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研究生:吳孟燕
研究生(外文):Meng-Yan Wu
論文名稱:酵素免疫分析套裝試劑特性的探討—愷他命及丁基原啡因
論文名稱(外文):Performance characteristics of ELISA kits for monitoring ketamine and buprenorphine exposure
指導教授:黃美涵黃美涵引用關係
指導教授(外文):Mei-Han Huang
學位類別:碩士
校院名稱:輔英科技大學
系所名稱:醫事技術系碩士班
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學技術及檢驗學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2009
畢業學年度:97
語文別:中文
論文頁數:115
中文關鍵詞:酵素免疫分析愷他命丁基原啡因氣相層析質譜儀
外文關鍵詞:Enzyme immunoassaysketaminebuprenorphineGC-MS
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市售的各種酵素免疫分析套裝試劑應用於藥檢的初步篩檢,所需設
備簡便,且適用於中等檢體數量,因此,廣被採用。近年來,台灣新興藥物氾濫,所以大量尿液樣品的檢驗,有必要以最有效的 "免疫法/GC-MS " 兩段方式進行。於是,我們選了一個在台灣氾濫最快,也是俱樂部中常見的新興濫用藥物 — 愷他命 (ketamine) 及近年來被使用於海洛因 (heroin) 成癮者的治療藥物 — 丁基原啡因 (buprenorphine) 當做此論文的研究對象。本研究依試劑製造商所提供之方法評估酵素免疫分析套裝試劑的反應特性,包含靈敏度、交互反應性(針對代謝物、結構類似物)、特異性等,並將其檢測數據與 GC-MS 方法檢測待測藥物(及其他代謝物)之結果,建立此二分析方法檢出數據的關聯性。進而依此關聯性,探討建立酵素免疫分析法與 GC-MS 法判定 "陰/陽性" 反應結果相對應閾值的可行性。最終目的在於訂定酵素免疫分析法的合理閾值,而與 GC-MS 方法建立一個有效的檢驗流程。在愷他命部分, IDS 套裝試劑對於其代謝物 (norketamine 與 dehydronorketamine) 有較明顯的交互反應值,而呈現較低特異性,因而對臨床尿液檢體會呈現較高敏感度。相對來說, Neogen 試劑對於愷他命之代謝物交互反弱,所以對於愷他命的檢驗特異性較佳,其與 GC-MS 對應之關聯性約為 110–120 比 100 ng/mL。如果純以愷他命為檢測標的物,則此試劑極適合與 GC-MS 法配合,應用於尿液樣品中愷他命檢驗的初步篩檢。在丁基原啡因的部份,丁基原啡因在人體內會經由 N-端去烷化反應 (N-dealkylation),代謝成去烷基丁基原啡因 (norbuprenorphine),進而與醣基結合而成醣基化物。此四種藥物/代謝物的有效分析有助於治療的執行與藥效的瞭解。來自 Neogen、IDS、IMS、Diagnostix 產品的檢量線範圍大概是 0–7 ng/mL; 來自 Microgenics CEDIA 大概是 0–80 ng/mL。後者之檢量線範圍較寬,可減少檢體稀釋之必要性。所有試劑均對結構相似物 (如morphine 等) 無明顯的反應。套裝試劑中,對於代謝物 buprenorphine glucuronide 有較明顯的交互反應者, 包括Neogen 、IDS 、Diagnostix 與 CEDIA 產品。IMS 試劑則是對
norbuprenorphine 有明顯的反應。 CEDIA 與 GC-MS 檢測數據之對應關聯性較好, 故 CEDIA 適用於大量尿液樣品的檢測。如將
buprenorphine GC-MS 的閾值定在 50 ng/mL, CEDIA 的相對應閾值則在 60 ng/mL。
Immunoassays (IAs), sensitive with no sample pretreatment
requirement, are commonly used as the preliminary test method in drug testing. Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), a conveniently packaged form of IA, for ketamine (the most popular new drug of abuse in Taiwan) and buprenorphine (an agent for treating heroin addiction) from
various sources were studied for their performance characteristics and suitability in pairing with GC-MS for effective application in workplace drug testing programs.
Following studies on the cross-reacting and calibration characteristics of commercially available IAs, those found favorable were applied to the analysis of urine specimens.
