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研究生:陳郁綺
研究生(外文):Chen yu-chi
論文名稱:環境毒化物2,3,7,8-TCDD之轉化菌株的分離及其生理特性之研究
論文名稱(外文):The isolation and characteristics study of environmental toxicant 2,3,7,8-TCDD biotransformation bacteria.
指導教授:劉昭麟劉昭麟引用關係陳錫金陳錫金引用關係
指導教授(外文):Liou chao-linChen hsi-chin
口試委員:李孟修
口試委員(外文):Li meng-hsiu
口試日期:2010-12-06
學位類別:碩士
校院名稱:明志科技大學
系所名稱:生化工程研究所
學門:工程學門
學類:化學工程學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2011
畢業學年度:98
語文別:中文
論文頁數:122
中文關鍵詞:土壤污染微生物戴奧辛菌種鑑定蛋白質電泳
外文關鍵詞:Soil pollutionMicroorganismDioxinStrain identificationSDS-PAGE.
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本研究希望能由本土的戴奧辛污染土壤,尋找出戴奧辛轉化菌,並透過菌種的生化特性分析的測試,達到轉化菌的篩選、分離與馴化之目的。
本研究自污染場址採集三個土壤樣品中,分析戴奧辛污染情況結果顯示,戴奧辛毒性當量濃度高達2450 ng- TEQ/kg,此濃度已超過土壤管制標準。將土壤樣品經過篩選培養與分離後,分離鑑定出四株能存活於含有戴奧辛之培養基中,其菌株分別為Achromobacter xylosoxidans、Ochrobactrum anthropi、Ralstonia mannitolilytica和 Agromyces sp.。
戴奧辛降解測試結果顯示,四菌株皆有戴奧辛降解的效果,且都是以好氧為主要途徑。此外,實驗結果顯示Achromobacter xylosoxidans、Ochrobactrum anthropi、Agromyces sp.三菌株,皆在適應期便有明顯降解2,3,7,8-TCDD的效果,但Ralstonia mannitolilytica需到生長期,2,3,7,8- TCDD濃度才有明顯變化。在這四株轉化菌中,以Agromyces sp.的降解效果最佳,能使2,3,7,8-TCDD濃度下降97%。另外,並透過蛋白質體學技術觀察其Agromyces sp.及Achromobacter xylosoxidans蛋白間變化,並透過MALDI-TOF MS了解其作用。

This study is to dioxin contaminated soil from the local to find out the dioxin biotransformation bacteria and bacteria through the analysis of the biochemical characteristics of the test, reaching biotransformation bacteria, isolation and acclimation purposes.
This study collected from contaminated sites in the three soil samples , analyze results of dioxin pollution, dioxin toxic equivalent concentration of up to 2450 ng-TEQ / kg, the concentration of control over the soil standard. Four bacteria strains which can survive in dioxin media were isolated after sub- culture inoculation. The four strains were identified as Achromobacter xylosoxidans, Ochrobactrum anthropi, Ralstonia mannitolilytica and Agromyces sp. .
Achromobacter xylosoxidans, Ochrobactrum anthropi, Agromyces sp. could degrade 2,3,7,8-TCDD at lag phase, whereas Ralstonia mannitolilytica decomposed it primarily at log phase. It was also observed that Agromyces sp. had the maximum 2,3,7,8-TCDD degradation efficiency (97%). In addition, proteomics through to observe the Agromyces sp. and Achromobacter xylosoxidans proteins that change, and through the MALDI-TOF MS to understand its role.

