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研究生:魏維彥
研究生(外文):Wei-Yen Wei
論文名稱:SARS-CoV病毒之核殼蛋白抑制細胞內丙酮酸激酶之活性
論文名稱(外文):SARS-CoV Nucleocapsid protein inhibits cellular pyruvate kinase activity
指導教授:羅時燕
指導教授(外文):Shih-Yen Lo
學位類別:碩士
校院名稱:慈濟大學
系所名稱:分子生物暨人類遺傳學研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2009
畢業學年度:97
語文別:中文
論文頁數:41
中文關鍵詞:嚴重急性呼吸道症候群核殼蛋白
外文關鍵詞:SARS-CoVNucleocapsid protein
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嚴重急性呼吸道症候群是一種由冠狀病毒所導致的呼吸道疾病,而此冠狀病毒稱為SARS-CoV。SARS-CoV病毒可以感染許多器官,包括肺臟、肝臟以及免疫細胞,因此,感染SARS-CoV冠狀病毒可能會造成嚴重的症狀,像是呼吸窘迫症候群、貧血等。我們實驗室之前研究發現,在酵母菌雙雜交系統中,SARS-CoV的核殼蛋白會與丙酮酸激酶交互作用,並且利用了免疫沈澱法與共軛焦顯微鏡證明了此兩蛋白之間的交互作用。但是,仍尚未清楚SARS-CoV的核殼蛋白對於細胞內的丙酮酸激酶會有何作用。在本研究中,我們研究SARS-CoV的核殼蛋白對於細胞內丙酮酸激酶活性的影響。我們發現SARS-CoV的核殼蛋白會與細胞中丙酮酸激酶交互作用並抑制其活性。在部份病例中,減少丙酮酸激酶的活性可能是造成貧血的原因,因此,我們認為SARS-CoV冠狀病毒造成貧血是經過核殼蛋白抑制丙酮酸激酶所造成的。
Severe acute respiratory syndrome(SARS)is a respiratory illness caused by the infection of a novel coronavirus called SARS-CoV. SARS-CoV infects many organs, including lungs, liver and immune cells. Therefore, infection with SARS-CoV could result in severe symptoms, including respiratory distress syndrome, anemia etc. In our previous study, SARS-CoV nucleocapsid (NC) protein was found to interact with pyruvate kinase (PK) protein. The interaction between SARS-CoV NC protein and cellular PK protein was also demonstrated by IP-Western and confocal microscopy analyses. However, the effect of SARS-CoV NC protein on cellular pyruvate kinase was not yet determined. In this study, the effect of SARS-CoV NC protein on the cellular PK activity was carried out. Our results suggest that SARS-CoV NC protein interacts with cellular PK protein and inhibits its activity. In some patients, reduction of cellular PK activity could cause anemia. Thus, our results suggest that anemia induced by SARS-CoV infection could be through NC protein interaction with PK protein.
序論 1
一、SARS-CoV病毒 1
1、SARS-CoV病毒之起源 1
2、SARS-CoV病毒目前之診斷與治療 2
三、冠狀病毒之簡介 3
四、冠狀病毒之生活史 4
五、SARS-CoV病毒之簡介與研究 4
六、SARS-CoV病毒之核糖蛋白的簡介與研究 5
七、丙酮酸激�﹞岑略飩P研究 7
八、研究目的 8
實驗方法與材料 9
一、實驗方法 9
細胞培養 9
西方點墨法(Western blot) 9
Enhanced chemiluminescemce(ECL)呈色 9
Alkaline phosphatase(AP)呈色 10
Lentiviral Vector系統 10
病毒製備 11
病毒感染 11
酵素活性分析與流程 12
共軛焦顯微鏡 13
二、實驗材料 14
實驗結果 17
圖一 19
圖二 20
圖三 21
圖四 22
圖五 23
圖六 24
圖七 25
圖八 26
圖九 27
圖十 28
圖十一 29
圖十二 30
討論 31
附圖一 33
附圖二 34
參考文獻 35
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