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研究生:張郁涵
研究生(外文):Yu-han Chang
論文名稱:蛹蟲草菌株之生理生化特性與親緣分析
論文名稱(外文):Biological and phylogenetic analysis of Cordyceps militaris
指導教授:陳玉舜陳玉舜引用關係
指導教授(外文):Yuh-Shuen Chen
學位類別:碩士
校院名稱:弘光科技大學
系所名稱:食品暨應用生物科技所
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2010
畢業學年度:98
語文別:中文
論文頁數:78
中文關鍵詞:蛹蟲草蟲草素內轉錄區親緣關係樹脈衝式電泳
外文關鍵詞:Cordyceps militariscordycepininternal transcribed spacer (ITS)phylogramPulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE)
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野生冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)不易取得,價格昂貴且食用上有潛在的衛生安全問題,故近年來各界積極發展人工培育蛹蟲草(Cordyceps militaris)。許多研究結果顯示,蛹蟲草所含機能性成分與冬蟲夏草十分相似,可作為替代之一,其藥理上具有抗氧化、抑制腫瘤、調節血糖、調節免疫系統、調節呼吸系統與提升生育能力等功效,具開發為健康食品及植物新藥之潛力。本研究針對不同來源之蛹蟲草比較菌絲生長速率、菌絲球產量、子實體產量及機能性成分含量,並利用ITS序列及脈衝式電泳進行親緣性研究。研究結果顯示,菌株在平板培養之生長速率於培養144小時具有明顯差異,以BCRC 32219最快,菌株 A最慢;液態培養菌絲球產量在192小時具有明顯差異,以菌株 E最高,菌株 A最低;但培養240小時後,菌株 A反而有最高菌絲球產量,菌株 B 、D、E產量則下降。BCRC 32219、菌株 B及菌株 E經固態培養後均未形成子實體;經45天光培養後進行採收,其子實體產量(濕重)以菌株 A最高(11.53 g),菌株 C次之(7.11 g),菌株D最低(5.15 g),上述子實體經冷凍乾燥後,乾重分別為1.77 g、1.47 g及1.30 g,換算子實體水分含量約佔76~85%;蟲草素(cordycepin)含量分析結果以菌株 A最高(
101.07 mg/g)、菌株 C次之(19.20 mg/g)、菌株 D最低(17.83 mg/g);多醣體含量分析結果以菌株 C最高(3.02mg/g)、菌株 A次之(2.73 mg/g)、菌株 D (1.51 mg/g) 最低。各菌株ITS序列經定序後,進行GeneBank序列資料庫比對,除了菌株 B定序結果為Paecilomyces lilacinus,其餘菌株皆為C. militaris,內轉錄區(ITS)序列親緣分析結果可分為(bootstrap > 90):第Ⅰ群包括菌株BCRC32219與菌株 E;第Ⅱ群包括菌株菌株 C與菌株 D;第Ⅲ群包括菌株A;第Ⅳ群包括菌株菌株 B,各群分布結果與子實體產量具有相關性。脈衝式電泳結果應可藉由提高樣品菌絲濃度與增加樣品酵素破壁處理時間(>2小時)以提升細胞破壁率進而提高染色體DNA條帶之亮度。蛹蟲草標準菌株BCRC 32219之染色體DNA於825至1600 kb間有三條明顯條帶,分子量大小分別約900、1500及1600 kb,然而strain A由於原始DNA濃度偏低,僅出現淡條帶無法有效判別,有待進一步探討。
中文摘要 ......................... I
ABSTRACT ......................... III
圖目錄 ......................... VIII
表目錄 ......................... X
第一章 前言 ........................1
第二章 文獻整理.....................2
2.1 蛹蟲草.........................4
2.1.1 蛹蟲草簡介....................4
2.1.2 蛹蟲草之化學組成分.............5
2.1.3 蛹蟲草之機能性成分.............5
2.1.4 蛹蟲草生理功效................10
2.2 蛹蟲草人工培養..................12
2.3 rDNA 序列......................14
2.4 親緣樹狀圖......................16
2.5 脈衝式電泳之應用.................16
2.5.1 脈衝式電泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)原
理 ............................17
2.5.2 脈衝式電泳的判別...............20
2.5.3 影響脈衝式電泳因素.............21
第三章 材料與方法....................23
3.1 實驗設備與材料...................23
3.1.1 使用菌株......................23
3.1.2 實驗材料......................23
3.2 實驗儀器........................24
3.3 方法............................25
3.3.1 菌種分離培養...................25
3.3.2 蛹蟲草基本特性探討..............25
3.3.3 親緣性關係探討.................28
第四章 結果與討論....................33
4.1 不同來源蛹蟲草菌株生長型態之型態差異
探討............................33
4.1.1 蛹蟲草菌絲生長情形..............33
4.1.2 蛹蟲草菌絲球生長情形............33
4.1.3 蛹蟲草固態培養.................41
4.2 蛹蟲草活性成分定性與定量析.........48
4.2.1 多醣體量.......................48
4.3.1 ITS 序列析....................53
4.3.2 脈衝式電泳.....................69
第五章 結論與未來展望.................72
參考文獻.............................74
參考文獻
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