臺灣博碩士論文加值系統

4MSK(4-methoxy salicylic acid KCl)是一種藥用美白成分，其成分是從水楊酸衍生而來的。當4MSK在水溶液中是呈離子狀態，需要在酸性緩衝液才能保持穩定。
4MSK的主要作用在對於受到紫外線照射導致角質異常，而引起黑斑、雀斑的肌膚加以改善。具有「抑制麥拉寧(melanin)的生成，並且預防黑斑及雀斑的產生」。
本研究是建立一套新的 HPLC 分析方法來檢測水膠面膜中 4MSK美白成分的穩定性，移動相為0.1 % H3PO4 緩衝液 pH 3.0：甲醇，其比例為 40：60，連接 ODS Hypersil 250×4.6 mm(5μm) 的層析管柱，偵測波長為 254 nm，流速為 1.0 mL/min，注射量為 10μL，此分析條件可在6分鐘內完成。
在分析確效方面，4MSK 的線性迴歸係數R2 = 0.9998，精密度實驗的相對標準偏差RSD介於0.16 % ~ 0.69 % 之間；準確度實驗的回收率則介於98.7 % ~ 98.9 %。
在經皮穿透試驗方面，將自製的4MSK水膠面膜在 Nylon 濾膜及豬皮的穿透性，4MSK 在 3 hr 後的釋離率分別為 28.24 % 和 17.87 %；及其相對標準偏差( RSD )分別為 6.16 % 以下和 6.71 % 以下；穿透試驗的結果可以當作藥物經皮穿透數值的參考。
將本研究的4MSK水膠面膜放置於室溫( 25±2℃)及加速( 40±2℃)的安定性試驗條件下進行6個月的實驗，室溫試驗的4MSK含量衰退至98.4 %，而加速試驗的4MSK含量衰退至 92.5 %。

4MSK(4-methoxy salicylic acid KCl) is one kind of whitening medicinal ingredients, which is derived from salicylic acid. 4MSK is ionized when dissolved in the water, which is stable in the acidic buffer condition. When skin was seriously suffered by the ultraviolet radiation to result in the abnormal cuticle of skin and arise from the formation of melasma and freckles. 4MSK can help to treat and improve these skin disease symptoms and restrain the formation of melanin and prevent the production of melasma and freckles.
In this research, a HPLC method was developed to determine the whitening ingredient of 4MSK in hydrogel mask. The mobile phases were prepared with 0.1 % H3PO4 buffer solution adjusted at pH 3 and methanol with the ratio of 40 to 60. Chromatographic methods were performed with a HPLC system equipped with ODS Hypersil 250×4.6 mm(5μm) column with UV/Vis absorption set at 254 nm, flow rate set at 1.0 mL/min and an injection of 10 μL as well as each runtime about six minutes.
In the result of analytical method validation, the linear regression coefficient (R2) was 0.9998, the relative standard deviations(RSD) of precision experiments were between 0.16 % ~ 0.69 %, and the recoveries of accuracy experiment were between 98.7 % ~ 98.9 %.
In the tests of transdermal penetration, the hydrogel masks of 4MSK were placed in nylon membrane and pig skin to do penetrating experiments, the release rates of 4MSK for three hours for nylon membrane and pig skin were 28.24 % and 17.87 %, respectively. The relative standard deviations(RSD) of penetration tests for nylon membrane and pig skin were 6.16 % and 6.71 % below, respectively. The results of penetration tests can be used as the reference of transdermal medicine.
In this experiment, the 4MSK hydrogel mask was placed in the room temperature condition( 25±2℃) and the accelerated condition(40±2℃) for six-month stability tests, the content of 4MSK was declined to 98.4% in the room temperature test and was declined to 92.5% in the accelerated test at the sixth month.