ELISA for ketamine from International Diagnostic Systems (IDS) was found to respond significantly to the metabolites of ketamine (norketamine and dehydronorketamine), while the reagent from Neogen responded very specifically to ketamine. Test data derived from the latter reagent exhibited better correlation with the ketamine concentration as determined by GC-MS; thus, it can be more reliably used as the preliminary test method in the 2-step approach, now routinely adapted in workplace drug testing programs. Using 100 ng/mL ketamine as the GC-MS cutoff, the corresponding ELISA cutoff value is approximately 110–120 ng/mL.
All ELISA and one analyzer-based immunoassay for buprenorphine included in this studied exhibited low cross-reactivity toward opioids, such as morphine, codeine, hydrocodone, hydromorphone, and oxycodone. However, they showed dissimilar cross-reactivities toward different
buprenorphine metabolites, resulting in better correlation to the concentrations of different analytes as determined by GC-MS. Responses derived from three ELISA and the analyzer-based IAs were found to correlate to the total concentration of buprenorphine (buprenorphine plus buprenorphine glucuronide), while the response of ELISA from Immunalysis was found to correlate with the concentrations of buprenorphine plus norbuprenorphine. The analyzer-based IA exhibits a wider calibration range and higher sensitivity. This product was studied further and found to generate an apparent concentration of approximately 60 ng/mL for specimens containing 50 ng/mL of buprenorphine.
第一章 緒論 1
1-1、背景 1
1-2、愷他命、丁基原啡因的簡介、作用機轉及代謝 4
1-3、有關愷他命、丁基原啡因分析的文獻探討 7
1-4、研究目的 9

第二章、實驗方法 15
2-1、酵素免疫分析法分析步驟 15
2-1-1、藥品、材料、試劑與樣品 15
2-1-2、愷他命酵素免疫分析法分析步驟 16
2-1-3、丁基原啡因酵素免疫分析法分析步驟 17
2-2、確認檢驗方法與步驟 17
2-2-1、設備與試劑的配製 17
2-2-2、樣品的前處理 18
2-2-3、萃取方法 19
2-2-4、衍生方法 20
2-2-5、Ketamine、 norketamine、dehydronorketamine 氣相層析質譜儀分析步驟 20
2-2-6、Buprenorphine、norbuprenorphine 氣相層析質譜儀分析步驟 21

第三章、結果與討論—Ketamine 酵素免疫分析法 25
3-1、愷他命酵素免疫分析法評估 25
3-1-1、檢量線的特性 25
3-1-2、交互反應特性評估 26
3-1-3、基質的不同對檢測結果的影響 27
3-1-4、反應時間的長短對檢測結果的影響 27
3-2、ELISA 與 GC-MS 所測濃度之間的關聯性 28
3-2-1、利用 IA 與 GC-MS 檢測結果選擇合適的 ELISA 套組 28
3-2-2、利用 IA 與 GC-MS 檢測結果的關聯性選擇合適 GC-MS 分析標的物 30

第四章、結果與討論—Buprenorphine 酵素免疫分析法 43
4-1、丁基原啡因酵素免疫分析法評估 43
4-1-1、檢量線的特性 43
4-1-2、交互反應特性評估 44
4-2、ELISA 與 GC-MS 濃度之間關聯性 44
4-2-1、評估檢體的選擇 44
4-2-2、利用 IA 交互反應特性選擇合適的 GC-MS 分析標的物 45
4-2-3、IA 和 GC-MS 閾值的選擇 47

第五章、參考文獻 59

附錄、在期刊已發表或即將發表之論文 65
1. Huang M-H, Wu M-Y, Tsai J-L, Lee H-W, Wu C-H, Liu RH*:
Performance Characteristics of ELISAs for Monitoring Ketamine Exposure; Clin Chim Acta 379(1/2):59–65; April 2007.
2. Wu M-Y, Wang Y-S, Lin C-C, Lin D-L, Su L-W, Huang M-H*,
Liu RH*: An Empirical Study on the Selection of Analytes and Corresponding Cutoffs for Immunoassay and GC-MS in a
Two-Step Test Strategy—Buprenorphine Example; Analyst (in
press).
