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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:陳文奇
研究生(外文):Wen-Chi Chen
論文名稱:雷射顯微摘取於細菌分離之研究
論文名稱(外文):Bacterium Isolation Using Laser Capture Microdissection
指導教授:陳建銘陳建銘引用關係
口試委員:王正賢陳世銘
口試日期:2008-07-18
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺北科技大學
系所名稱:光電工程系研究所
學門:工程學門
學類:電資工程學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2008
畢業學年度:96
語文別:中文
論文頁數:59
中文關鍵詞:雷射顯微摘取光纖探針近場光學
外文關鍵詞:Laser Capture Microdissection(LCM)near field fiber probebacterium isolation
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本研究中,我們將光纖探針式LCM系統架于一倒立式顯微鏡上,幷在顯微鏡的視野監視下進行細菌樣本的分離研究。細菌在微生物學中是十分重要的研究對象,由于無法用肉眼直接觀察其形態,因此其研究方法有獨特之處。此次先採用已分離、純化好的海洋菌Acinetobacter venetianus來做摘取、以驗證奈米級光纖探針式LCM系統可應用于海洋菌種的分離上。
此次實驗我們將LCM系統架設于顯微鏡上幷將欲摘取的杆菌做螢光染色後固定于玻片上。利用螢光使桿菌在顯微鏡中可清楚觀察。再使用顯微鏡對桿菌做觀察、定位的動作。摘取進行之前,需先將菌種樣本進行染色以利於觀察。實驗發現只有進行革蘭氏染色的細菌,在摘取後幷沒有辦法在顯微鏡的視野下進行觀察。因此將革蘭氏染色後的菌類樣本再進行DAPI螢光染色方便摘取後可以看出細菌樣本是否有被摘取成功。實驗結果發現在大小約為1.0μm 的球杆菌,在雷射探針距離薄膜小于1.0μm的情形下雷射需要觸發至少400ms才可以初步的將細菌摘取分離出
Bacterial cultures are very important study issues in microbiology. Human can’t
observe bacterial cultures by naked eyes, thus, the way to study bacterial cultures is totally unique. In traditional, to study unknown bacterial cultures must purify the target bacterium from complex sample conditions. In nature, bacterial cultures are mixed and coexisted. There are among of 99% of the sea bacterial cultures can’t be isolated by culture. In this study, we use laser capture microdissection to isolated a sea bacterial culture, named acinetobacter venetianus which already had been well purified by culture, and to ensure that LCM system can be used in bacterial cultures isolation. we set up LCM system on a headstand microscope, and isolate bacterial cultures under microscope view. Before isolation, we dye bacterial samples easier to be observed. We find out bacterium has been Gram’s dyed can’t be observed on translated film after isolaed in microscope view. Thus, we add DAPI on Gram’s dyed sample and redo experience again. In this study, we discover that bacterial cultures about 1μm in size can be isolated and observed under the condition that the distance between laser probe and film less than 1.0μm and laser light must irradiate translate film more than 400ms
中文摘要...........................i
英文摘要...........................ii
誌謝...............................iii
目錄...............................iv
表目錄.............................vi
圖目錄.............................vii
第一章 緒論 ......................1
1.1引言.......................1
1.2菌種分離方式...............2
1.2.1 細菌分離培養法.......2
1.2.2 毛細管電泳法.........6
1.2.3 雷射顯微摘取.................7
1.3研究動機與目的.............11
1.4論文架構...................13
第二章 細菌樣本特性與製備.........14
2.1菌種選擇...................14
2.2菌類樣本保存與處理.........16
2.3玻片的處理.................17
2.4本章摘要...................18
第三章 系統組成...................19
3.1原理.......................19
3.2系統元件...................22
3.2.1 機構單元.....................22
3.2.2 光學單元.....................22
3.2.3 電子單元.....................23
3.3系統架設...................24
3.2.1 探針的移動...................27
3.4本章摘要........................29
第四章 細菌染色與摘取.............30
4.1細菌摘取與雷射觸發時間尋找.30
4.2樣本染色...................33
4.2.1 革蘭氏染色原理...............33
4.2.2 染色步驟.....................34
4.3摘取後樣本觀察.............38
4.3.1 革蘭氏染色菌種摘取後觀察轉移薄膜...38
4.3.2 DAPI染色菌種摘取後觀察轉移薄膜....45
4.4本章摘要.................................52
第五章 結論及展望...............................53
5.1結論.....................................53
5.2未來展望.................................54
參考文獻.........................................55
附錄
A 與本論文相關之研討會發表.................56
[1] J. M. Becker, G. A. Caldwell, Eve Ann Zachgo “Biotechnology A Laboratory Course”,臺北市:藝軒圖書出版社,1994,p20-p60.
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[8]Jasco, Near-Field Probes, Tokyo: Jasco, 2003. (http://www.jascoint.co.jp/)
[9] 顏畿府,利用近場光纖探針做奈米級雷射顯微摘取系統之開發,碩士論文,
國立臺北科技大學光電所,2005。
[10]PI, "PZT Flexure NanoPositioners", Karlsruhe: PI, 2001. (http://www.pi.ws)
[11]Piezosystem Jena, Compact one dimensional translation stages , Jena: Piezosystem Jena, 2004. (http://www.piezojena.com)
[12] LECC Technology, Laser Diode, C. Li: LECC Technology, 2004.
(http://www.lecc.com.tw)
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