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研究生:葉錦靜
研究生(外文):Yeh Chin Ching
論文名稱:培養基種類與NaCl的濃度對舞菇發酵過程的菌絲體與胞外多醣的影響
論文名稱(外文):Effect of the media and NaCl concentration on mycelium growth and exopolysaccharide production of Grifola frondosa during submerged fermentation
指導教授:許孟博
學位類別:碩士
校院名稱:南台科技大學
系所名稱:生物科技系
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2007
畢業學年度:95
語文別:中文
論文頁數:69
中文關鍵詞:舞菇胞外多醣培養基種類多醣菌絲舞菇NaCl
外文關鍵詞:Grifola frondosexopolysaccharideNaCl
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摘 要
舞菇(Grifola frondosa)屬於食用菇,除了本身的食用價值外,也兼具有藥理功能。舞姑證實具有抗腫瘤, 抗發炎, 抗氧化, 降血糖, 降血脂和具免疫刺激活力等多種功能。本研究使用液態發酵培養舞姑,探討不同培養條件的對液態培養的舞菇的菌絲體生長與胞外多醣生成的影響。並以不同培養時程加入不同濃度的NaCl對舞菇的胞外多醣是否有影響,並分析胞外多醣的分子量分佈情形。
結果顯示,舞菇在搖瓶實驗的培養基中分別添加葡萄糖10g/L、20g/L、40g/L,與選擇馬鈴薯萃取液、malt extract與糙米萃取液為基質的培養液,在25℃,轉速100rpm,發酵二十一天的過程中,其單位菌絲產生最多胞外多醣的添加濃度為葡萄糖20g/L;而最適菌絲體的生長為葡萄糖40g/L;最佳基質的選擇為馬鈴薯萃取液為基質的培養液。
討論在不同培養時程(第3天、第6天、第9天),加入不同濃度NaCl濃度(0g/L、0.5g/L、1g/L、3g/L、5g/L、7g/L、9g/L)後對於舞菇菌絲生長與胞外多醣的影響。結果發現舞菇菌絲部份,對照組在第21天菌絲量達最高量,之後開始下降。而在不同天數加入0.5g/L NaCl的菌絲量皆比對照組還多,表示0.5g/L NaCl濃度有助菌絲生長。而當NaCl濃度大於或等於1g/L 時,菌絲量皆低於對照組,顯示NaCl濃度太高則不利菌絲生長。而胞外多醣部份,對照組胞外多醣有8.81 g/L,除了第3天加入0.5g/L NaCl與9g/L NaCl及第9天加入9g/L NaCl的胞外多醣各別為10.33 g/L與10.30 g/L及10.46 g/L外,其餘加入不同濃度NaCl的胞外多醣量都低於對照組。
在舞菇胞外多醣的分子量方面,分析發酵液中之多醣分子量,在發酵初期由單一分子量組成(約1萬左右),到發酵後期則變為4種主要分子量所組成,分別是約50萬、10萬、4萬與4800,其中加入9g/L NaCl者雖較不利菌絲之生長,但卻可刺激產生較多的多醣,其單位菌絲量所產生的多醣量遠較加其他NaCl濃度者為高,值得再加以探討。
ABSTRACT
Grifola frondosa is an eatable fungus which can also be used for pharmaceutical purposes. It contains biologically active compounds that can be utilized as anti-tumor, anti-inflammation, anti-oxidation, hypolipidemic and hypoglycemic agents. This research studied submerged culture of Grifola frondosa under different media compositions for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides. In addition, the effect of introducing NaCl into the medium werealso examined. The molecular weight distribution of the produced exopolysaccharides were analyzed by GPC.
The result of 21-days-long cultivation process of Grifola frondosa under different combination of glucose concentrations(10, 20, 40 g/L) and basic media(potato, malt and unpolished rice extracts) showed that the potato extract is the best basic medium either for the mycelial growth or for the exopolysaccharide production. The richest mycelial biomass can be obtained with 40 g/L of glucose while the cultivation with 20 g/L of glucose produced largest amount of exopolysaccharide.