3. Wu M-Y, Chen B-G, Chang CD, Huang M-H, Wu T-G, Chang
D-M, Lee Y-J, Wang H-C, Lee C-I, Chern C-L*, Liu RH*: A
Novel Derivatization Approach for Simultaneous Determination of Glyoxal, Methylglyoxal, and 3-Deoxyglucosone in Plasma by Gas Chromatography-Mass Spectrometry; J Chromatogr A 1204(2):81–86; Sept. 2008.

圖目錄
圖 1-1、 愷他命在人體的代謝途徑 11
圖 1-2、 丁基原啡因在人體的代謝途徑 12
圖 1-3、 ELISA 競爭法原理 13
圖 1-4、 CEDIA 分析原理:檢體中無待測物(a)及有待測物(b)時之反應 14
圖 3-1、 IDS (a) 和 Neogen (b) 套裝試劑檢量線特性 32
圖 3-2、 Neogen 套裝試劑基質不同的檢量線特性:廠商提供溶液 (a, c),尿液 (b) 33
圖 3-3、 Neogen 套裝試劑反應時間長短的檢量線特性:45 分鐘 (a, b),40 分鐘 (c) 34
圖 3-4、 以 PFB 衍生 K、NK 和 DHNK 所得產物之氣相層析圖 35
圖 3-5、 以 PFB 衍生 K、NK、K-d4、NK-d4 與 DHNK 所得產物 K-PFB (a-1)、K-d4-PFB (a-2) 、NK-PFB (b-1)、NK-d4-PFB (b-2) 與 DHNK-PFB (c) 的質譜圖 36
圖 3-6、 IDS、Neogen 套裝試劑所呈現 K 與 GC-MS K 濃度間的關聯性,其檢量線範圍為 0–800 ng/mL 37
圖 3-7、 Neogen 套裝試劑所呈現 K 與 GC-MS 濃度間的關聯性,其檢量線範圍為 0–300 ng/mL 38
圖 3-8、 IDS 套裝試劑所呈現 K 的濃度與 GC-MS "K + NK" 總濃度間的關聯性 39
圖 4-1、四組 Buprenorpine 套裝試劑檢量線特性:Neogen (a)、IDS-B (b)、Immunalysis (c) 與 Diagnostix (d); I: 以 [ng/mL] 濃度標示之檢量線;II: 以 log [ng/mL] 濃度標示之檢量線 49
圖 4-2、 CEDIA buprenorphine 試劑檢量線特性 50
圖 4-3、 以 acetyl anhydride 衍生 B、B-d4、NB 和 NB-d3 所得產物之氣相層析圖 51
圖 4-4、 以 acetyl anhydride 衍生 B、B-d4、NB 和 NB-d3 所得產物 B-acetyl (a-1)、B-d4-acetyl (a-2)、NB-di-acetyl (b-1)、NB-d3-di-acetyl (b-2) 的質譜圖 52
圖 4-5、四組免疫分析套裝試劑所呈現 B 之濃度與 GC-MS B 濃度間的關聯性: Diagnostix (a)、IMS-B (b)、Neogen (c)、Microgenics (d) 53
圖 4-6、IMS 套裝試劑所呈現 B 之濃度與 GC-MS 不同分析物濃度間的關聯性:"總態 B" (a)、"游離態 B + 游離態 NB" (b) 54
圖 4-7、四組免疫分析試劑所呈現 B 之濃度與 GC-MS 總態 B 濃度間的關聯性:Diagnostix (a)、IMS-B (b)、Neogen (c)、Microgenics (d) 55

表目錄
表 2-1、 酵素免疫分析套裝試劑來源 23
表 2-2、 Ketamine、buprenorphine ELISA 免疫分析法實驗重要變數 24
表 3-1、 Ketamine 代謝物對 IDS 與 Neogen 套裝試劑之交互反應 40
表 3-2、 以 PFB 衍生 ketamine 及其內標準品所得產物的離子間交互干擾 (%) 41
表 3-3、 基質(matrix)與反應時間對於酵素免疫分析套裝試劑結果反應之影響 42
表 4-1、 結構類似物對各組試劑之交互反應 56
表 4-2、 Buprenorphine 代謝物對各組試劑之交互反應 57
表 4-3、 GC-MS 與 CEDIA 檢測結果 "陽/陰性" 之一致性 58
1. 徐建民:工作場所藥物檢驗彙編;中央警察大學,台北;1997.
2. 衛生署管制藥品管理局網站 (http//www.nbcd.gov.tw)。行政院衛生署管制藥品管理局:物質濫用;2005.