明志科技大學碩士學位論文指導教授推薦書 i
明志科技大學碩士學位論文口試委員會審定書 i
明志科技大學碩士學位論文授權書 iii
誌謝 iv
摘要 vi
Abstract vii
目錄 viii
圖目錄 xi
表目錄 xiv
第一章 緒論 1
1-1 前言 1
第二章 文獻回顧 4
2-1 戴奧辛簡介 4
2-1-1 戴奧辛特性 4
2-1-2 戴奧辛的來源 5
2-2 戴奧辛的毒性計量 6
2-3 台灣之戴奧辛污染 8
2-4 戴奧辛對人體健康及生物的影響 9
2-5 土壤污染整治技術介紹 10
2-5-1戴奧辛污染整治方法 11
2-6 微生物好氧降解戴奧辛 13
2-6-1 微生物厭氧脫氯戴奧辛 17
2-7 戴奧辛的生化代謝途徑 19
2-7-1 戴奧辛好氧降解途徑 19
2-7-2 戴奧辛厭氧脫氯途徑 21
2-8 蛋白質體學 24
2-9 二維電泳 24
2-10 蛋白質分析技術 25
第三章 材料與方法 26
3-1 研究材料 26
3-1-1藥品試劑 26
3-1-2 儀器 27
3-1-3 Minimal salts basal (MSB)培養基 28
3-2 菌種來源 29
3-3 菌源土壤中戴奧辛分析方法 29
3-4 戴奧辛分解菌篩選與培養 30
3-4-1戴奧辛分解菌株馴化培養 30
3-5 戴奧辛分解菌株篩選與分離 30
3-6 菌種保存 31
3-7 革蘭氏染色(Gram’s Stain) 31
3-8 16S rDNA 菌株鑑定方法 32
3-9 菌株生長測試 33
3-10 戴奧辛分解菌之生長測試 33
3-11 戴奧辛降解分析 34
3-12 蛋白質體分析 35
3-12-1 蛋白樣品製備 35
3-12-2 蛋白質濃縮 36
3-12-3 蛋白質定量 36
3-12-4 胞內蛋白測定 37
3-13 聚丙烯醯胺膠體電泳(SDS-PAGE) 37
3-13-1 Silver stain 銀離子染色 39
3-13-2 Coomassie brilliant blue R-250 stain 39
3-13-3 In-gel digestion 40
3-13-4 MALDI-TOF 質譜儀之分析 40
第四章 結果與討論 42
4-1 戴奧辛分解菌篩選 42
4-2 場址污染分析-戴奧辛及呋喃 42
4-3 以16S rDNA鑑定菌種 47
4-4 革蘭氏染色 53
4-5 戴奧辛轉化菌生長測試 55
4-5-1 碳源對戴奧辛轉化菌生長之影響 55
4-5-2 戴奧辛濃度對分解菌生長之影響 60
4-6 戴奧辛降解測試 64
4-6-1 2,3,7,8-TCDD濃度變化分析 64
4-6-2 2,7,8-TCDD濃度變化分析 69
4-6-3 2,7-DCDD濃度變化分析 72
4-6-4 2-CDD濃度變化分析 76
4-7 分解菌之蛋白質體分析 79
4-8 MALDI-TOF MS分析及蛋白質鑑定 83
第五章 結論與建議 86
5-1 結論 86
5-2 建議 87
第六章 參考文獻 88
附錄 95


台南市環保局(2009) 中石化資訊網。網址http://cpdc.recyclesources. com/about/map.htm
林居慶(2000)乳化菌之篩選及其特性之研究。國立臺灣大學環境工程學研究所碩士論文。
梁福翥(2001) Pseudomonas putida SH1 異化、酚和蓁鄰-甲酚之蛋白質體分析,國立中央大學生命科學研究所碩士論文
李茂佑(2005) 蛋白質體學之大腸直腸癌差異性蛋白質表現分析,國立中山大學生物醫學科學研究所碩士論文
黃怡瑋 (2004) 建立以生物反應為基礎的戴奧辛檢測方法,國立台灣大學動物學研究所碩士論文
洪千雯 (2002) Hepa-1 小鼠細胞蛋白質體如何受2,3,7,8-四氯戴奧辛影響,國立成功大學環境醫學研究所碩士論文
行政院勞工委員會(2007) 戴奧辛物質安全資料表。http://ghs.cla.gov. tw/tw/MSDS.asp?sn=2842
行政院衛生署(2006) 食品中戴奧辛處理規範。網址http://www.doh.gov.tw/ CHT2006/DM/DM2_p01.aspx?class_no=45&now_fod_list_no=4224&level_no=1&doc_no=44264
行政院環境保護署(2002) 煉鋼業電弧爐戴奧辛管制及排放標準。網址http://www. angrin.tlri.gov.tw/goat/gfa39/gfa39p26-28.htm
行政院環境保護署(2007a) 放流水標準。網址:http://w3.epa.gov.tw/ epalaw/search/LordiDispFull.aspx?ltype=06&lname=0060
行政院環境保護署(2007b) 有害事業廢棄物認定標準。網址:http://w3. epa.gov.tw/epalaw/search/LordiDispFull.aspx?ltype=07&lname=0020
行政院環境保護署(2009) 土壤及地下水污染整治網。網址http:// sgw. epa. gov.tw/public/0401.asp
行政院環境保護署環署(2006a)土壤及地下水污染控制場址初步評估辦法。
行政院環境保護署環署(2006b) 固定污染源戴奧辛排放標準。
行政院環境保護署環署(2006c) 95 年度土壤及地下水污染整治年報。
蕭世和 (2007) 2,3,7,8-四氯二聯苯戴奧辛在NNK 誘發肺腫瘤生成作用之促進機轉探討,國立成功大學醫學院環境醫學研究所碩士論文
徐慈鴻、李貽華、高清文 戴奧辛生物快速篩檢法在農、畜及水產品的應用,行政院農業委員會專刊,第167號
莊榮輝、吳建興、陳翰民、張世宗、林士民、劉育志(2005) 酵素化學實驗。國立台灣大學生物化學研究室。
周綠蘋(2005)蛋白質體學之臨床與生物醫學之應用,台大醫學院生化分生所,台灣醫學期刊9卷5期:628-636
陳怡伶、羅鈞、莊桓齊、李秀霞、周劍平、易志峰、潘樹德、陳明旼、江光華 (2008) 固定污染源毒性空氣污染物(戴奧辛及重金屬)排放清冊調查及管制計畫。中興工程顧問股份有限公司。
蔡岡廷、王建楠(2007) 戴奧辛污染與健康危害。中華職業醫學雜誌14(4):261-268。
宋秉育 (2004) 辛基苯酚之分解:分解菌和生物復育之菌相研究。國立中
央大學生命科學研究所碩士論文。
