臺灣博碩士論文加值系統

黃耆是常見的中藥，具有促進淋巴細胞增生、免疫調節、抗癌活性和抗肝損傷等功能。本研究即利用黃耆當作培養基以蛹蟲草當作菌種進行發酵，期望得到具有抗癌活性之發酵產品。結果顯示相較於化學合成培養基，以黃耆當作培養基之發酵濾液擁有較高之抗癌活性，其抑制癌細胞生長能力（IC50）對人類胃癌細胞AGS、人類乳癌細胞MCF-7、人類肝癌細胞Hep G2和老鼠大腸癌細胞CT26分別為465、37、25 和20 μg/mL。進一步以CT26接種於BALB/c小鼠之動物模式來評估抗癌活性，實驗結果指出相較於控制組，當每天以管餵方式餵食100 mg/kg BW/day和200 mg/kg BW/day劑量時，可以有效抑制腫瘤的體積達43.81 %和48.89 %，而腫瘤重量的抑制率方面分別為31.21 %和39.48 %，皆能有效的抑制腫瘤生成。此外，發酵濾液在動物實驗過程中並無發現對於小鼠臟器有任何明顯的副作用。在成分分析方面，結果顯示，黃耆皂苷、黃耆異黃酮皆非主要抗癌活性來源，接著以HPLC進行分離純化後，發現波鋒2與蟲草素組合時具有最好的抗癌活性表現。

Radix astragalus is widely used in China. Radix astragalus was demonstrated to have various bioactivities such as lymphocyte proliferation, immune-regulation, anti-tumor activity, and anti-liver injury. This study used Radix astragali (RA) as the medium for culturing Cordyceps militaris to investigate the anti-tumor activity of the fermentation broth. It was found that the product from culturing C. militaris in RA medium had a better anti-tumor activity than that culturing in synthetic medium. The fermentation broth inhibited the growth of four tumor cells including human gastric cancer AGS cells, human breast cancer MCF-7 cells, human hepatocellular carcinoma Hep G2 cells and murine colorectal adenocarcinoma CT26 cells with IC50 465μg/mL, 37μg/mL, 25μg/mL, and 20μg/mL, respectively. To validate the anti-tumor activity, the BALC/c mice were implanted with CT26 cells and then fed with various dosages of the fermentation product. It was found that 20 mg/kg body weight (BW)/day group had no significant anti-tumor activity as compared to the control group. The dosage of 100 mg/kg BW/day and 200 mg/kg BW/day group inhibited the tumor volume by 43.81% and 48.89%. Tumor weight was also reduced by 31.21% and 39.48% compared to the control group. Besides, the fermentation broth didn’t impose serious side effect on the vital organs of the mice as compared to the chemotherapeutic drug 5-FU. After constituent analyses, the results showed that saponins and isoflavonoids of Astragalus were not the major anti-tumor components. Through HPLC isolation, when cordycepin combined with peak 2 had the strongest anti-tumor activity.

中文摘要---------------------------------------------- I
英文摘要---------------------------------------------- II
第一章 文獻回顧--------------------------------------- 1
第一節 黃耆簡介--------------------------------------- 1
第二節 黃耆的化學成分--------------------------------- 1
（一） 多醣------------------------------------------- 1
（二） 皂苷------------------------------------------- 2
（三） 黃酮類----------------------------------------- 5
第三節 黃耆的生理活性--------------------------------- 6
（一） 對免疫系統的影響------------------------------- 6
（二） 抗癌效果--------------------------------------- 7
（三） 對心血管疾病的作用----------------------------- 8
（四） 對於肝功能的作用------------------------------- 9
（五） 抗衰老作用------------------------------------- 10
（六） 對中樞神經系統的作用--------------------------- 10
（七） 對內分泌系統的影響----------------------------- 10
第四節 冬蟲夏草簡介----------------------------------- 11
第五節 冬蟲夏草之成分--------------------------------- 11
第六節 冬蟲夏草之生理功能----------------------------- 12
（一） 對免疫功能的影響------------------------------- 12
（二） 抗腫瘤作用------------------------------------- 13
（三） 對心血管系統的影響----------------------------- 14
（四） 保肝作用--------------------------------------- 14
（五） 對新陳代謝的影響------------------------------- 15
（六） 對內分泌的影響--------------------------------- 16
（七） 對中樞神經系統的作用--------------------------- 16
第七節 冬蟲夏草之培養--------------------------------- 17
第二章 實驗目的--------------------------------------- 18
第三章 材料與方法------------------------------------- 20
第一節 實驗材料--------------------------------------- 20
第二節 實驗方法--------------------------------------- 22
（一） 蛹蟲草之發酵培養------------------------------- 22
（二） 發酵樣品之製備--------------------------------- 23
（三） 細胞實驗方法----------------------------------- 23
（四） 動物實驗方法----------------------------------- 28
（五） 成分萃取與分析--------------------------------- 29
（六） 統計分析--------------------------------------- 31
第四章 結果與討論------------------------------------- 32
第一節 發酵條件的探討--------------------------------- 32
（一） 震盪式培養蛹蟲草------------------------------- 32
（二） 以YM broth/黃耆培養蛹蟲草---------------------- 33
（三） 靜置式培養蛹蟲草------------------------------- 34
（四） 培養條件對蛹蟲草發酵濾液抑癌活性之影響--------- 40
（五） 蛹蟲草發酵黃耆培養基與合成培養基之比較--------- 44
第二節 蛹蟲草黃耆發酵濾液對於肝癌細胞生長抑制機制探討- 47
第三節 蛹蟲草黃耆發酵液於動物模式中抗癌活性之探討----- 49
（一） 蛹蟲草發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠預實驗，蛹 蟲草黃耆發酵液對於CT26癌細胞之IC50-------------------- 49
（二） 蛹蟲草黃耆發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠體重之影響---------------------------------------------------50
（三） 蛹蟲草黃耆發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠血液中白血球之影響------------------------------------------ 51
（四） 蛹蟲草黃耆發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠脾臟之影響---------------------------------------------------52
（五） 蛹蟲草黃耆發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠內臟之影響---------------------------------------------------54
（六）蛹蟲草黃耆發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠腫瘤體積之影響------------------------------------------------ 55
（七）蛹蟲草黃耆發酵液對於接種CT26癌細胞之BALB/c小鼠腫瘤重量之影響------------------------------------------------ 56
第四節 蛹蟲草發酵對於活性成分變化之影響--------------- 57
（一） 黃耆皂苷之變化--------------------------------- 57
（二） 黃耆異黃酮之變化------------------------------- 61
（三） 發酵濾液中蟲草素之變化------------------------- 64
（四） 發酵濾液中主要活性成分之分離------------------- 67
第五章 結論------------------------------------------- 70
第六章 參考文獻--------------------------------------- 71

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