3. Moore KA, Sklerov J, Levine B, Jacobs AJ: Urine Concentrations of Ketamine and Norketamine Following Illegal Consumption. J Anal Toxicol 25:583–588; 2001.
4. Lua AC, Lin HR, Tseng YT, Hu AR, Yeh PC: Profiles of Urine Samples from Participants at Rave Party in Taiwan: Prevalence of Katamine and MDMA Abuse. Forensic Sci Int 136:47–51; 2003.
5. Chou SL, Yang MH, Ling YC, Giang YS: Gas Chromatography-Isotope Dilution Mass Spectrometry Preceded by Liquid-Liquid Extraction and Chemical Derivatization for the Determination of Ketamine and Norketamine in Urine. J
Chromatogr B 799:37–50; 2004.
6. Lua AC, Lin HR: A Rapid and Sensitive ESI-MS Screening
Procedure for Ketamine and Norketamine in Urine Samples. J Anal Toxicol 28:680–684; 2004.
7. Negrusz A, Adamowicz P, Saini BK, Webster DE,et al: Detection of Ketamine and Norketamine in Urine of Nonhuman Primates after a Single Dose of Ketamine Using Microplate Enzyme-Linked Immunosobent Assay (ELISA) and NCI-GC-MS. J Anal Toxicol 29:163–168; 2005.
8. Adamowicz P, Kala M: Urinary Excretion Rates of Ketamine andNorketamine Following Therapeutic Ketamine Administration: Method and Detection Window Consideration. J Anal Toxicol 28:376–382; 2005.
9. Wang KC, Shih TS, Cheng SG: Use of SPE and LC/TIS/MS/MS for Rapid Detection and Quantitation of Ketamine and Its Metabolite, Norketamine, in Urine. Forensic Sci Int 147:81–88; 2005.
10. Huang MK, Liu C, Li JH, Huang SD: Quantitative Detection of Ketamine, Norketamine, and Dehydronorketamine in Urine Using Chemical Derivatization Followed by Gas Chromatography-Mass Spectrometry. J Chromatogr B 820:165–173; 2005.
11. 蔡淑芬:台灣毒癮愛滋的流行情況,2005 HIV/AIDS 醫護人員
的新挑戰研討會,台南市成大醫學院(94 年 8 月 13 日)。
12. 行政院衛生署:毒品病患愛滋減害計畫之鴉片類物質成癮替代
療法作業基準(95 年 3 月 7 日)。
13. 薛瑞元:台灣實施替代療法之相關臨床規範,2005 藥物濫用防
治與藥癮戒治國際研討會,台北市圓山飯店(94 年 11 月 22–24 日)。
14. 行政院衛生署疾病管制局,毒品病患愛滋減害試辦計劃(核定
本)(94 年 12 月 6 日)。
15. The National Institute on Drug Abuse: Principles of Drug Addiction Treatment — A Research-Based Guide (U.S. NIH publication No.99–4180); October 1999.
16. Center for Substance Abuse Treatment: Clinical Guidelines for the Use of Buprenorphine in the Treatment of Opioid Addiction, Treatment Improvement Protocol (TIP) Series 40, DHHS Publication No. (SMA) 04-3939; Substance Abuse and Mental Health Services Administration: Rockville, MD, USA; 2004.
17. Amass L, Ling W, Freese TE, Reiber C, Annon JJ, Cohen AJ, McCarty D, Reid MS, Brown LS, Clark C, Ziedonis DM, Krejci J, Stine S, Winhusen T, Brigham G, Babcock D, Muir JA, Buchan BJ, Horton T: Bringing Buprenorphine-Naloxone Detoxification to Community Treatment Providers: The NIDA Clinical Trials Network Field Experience; Am J Addict 13(Suppl 1):S42–S66;2004.
18. Center for Substance Abuse Treatment: Methadone- Associated Mortality: Report of a National Assessment, CSAT Publication No. 28–03; Substance Abuse and Mental Health Services Administration: Rockville, MD, USA; 2004.
19. Breen CL, Harris SJ, Lintzeris N, Mattick RP, Hawken L, Bell J, Ritter AJ, Lenné M, Mendoza E: Cessation of Methadone Maintenance Treatment Using Buprenorphine: Transfer from Methadone to Buprenorphine and Subsequent Buprenorphine Reductions; Drug Alcohol Depend 71:49–55; 2003.