目錄
書頁名
博、碩士論文授權書
論文口試委員審定書（中文版）
論文口試委員審定書（英文版）
中文摘要 I
英文摘要 III
誌謝 V
目錄 VII
表目錄 IX
圖目錄 XI

第壹章　緒論 1
一、前言 1
二、研究目的 2
三、文獻回顧 3
四、4MSK成分介紹 15
五、儀器分析原理 16



第貳章 實驗 1
一、藥品和試劑 23
二、儀器設備 24
三、溶液配置 25
四、分析方法與條件之建立 26
五、分析方法的確效 28
　1、系統適用性（System Suitability） 28
2、線性及範圍（Linearity & Range） 28
3、專一性（Specificity） 28
4、精密度（Precision） 30
5、準確度（Accuracy） 30
6、偵測極限與定量極限( LOD & LOQ ) 31
六、 水膠面膜的製備 32
七、 空白水膠面膜的製備 33
八、 不同溫度及時間對水膠面膜的影響 33
九、 標準品溶液配製 34
十、 水膠面膜中成份萃取法 34
十一、成份含量的計算 35
十二、 經皮穿透實驗 35
第參章 結果與討論 38
一、方法與條件之建立 38
二、分析方法的確效 44
1、系統適用性（System Suitability） 44
2、線性及範圍（Linearity & Range） 45
3、專一性（Specificity） 46
4、精密度（Precision） 53
5、準確度（Accuracy） 56
6、偵測極限與定量極限( LOD & LOQ ) 57
三、不同溫度及時間對藥膠布含量的影響 58
四、不同溫度及時間對水膠面膜外觀的影響 61
五、水膠面膜的經皮穿透 61
第肆章 結論 64
第伍章 參考文獻 66




表目錄
表1：衛生署公告之美白成分 13
表2、正相層析與逆相層析之特性比較 19
表3、不同尺寸應用需求之管柱尺寸 20
表4、各種型態層析管及其官能基 21
表5、4MSK水性藥膠布的組成份 32
表6、不同磷酸緩衝溶液 pH值的比較 40
表7、不同有機溶劑比例的比較 42
表8、系統適用性結果數據（六重複注射標準品溶液） 44
表9、4MSK三重複注射結果（for Linearity & Range） 45
表10、水膠面膜的標準品和樣品滯留時間 47
表11、4MSK標準溶液經HPLC分析之重複性數據 54
表12、4MSK標準溶液經HPLC分析之再現性數據 54
表13、4MSK的回收率數據 56
表14、4MSK 標準溶液經 HPLC 之數據( n=10 ) 57
表15、HPLC 對 4MSK 的偵測極限和定量極限 58
表16、4MSK在25℃及40℃的環境下，6個月間的含量變化 59
表17、4MSK在25℃時的安定性數據 60
表18、4MSK在40℃時的安定性數據 60
表19、4MSK水膠面膜在25℃及40℃的環境下，6個月間的顏色與外觀變化 61
表20、4MSK在磷酸緩衝溶液之Nylon 濾膜和豬皮的經皮穿透數據 62


圖目錄
圖1、黑色素形成的作用機制 9
圖2、液相層析法的應用 17
圖3、高效能液相層析儀示意圖 22
圖4、高效能液相層析儀裝置圖 22
圖5、4MSK波峰拖尾的層析圖 26
圖6、4MSK之標準品UV吸收圖 27
圖7、自製水性藥膠布 33
圖8、直立式恆溫槽示意圖 36
圖9、直立式恆溫反應槽裝置圖 37
圖10、恆溫循環槽溫度 37
圖11、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 4.5）︰乙腈＝10︰90 38
圖12、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 4.5）︰乙腈＝50︰50 39
圖13、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 4.5）︰甲醇＝50︰50 39
圖14、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 3.0）︰甲醇＝50︰50 40
圖15、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 4.0）︰甲醇＝50︰50 41
圖16、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 6.0）︰甲醇＝50︰50 41
圖17、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 3.0）︰甲醇＝50︰50 42
圖18、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 3.0）︰甲醇＝40︰60 43
圖19、4MSK在波長254 nm，移動相比例為磷酸緩衝溶液（pH 3.0）︰甲醇＝30︰70 43
圖20、4MSK標準品之檢量線圖 46
圖21、4MSK標準品之滯留時間 47
圖22、4MSK樣品之滯留時間 47
圖23、4MSK標準品之UV吸收圖（HPLC-PDA） 48
圖24、4MSK樣品之UV吸收圖（HPLC-PDA） 48
圖25、移動相溶液所得圖譜 49
圖26、標準品溶液所得圖譜 49
圖27、專一性樣品溶液(A)所得圖譜 50
圖28、專一性樣品溶液(B)所得圖譜 50
圖29、專一性樣品溶液(C)所得圖譜 51
圖30、專一性樣品溶液(D)所得圖譜 51
圖31、專一性樣品溶液(E)所得圖譜 52
圖32、雙氧水標準品所得圖譜 52
圖33、專一性樣品溶液(F)所得圖譜 53
圖34、空白貼布萃取溶液之圖譜 56
圖35、4MSK在25℃及40℃的環境下，6個月間含量變化曲線圖 59
圖36、在Nylon 濾膜的經皮穿透曲線圖 63
圖37、在豬皮的經皮穿透曲線圖 63