To examine the effect of NaCl addition on the mycelial growth and exopolysaccharide production, different concentration ofNaCl ( 0, 0.5, 1, 3, 5, 7, 9 g/L) added at different period of cultivation( the 3rd, 6 th and 9 th day) were performed. The results indicated that a low dosage of NaCl (0.5 g/L) is beneficial for mycelial growth while high dosage of NaCl( 9 g/L) will inhibit mycelial growth in the early stage of cultivation but can stimulate the production of exopolysaccharide in the later stage(10.46 g/L). Based on these results, a two stage NaCl addition was conducted, that is 0.5 g/L of NaCl was added at the 3 rd day and 9 g/L of NaCl was added at the 9 th day of cultivation, and the cultivation result of two stage NaCl addition produced the largest amount of exopolysaccharide(11.41 g/L).
目  次
中文摘要 iv
英文摘要 v
誌謝 vi
目次 vii
表目錄 ix
圖目錄 x
第一章 前言 1
第二章 文獻回顧 3
2-1、舞菇簡介 3
2.2、舞菇的一般營養與風味成分分析 4
2-1.1、一般化學成分 4
2-1.2、游離胺基酸 5
2-1.3、有機酸 7
2-1.4、游離醣類 5
2-1.5、脂質 8
2-1. 6、無機鹽類 9
2-3、舞菇的多醣體的機能性 10
2-3.1、抗癌、抗腫瘤作用 11
2-3.2、抗UV作用與美容方面 14
2-3. 3、舞菇多醣的其他藥理作用 17
2-4、舞菇之培養 18
2-4.1、舞菇之固態培養 18
2-4.2、舞菇之液態培養 20
第三章、研究材料與方法 24
3-1、舞菇菌種 24
3-2、實驗藥品 24
3-3、實驗器材 24

3-4、菌種的活化 25
3-5、搖瓶接種 25
3-6、不同液態培養基對舞菇的生長影響 25
3-7、NaCl的濃度比較與加入天數的探討 27
3-8、實驗流程 28
3-9、實驗分析方法 29
3-9.1、菌絲體與發酵液之生物質量 29
3-9.2、測定pH值 29
3-9.3、胞外多醣的收集與備製 29
3-9.4、酚硫酸法 29
3-9.5、 GPC分析條件 30
3-9.6、數據分析 30
第四章、結果與討論 31
4-1、培養基組成的影響 31
4-1.1、碳源的影響 31
4-1.2、探討KH2PO4的是用量對胞外多醣的影響 35
4-1.3、氮源的影響 39
4-1.4、不同葡萄糖量malt培養液影響 42
4-1.5、不同葡萄糖量糙米培養液影響 45
4-2、 以不同濃度NaCl添加對舞菇菌絲與胞外多醣的影響 48
4-2.1、.培養液加入不同濃度的NaCl(0g/L、3g/L、7g/L) 48
4-2.2、不同培養時程(第3天、第6天、第9天),加入不同濃度NaCl (0g/L、0.5g/L、1g/L、3g/L、5g/L、7g/L、9g/L)後對於舞菇菌絲生長與胞外多醣影響 51
4-2.3、對照組(0g/L NaCl)與第九天加入(9g/L NaCl)濃度的生長 56
4-2.4、兩階段添加不同濃度NaCl舞菇菌絲量與胞外多醣的影響 59
第五章、結論 62
第六章、參考文獻 63


表目錄
表一、舞菇子實體和菌絲體之ㄧ般成分 5
表二、舞菇子實體與深層發酵菌絲體胺基酸組成與含量分析 6
表三、舞菇子實體的5’-Nucleotides的含量組成 7
表四、舞菇子實體與深層發酵菌絲體中微量元素的含量 10
表五、從舞菇液態發酵生產的三種不同多醣的特性 15
表六、舞菇從不同的培養液的液態發酵所產生不同五種不同部分的多醣特性分析 16
