(3.238.7.202) 您好!臺灣時間:2021/02/25 11:15
字體大小: 字級放大   字級縮小   預設字形  
回查詢結果

詳目顯示:::

我願授權國圖
: 
twitterline
研究生:許可欣
研究生(外文):Kei-Shin Hsu
論文名稱:發展與定性禽流感病毒H5N1血球凝集蛋白的單株抗體與多株抗體
論文名稱(外文):Generation and Characterization of the Monoclonal Antibodies and Polyclonal antibodies Elicited by HA Trimer of H5N1 Influenza Virus
指導教授:黃智生黃智生引用關係
指導教授(外文):Jason C. Huang
學位類別:碩士
校院名稱:國立陽明大學
系所名稱:醫學生物技術暨檢驗學系暨研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學技術及檢驗學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2010
畢業學年度:98
語文別:中文
論文頁數:60
中文關鍵詞:禽流感病毒病毒血球凝集素單株抗體多株抗體三聚體蛋白
外文關鍵詞:Avian influenza virushemagglutininmonoclonal antibodypolyclonal antibodytrimer protein
相關次數:
  • 被引用被引用:0
  • 點閱點閱:181
  • 評分評分:系統版面圖檔系統版面圖檔系統版面圖檔系統版面圖檔系統版面圖檔
  • 下載下載:0
  • 收藏至我的研究室書目清單書目收藏:0
全球有三次大規模性流行性感冒:1918西班牙流感、1957-1958年亞洲流感、1968-1969香港流感,造成高死亡率和致病率。在流行病學研究中,證明造成這三次大規模型流行性感冒的皆為重組病毒。於1997年世界衛生組織報導第一例人感染禽流感病毒的病例。一旦高病原力的H5N1感染人類後,極有可能引起人體產生細胞激素風暴,造成肺部浸潤,導致高死亡率,因此引起當局的重視。
監控全球禽流感病毒的計畫中,建立快速且敏感的檢測方法是重要的方向。病毒血球凝集素位於病毒外層,為三聚體蛋白結構,透過與細胞上的唾液酸受體(sialic acid receptor)結合,引起細胞膜融合,進而病毒釋放RNA進入細胞質中。在先前研究中指出三聚體蛋白相較於單聚體蛋白更易誘發動物產生中和性抗體且桿狀病毒對於蛋白具有後修飾作用。因此,我們研究中使用桿狀H5N1病毒所產的病毒血球凝集素三聚體蛋白去免疫小鼠產生抗體,期望能建立辨認檢體中的H5N1病毒的單株抗體並且可以發展成檢驗套組。
首先使用桿狀病毒所產的H5N1血球凝集素三聚體蛋白分別施打BALB/c小鼠的腹腔和紐西蘭大白兔的皮層下,總共產生兩隻兔子多株抗體和9株單株抗體。多株與單株抗體皆可透過西方墨點法辨識三聚體蛋白和H5N1 病毒,而多株抗體可以透過雙抗體酵素連結吸附免疫法和間接免疫螢光染色偵測到H5N1病毒並且能中和H5N1病毒。同時我們也找出單株抗體的抗原決定位是位於病毒血球凝集素HA1上,提供將來可以做為H5N1的檢測抗體。

The 1918 Spanish flu, 1957-1958 Asian flu, and 1968-1969 Hong Kong flu caused high morbidity and mortality in the world. The epidemiological studies proved that most of these viruses are reassortment virus. In 1997, World Health Organization reported the first case of human infection with avian influenza virus H5N1. Once the highly pathogenic avian influenza virus infects humans, it induces cytokine storm and has high case-fatality rate. H5N1 raises concern worldwide because of its potential for pandemics.
The rapid and sensitive diagnosis is the critical component of the control plan. Hemagglutinin,a trimeric glycoprotein on the surfaces of virions, binds to host sialic acid receptor and subsequently mediates viral cell entry via membrane fusion. Previous studies showed that the trimer protein of hemagglutinin can elicit potent neutralizing antibodies compared to monomer and the posttranslational modification of protein is mediated by baculoviral system. We expected the trimeric protein produced from a baculaoviral system can efficiently induce antibodies which can recognize of H5N1 clinical isolates and be used for diagnostic kits
BALB/c mice and New Zealand rabbit were immunized with trimeric hemagglutinin proteins made from a baculoviral system by intraperitoneal injection and subcutaneous injection respectively. We generated polyclonal and 9 monoclonal antibodies and found that all antibodies recognized the trimeric hemagglutinin protein and H5N1 RG (A/Vietnam/1203/04) by Western blotting. However only the polyclonal antibodies recognized H5N1 viruses (A/Vietnam/1203/04) by double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELSIA) and indirect immunofluorescence assay. We also mapped the epitopes of the monoclonal antibodies is on the HA1 region. Our results provide the insights for the development of H5N1 rapid tests.