1.莊庭珣，「合成羥基取代之N-色洛冬寧桂皮醯胺化合物探討其抗氧化及抑制酪胺酸酶活性之研究」，碩士論文，嘉南藥理科技大學化粧品科技研究所，(2008)。
2.Miquel J., rez-Bosca A. R., Juan V., Ramı´rez-Bosca , Alperi J. D., ” Menopause: A review on the role of oxygen stress and favorable effects of dietary antioxidants”, Archives of Gerontology and Geriatrics 42，289-306, 2006.
3.Sartor L., Pezzato E., Aica I. D., Caniato R., Biggin S., Spiridione Garbisa., “Inhibition of matrix-Proteases by polyphenols:chemical insight for anti-inflammatory and anti-invasion drug design”, Biochemical pharmacology 64, 229-237, 2002.

4.Miquel J., Ramırez-Bosca A., Juan V., Ramı´rez-Bosca , Alperi J. D., ”Menopause: A review on the role of oxygen stress and favorable effects of dietary antioxidants”, Archives of Gerontology and Geriatrics 42, 289-306, 2006.

5.Sheldon R., Pinnell, M. D. Durham, Carolina N., “Cutaneous photodamage,oxidative stress, and topical antioxidant protection”, J Am Acad Dermatol, 48:1-19, 2003.

6.Su M. S., Juan L., Silva., “Antioxidant activity, anthocyanins, and Phenolics of rabbiteye blueberry(Vaccinium ashei)by-products as affected by fermentation” , Food Chemistry 97, 447-451, 2006.

7.Assimopoulou A.N., Boskou D., Papageorgiou V.P., “Antioxidant activities of alkannin,shikonin and Alkanna tinctoria root extracts in oil substrates”, Food Chemistry 87, 433-438, 2004.

8.Dawson T. L., “Colour and colour vision of creatures great and small.”, Society of Dyers and Colourists, Color. Technol, 122, 61-73, 2006.

9.Mitsuru Lwata M. D., Corn Todd B. S., Shoko lwata D. D. S., Mark A. Everett M. D and Bryan B., Fuller, PH.d., “ The Relationship Between Tyrosinase Activity and Skin Color in Human Foreskins”, The journal of investigative dermatology, J Invest Dermatoll 95, 9-15, 1990.

10.Lee S., Kim W. G., Kim E., Ryoo I. J., Lee H. K., Kim J. N., Jung S. H and Yoo I. D., “Synthesis and melanin biosynthesis inhibitory activity of (±)-terrein produced by Penicillium sp. 20135”, Bioorg. Med. Chem. Lett. 15, 471–473, 2005.

11.Francisco G. M., Lorena G., Fenolla, Julio C., Moroteb, Pedro A., Garcıa-Ruizc, Jos eN., opeza R. L., Garcıa-anovasa F., Tudelaa J., “Opposite effects of peroxidase in the initial stages of tyrosinase-catalysed melanin biosynthesis”, The International Journal of Biochemistry & Cell Biology , vol 37, 1179–1196, 2005.

12.Um S. J., Park M. S., Park S. H., Han H. S., Kwon Y. J and Sin H. S., “Synthesis of New Glycyrrhetinic Acid (GA) Derivatives and Their Effects on Tyrosinase Activity”, Bioorg. Med. Chem 11, 5345-5352, 2003.