20. Vigezzi P, Guglielmino L, Marzorzorati P, Silenzio R, de Chiara M, Corrado F, Cocchi L, Cozzolino E: Multimodal Drug Addiction Treatment: A Field Comparison of Methadone and Buprenorphine among Heroin- and Cocaine-Dependent Patients; J Subst Abuse Treat 31:3–7; 2006.
21. Johnson RE, Jaffe JH, Fudala PJ: A Controlled Trial of Buprenorphine for Opioid Dependence; JAMA 267:2750–2755;
1992.
22. Eder H, Fischer G, Gombas W, Jagsch R, Sfühlinger G, Kasper S: Comparison of Buprenorphine and Methadone Maintenance in Opiate Addicts; Eur Addict Res 4 (Suppl 1):3–7; 1998.
23. Weinshilboum R: Inheritance and Drug Response; N Engl J Med 348:529–537; 2003.
24. Baselt RC: Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed; Foster City: Chemical Toxicology Institute: Foster City, CA, USA; pp 444–446; 2000.
25. White PF, Way WL, Trevor AJ: Ketamine Its Pharmacology and therapeuticc uses; Anesthesiology 56:119–136; 1982.
26. Baselt RC: Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed; Foster City: Chemical Toxicology Institute: Foster City, CA, USA; pp 103–104; 2000.
27. McEvoy GK, Miller J, Snow EK, Welsh OH, Litvak K, Dewey DR, O’Rourke A, Bollinger LA, Justice L, Kim J, Le T, Melton GS, Young BF, Shick J, Millikan ED, Douglas PM, Shannon LP, Ford ME, Kester L, Arcuri LB, Griggs TL, Reese JL: AHFS Drugs Information 2004; American Society of Health-System Pharmacists Inc.: Bethesda, MD, USA; pp 2067–2074; 2004.
28. Kupiec TC, Raj V, Vu N: Pharmacogenomics for Forensic
Toxicologist; J Anal Toxicol 30:65–71; 2006.
29. Kaushik R, Levine B, LaCourse WR: A Brief Review: HPLC
Methods to Directly Detect Drug Glucuronides in Biological Matrices (PartⅠ); Anal Chim Acta 556:255–266; 2006.
30. 林修民:抗體活染色與其在免疫臨床之應用;國立中興大學化
學工程系碩士論文;1998.
31. 免疫試劑使用手冊;International Diagnostic Systems (St. Joseph, MI, US).
32. 免疫試劑使用手冊;Neogen (Lexington, KY, US).
33. 免疫試劑使用手冊;Immunalysis (San Dimas, CA, US).
34. 免疫試劑使用手冊; International Diagnostic Systems (St. Joseph, MI, US).
35. 免疫試劑使用手冊;Neogen (Lexington, KY, US).
36. 免疫試劑使用手冊;Diagnostix (Mississauga, ON, Canada).
37. 免疫試劑使用手冊;Microgenics CEDIA (Fremont, CA, US).
38. Wu C-H, Huang M-H, Wang S-M, Lin C-C, Liu RH: Gas
Chromatography–Mass Spectrometry Analysis of Ketamine and Its Metabolites—A Comparative Study on The Utilization of Different Derivatization Groups; J Chromatogr A 1157:336–351; 2007.
39. 王于珊:氣相層析與液相層析質譜法在分析尿液中丁基原啡因
及其代謝物的應用與探討;輔英科技大學醫事技術系碩士論文;2007.
40. Wu C-H, Yang S-C, Wang Y-S, Chen B-G, Lin C-C, Liu RH:
Evaluation of Various Derivatization Approaches for Gas
Chromatography–Mass Spectrometry Analysis of Buprenorphine and Norbuprenorphine; J Chromatogr A 1182:93–112; 2008.
41. Liu RH, Foster GF, Cone EJ, Kumar SD: Selecting an Appropriate Isotopic Internal Standard for Gas Chromatography/Mass
Spectrometry Analysis of Drug—Pentobarbital Example; J Forensic Sci 40:983–989; 1995.
42. 行政院衛生署管制藥品管理局:Regulations Governing Drug
Abuse Urine Testing Operations(94 年 11 月 24 日)。
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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