化天數和條件以及不同脂肪細胞間的
表現量差異…………………………………………………………………………49
Table10、比較Slc2a1(GLUT1) 和Slc2a4(GLUT4)在不同分化天數和
條件以及不同脂肪細胞間的表現量之間的差異…………………………………49
圖九、以冷光偵測照相機(CCD camera) 所擷取之Superarray影像…………50
圖十、以冷光偵測照相機(CCD camera) 所擷取之Superarray影像…………51
圖十一、經轉染的dsRED 後的NIH3T3 之紅色螢光蛋白表現情形……………52
圖十二、轉染的dsRED 的NIH3T3 分化一周後之紅色螢光蛋白表
現情形………………………………………………………………………………52
圖十三、轉染的dsRED的NIH3T3分化二周後之分化和紅色螢光
蛋白表現情形………………………………………………………………………53
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