宋德高、史麗芬 (2005) 台南市中石化安順廠整治場址土壤及地下水污染範圍調查及整治工作建議計畫。工業技術研究院、瑞昶科技股份有限公司。
陳呈芳 (2006) 戴奧辛污染土壤整治技術。水利土木科技資訊,33:1-8。
楊茱芳(2003)五氯酚分解菌之分離與及其生理特性研究。國立中興大學環境工程學系碩士論文
姚雲欽(2005) 利用蛋白質體學技術尋找與台灣地區移形細胞惡性腫瘤相關的蛋白質,南台科技大學生物科技研究所碩士學位論文
Adriaens, P., Grbic-Galic, D., (1994). Reductive dechlorination of PCDD/F by anaerobic cultures and sediments. Chemosphere 29, 2253–2259.
Barkovskii, A.L., Adriaens, P. (1996) Microbial dechlorination of historically present and freshly spiked chlorinated dioxins and diversity of dioxin-dechlorinating populations. Appl. Environ. Microbiol. 62, 4556- 4562.
Barkovskii, A. L., Adriaens, P. (1998) Impact of humic constituents on microbial dechlorination of polychlorinated dioxins. Environ. Toxicol. Chem. 17, 1013-1020.
Bunge, M., Adrian, L., Kraus, A., Opel, M., Lorenz, W.G., Andreesen, J.R., Gorisch, H.,Lechner, U.( 2003) Reductive dehalogenation of chlorinated dioxins by an anaerobic bacterium. Nature 421, 357-360.
Behnisch, P. A., Hosoe, K. and Sakai, S. (2003) Brominated dioxin-like compounds:in vitro assessment in comparison to classical dioxin-like compounds and other polyaromatic compounds. Environ. Int. 29, 861-877.
Cash, P. (1998) Characterisation of bacterial proteomes by two-dimensional electrophoresis. Anal. Chim. Acta. 372, 121-145.
Chandra, R., Ghosh, A., Jain, R. K., and Singh, S. (2006) Isolation and characterization of two potential pentachlorophenol degrading aerobic bacteria from pulp paper effluent sludge. Journal of General and Applied Microbiology 52(2), 125-130.
Chang, Y. (2008) Recent developments in microbial biotransformation and biodegradation of dioxins. Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology 15(2-3), 152-171.
Chu, P. W., M. N. Yap, C. Y. Wu, C. M. Huang, F. M. Pan, M. J.Tseng and S. T. Chen. (2000) A proteomic analysis of secreted proteins from xylan-induced Bacillus sp. strain K-1. Electrophoresis. 21, 1740-1745.
Fennell, D. E., Nijenhuis, I., Wilson, S.F., Zinder, S. H., Haggblom, M.M. (2004) Dehalococcoides ethenogenes strain 195 reductively dechlorinates diverse chlorinated aromatic pollutants. Environ. Sci. Technol. 38, 2075–2081.
Field, J. A. and Sierra-Alvarez, R. (2008) Microbial degradation of chlorinated dioxins. Chemosphere 71(6), 1005-1018.
Hong, H.B., Nam, I.H., Murugesan, K., Kim, Y.M., Chang, Y.S. (2004) Biodegradation of dibenzo-p-dioxin, dibenzofuran, and chlorodibenzop-dioxins by Pseudomonas veronii PH-03. Biodegradation 15, 303–313
Habe, H., Chung, J.S., Lee, J.H., Kasuga, K., Yoshida, T., Nojiri, H., Omori, T., (2001a). Degradation of chlorinated dibenzofurans and dibenzo-p-dioxins by two types of bacteria having angular dioxygenases with different features. Appl. Environ. Microbiol. 67, 3610–3617.