表七. 人工栽培子實體 18
表八、以靈芝為例進行不同培育方式之比較 21
表3-6、液態培養配方 25






























圖目錄
圖2-1.有抗腫瘤活性的具β-(1→6)分支的β-(1→3)-D-葡聚醣結構 11
圖2-2. β-D 葡聚醣系多醣體的抗腫瘤作用之可能機制 13
圖3-1.葡萄糖標準曲線(Glucose standard curve) 30
圖4-1.葡萄糖重量不同的馬鈴薯培養液的pH比較 32
圖4-2.葡萄糖重量不同的馬鈴薯培養液的菌絲量(biomass)比較 33
圖4-3.葡萄糖重量不同的馬鈴薯培養液的胞外多醣量比較 34
圖4-4.配方:45.2g/L glucose+6.58g/L peptone+2.97g/L KH2PO4+1g/L MgSO4的生長曲線比較 36
圖4-5.配方:glucose58.6g/L,peptone 3.79g/L,KH2PO4 4.06g/L,MgSO4 的生長曲線比較 37
圖4-6.葡萄糖20g/L的馬鈴薯培養液在不同KH2PO4用量的pH比較 37
圖4-7.葡萄糖20g的馬鈴薯培養液在不同KH2PO4重量的biomass比較 38
圖4-8.葡萄糖20g的馬鈴薯培養液在不同KH2PO4重量的exopolysaccharide比較 38
圖4-9.不同葡萄糖量添加2g/L peptone其pH的培養液比較 40
圖4-10.不同葡萄糖量添加2g/L的peptone其biomass的培養液比較 40
圖4-11.不同葡萄糖量添加2g/L peptone exopolysacharid的培養液比較 41
圖4-12.不同葡萄糖量的malt培養液的pH比較 43
圖4-13.不同葡萄糖量的malt培養液的biomass比較 43
圖4-14.不同葡萄糖量的malt培養液的exoploysaccharid比較 44
圖4-15.不同葡萄糖量的100g/L糙米培養液的pH比較 46
圖4-16.不同葡萄糖量的100g/L糙米培養液的biomass比較 47
圖4-17.不同葡萄糖量的100g/L糙米培養液的exoploysaccharid比較 47
圖4-18.為配方2馬鈴薯培養液調整不同濃度的NaCl的發酵歷程的pH變化 49
圖4-19.為配方2馬鈴薯培養液調整不同濃度的NaCl的發酵歷程的biomass變化 49
圖4-20.為配方2馬鈴薯培養液調整不同濃度的NaCl的發酵歷程的exopolysaccharide變化 50
圖4-21.對照組(0g/L NaCl)的生長曲線 51
圖4-22.不同天數加入不同濃度NaCl在第21天採樣比較biomass 53
圖4-23.不同天數加入不同濃度的NaCl在第21天採樣比較的exopolysaccharide 53
圖4-24. 不同天數加入不同濃度的NaCl在第21天採樣對照組(0g/L NaCl)的第0 天的培養液GPC分析圖形 54
圖4-25. 不同天數加入不同濃度的NaCl在第21天採樣培養第21天時,對照組,0.5g/L NaCl在第3天添加與第9天添加時,胞外多醣之GPC分析圖形 55
圖4-26. 不同天數加入不同濃度的NaCl在第21天採樣培養第21天時培養第21天時,對照組,9g/L NaCl在第3天添加與第9天添加時,其比較胞外多醣之GPC分析圖形 55
圖4-27. 對照組(未添加 NaCl)與第9天再加入9g/L NaCl之後的生長曲線pH比較分析圖 57
圖4-28. 對照組(未添加NaCl)與第9天再加入9g/L NaCl發酵液的生長曲線biomass比較分析圖 57
圖4-29. 對照組(未添加NaCl)與第9天再加入9g/L NaCl發酵液的生長曲線exoploysaccharide比較分析圖 58
圖4-30.兩階段(第三天加入0.5g/L NaCl,在第9天再加入9g/L NaCl)的生長曲線pH比較分析圖 60
圖4-31.兩階段(第三天加入0.5g/L NaCl,在第9天再加入9g/L NaCl)的生長曲線biomass比較分析圖 61
圖4-32.兩階段(第三天加入0.5g/L NaCl,在第9天再加入9g/L NaCl)的生長曲線exoploysaccharide比較分析圖
附錄一:分子量檢量線(Calibration curve for M.W) 69
第六章、參考文獻
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