論文電子檔著作權授權書 i
論文電子檔審定證明書 ii
論文審定同意書 iii
致謝 iv
中文摘要 vi
英文摘要 vii
圖目錄 x
表目錄 xi
第一章 緒論 1
第一節 流行感冒病毒 1
第二節 流行病學 3
第三節 病毒血球凝集素(hemagglutinin,HA) 3
第四節 研究動機和目的 4
第二章 材料與方法 5
第一節 多株抗體製備 5
第二節 單株抗體之製備 6
第三節 偵測樣品中抗體、抗原的含量 11
第三節 偵測抗體的免疫球蛋白 18
第四節 偵測抗體的抗原決定位 19
第五節 測定樣品中病毒的含量 20
第六節 測定抗體抑制病毒凝集血球的能力 22
第七節 測定抗體中和病毒感染的能力 24
第八節 測定抗體對於病毒的結合能力 25
第三章 實驗結果 27
第一節 H5N1流感病毒血球凝集素的多株抗體備製 27
第二節 病毒血球凝集素蛋白的單株抗體備製 27
第三節 探討單株抗體的特性 28
第四節 探討單株與多株抗體的應用性 29
第五節 評估單株與多株抗體對於流感病毒的交叉反應 31
第六節 比較施打桿狀病毒與大腸細菌產生的蛋白所引起的抗體特性與效價 31
第四章 實驗討論 33
第五章 參考文獻 36
第六章 實驗結果圖表 37

Belshe, R. (2005). New England Journal of Medicine 353, 2209.
Charlton, B., Crossley, B., and Hietala, S. (2009). Comparative immunology, microbiology and infectious diseases 32, 341.
Cross, K., Langley, W., Russell, R., Skehel, J., and Steinhauer, D. (2009). Protein and Peptide Letters 16, 766.
De Clercq, E. (2006). Nat Rev Drug Discov 5, 1015.
Organization, W. H. (2010).
Pawitan, J. A. (2007). N Engl J Med 356, 1375; author reply 1376.
Peiris, J., De Jong, M., and Guan, Y. (2007). Clinical microbiology reviews 20, 243.
Proenca-Modena, J., Macedo, I., and Arruda, E. (2007). Brazilian Journal of Infectious Diseases 11, 125.
Renegar, K. (1992). Laboratory animal science 42, 222.
Subbarao, K., and Joseph, T. (2007). Nature Reviews Immunology 7, 267.
Sun, K., and Metzger, D. (2008). Nature medicine 14, 558.
Ungchusak, K., Auewarakul, P., Dowell, S., Kitphati, R., Auwanit, W., Puthavathana, P., Uiprasertkul, M., Boonnak, K., Pittayawonganon, C., and Cox, N. (2005). The New England journal of medicine 352, 333.
Wei, C. J., Xu, L., Kong, W. P., Shi, W., Canis, K., Stevens, J., Yang, Z. Y., Dell, A., Haslam, S. M., Wilson, I. A., and Nabel, G. J. (2008). J Virol 82, 6200.

連結至畢業學校之論文網頁點我開啟連結
註: 此連結為研究生畢業學校所提供,不一定有電子全文可供下載,若連結有誤,請點選上方之〝勘誤回報〞功能,我們會盡快修正,謝謝!
QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
第一頁 上一頁 下一頁 最後一頁 top
1. 何善蒙:〈林兆恩「三教合一」的宗教思想淺析〉,《逢甲人文社會學報》第12期(2006年6月)
2. 黃麗月:〈台灣地區三言二拍研究的回顧與展望——以各大學博碩士文為範圍〉,《中國文化月刊》第226期(2002年5月)
3. 錢存訓:〈印刷術在中國傳統文化中的功能〉,《漢學研究》第8卷第2期(1990年12月)
4. 朱鴻:〈明太祖與僧道——兼論太祖的宗教政策〉,《(國立臺灣師範大學)歷史學報》第18期(1990年6月)
5. 金明求:〈三言故事中佛教死亡思惟探索——超越因果輪迴後的涅槃世界〉,《中華佛學研究》第5期(2001年3月)
6. 鄭志明:〈靈魂的生命觀與殯葬文化〉,《宗教哲學》第43期(2008年3月)
7. 黃心川:〈道教與密教〉,《中華佛學學報第》第12期(1999年7月)
8. 賴永海:〈宋元時期佛儒交融思想探微〉,《中華佛學學報》第5期(1992年)
9. 關尚智:〈《型世言》中之型世典範及所反映之社會亂象〉,《臺北技術學院學報》第29之第2期(1996年7月)
10. 王宗昱:〈評葛洪論儒道關係〉,《孔孟月刊》第31卷5期(1993年5月)
11. 劉苑如:〈形見與冥報:六朝志怪中鬼怪敘述的諷喻-一個「導異為常」模式的考察〉,《中國文哲研究集刊》第29期(2006年9月)
12. 李孝悌:〈十七世紀以來的士大夫與民眾──研究回顧〉,《新史學》第4卷第4期(1993年)
13. 邱澎生:〈明代蘇州營利出版事業及其社會效應〉第5卷第2期《九州學刊》(1992年10月)
14. 徐志平:〈從「三言」看明代的僧尼〉,《嘉義農專學報》第17期(1988年4月)
15. 胡萬川:〈乍看不起眼的那些角色——傳統小說人物試論之一〉,《古典文學》第7集(臺北:臺灣學生書局,1985年)
 
系統版面圖檔 系統版面圖檔