Ishii, K., Furuichi, T., Tanikawa, N., and Kuboshima, M., (2009) Estimation of the biodegradation rate of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin by using dioxin-degrading fungus, pseudoallesc- heria boydii. Journal of Hazardous Materials 162(1), 328-332.
Isosaari P. (2004) Polychlorinated Dibenzo-p-dioxin and Dibenzofuran Contamination ofSediments and Photochemical Decontamination of Soils . Doctoral dissertation. Publications of the National Public Health Institute.
Kearney, P.C., Woolson, E.A., Ellington, C.P., (1972). Persistence and metabolism of chlorodioxins in soils. Environ. Sci. Technol. 6, 1017-1019.
Lim, E. M., S. D. Ehrlich and E. Maguin. (2000). Identification of stress - inducible proteins in Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus. Electrophoresis. 21, 2557-2561.

McKay, G. (2002) “Dioxin Characterisation, Formation and Minimisation during Municipal Solid Waste (MSW) Incineration: Review”, Chemical Engineering Journal, Vol. 86, 343-368.
Matsumura, F., Quensen III, J.G.T. (1983) Microbial degradation of TCDD in a model ecosystem. Environ. Sci. Res. 26, 191-219.
Miyauchi, K., Sukda, P., Nishida, T., Ito, E., Matsumoto, Y., Masai, E., et al. (2008) Isolation of dibenzofuran-degrading bacterium, Nocardioides sp.DF412, and characterization of its dibenzofuran degradation genes. Journal of Bioscience and Bioengineering 105(6), 628-635.
Nam, I.H., Kim, Y.M., Schmidt, S., Chang, Y.S.(2006) Biotransformation of 1,2,3-tri- and 1,2,3,4,7,8-hexachlorodibenzo-p-dioxin by Sphingomonas wittichii strain RW1. Appl. Environ. Microbiol. 72, 112–116.
O’Connor C. D., P. Adams, P. Alefounder, M. Farris, N. Kinsella, Y.Li, S. Payot and P. Skipp. The analysis of microbial proteomes: strategies and data exploitation. Electrophoresis. 21, 1178-1186.
Rechinger K. B., H. Siegumfeldt, I. Svendsen and M. Jakobsen.(2000)“Early” Protein synthesis of Lactobacillus delbruekii ssp. Bulgaricus in milk revealed by [35S]-methionine labeling and two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis. 21, 2660-2669.
Perrot, F. , M. Hebraud, G. A. Junter and T. jouenne. (2000) . Protein synthesis in Escherichia coli at 4°C. Electrophoresis. 21, 1625-1629.
Son, W. K., Lee, D. Y., Lee, S. H., Joo, W. A. and Kim, C. W. (2003) Analysis of proteins expressed in rat plasma exposed to dioxin using 2-dimensional gel electrophoresis. Proteomics 3(12), 2393-2401.
U.S. Congress, Office of Technology Assessment. (1991) Dioxin Treatment Technologies Background Paper .
USEPA (1994) Health assessment document for 2,3,7,8- Tetrachlorodibenzo - p-dioxin (TCDD) and related compounds . Vol. III, P5-5.
Vogg, H., & Stieglitz, L. (1986) Thermal behavior of PCDD/PCDF in fly ash from municipal incinerators. Chemosphere 15(9-12), 1373-1378
Van den Berg, M., Birnbaum, L.S., Denison, M., De Vito, M., Farland, W., Feeley, M.,Fiedler, H., Hakansson, H., Hanberg, A., Haws, L., Rose, M., Safe, Schrenk ,S., Tohyama, D., Tritscher, C., Tuomisto, A., Tysklind, J., Walker, M., Peterson, N., R.E. (2006) The 2005 World Health Organization reevaluation of human and Mammalian toxicequivalency factors for dioxins and dioxin-like compounds. Toxicol. Sci. 93, 223–241.
Vesseur, C., J. Labadie and M. Hebraud. Differential protein expression by Pseudomonas fragi submitted to various stresses. Electrophoresis. 20, 2204-2213.
Washburn, M. P. and J. R. Yates. (2000) Analysis of the microbial proteome. Current Opinion in Microbiology. 3, 292-297.
Yang, C., Lee, C., and Wang, C (2006) Isolation and physiological characterization of the pentachlorophenol degrading bacterium sphingomonas chlorophenolica. Chemosphere 62(5), 709-714.

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