13.Lee Y. S., Park J. H., Kim M. H., Seo S. H., Kim H. J., “Synthesis of Tyrosinase Inhibitory Kojic Acid Derivative”, Arch. Pharm. Chem. Life Sci, 339, 111-114, 2006.

14.Kentaro T. N., Hatani T., Okada T and Tehara T., “Modulating effests of a novel skin-lightening agent,α-lipoic acid derivative,on melanin production by the formation of DOPA conjugate products”, Bioorg. Med. Chem 15, 1967-1975, 2007.

15.Shosuke Ito, “A Chemist’s View of Melanogenesis”, Pigment Cellres, 16, 230-236, 2003.

16.Wang Q., Qiu L., Chen X. R., Song K. K., Yan Shi and Qing-Xi C., “Inhibitory effects of phloridzin dehydrate on the activity of mushroom(Agaricus bisporus) tyrosinase”, Bioorg. Medicinal. Chem. 15, 1568-1571, 2007.

17.Su M.S., Juan L., Silva, “Antioxidant activity,anthocyanins,and phenolics of rabbiteye blueberry(Vaccinium ashei)by-products as affected by fermentation”, Food Chemistry 97, 447-451, 2006.

18.Choi. S. Y., Kim S., Kim H., Suk K., Hwang J. S., Lee B. G., Kim A. J andKim S. Y.,“(4-Methoxy-benzylidene)-(3-methoxy-phenyl)- amine, a Nitrogen Analog of Stilbene as a Potent Inhibitor of Melanin Production”, Chem. Pharm. Bull 50(4), 450-452, 2002.

19.Baurin N., Arnoult E., Scior T., Do Q.T., Bernard P., “Preliminary screening of some tropical plants for anti-tyrosinase activity”, Journal of Ethnopharmacology 82, 155-158, 2002.

20.洪偉章，李金枝，陳榮秀，“化粧品原料及功能”,初版，台北市，藝軒圖書，249頁，民國2000年。


21.Lee Y. S., Park J. H., Kim M. H., Seo S. H., Kim H. J., “Synthesis of Tyrosinase Inhibitory Kojic Acid Derivative”, Arch. Pharm. Chem. Life Sci, 339, 111-114, 2006.

22.Lin C. H., Wu H. L., Huang Y. L., “Combining high-performance liquid chromatography with on-line microdialysis sampling for the simultaneous determination of ascorbyl glucoside, kojic acid, and niacinamide in bleaching cosmetics”, Analytica Chimica Acta 581, 102–107, 2007.

23.Choi S. Y., Kim S., Hwang J. S., Lee B. G., Kim H., Kim S. Y., “Benzylamide derivative compound attenuates the ultraviolet B-induced hyperpigmentation in brownish guinea pig skin”, Biochemical pharmacology 67, 707-715, 2004.

24.Chen, R. K., Principle of LC-MS-MS and its Application in Food Analysis Food Industries, Taiwan R.O.C, Vol. 33, No. 3, pp.44~54 (2001).

25. Douglas A. Skoog, F. James Holler, Timothy A.Nieman, “Principles of Instrumental Analysis”, 6th Edition, pp.762~783,816~831.

26. C. J. Argoudelis., “Isocratic Liquid Chromatograph Method for Aspartame and Other Additives in Soft Drinks,” Journal of Chromatography A, No. 303, pp.256~262 (1984).

27. W. G. Fu., “The Application of HPLC on Food Analysis,” Food Industries Vol. 32, Taiwan R. O. C, pp.39~53 (2000).

28. H. D. Hua., “The Main Points of Choose HPLC Column,” Agilent Technologies, Taiwan R. O. C, No.3, (2000).



29. 莊琇婷，「Acarbose 分析方法的開發與分析方法確校」，碩士論文，朝陽科技大學應用化學研究所，台中 (2007)。

30. 陳為正，「Ketoprofen 和Indomethacin 油性壓克力膠貼布的開發及品管」，碩士論文，朝陽科技大學應用化學研究所，台中 (2007)。