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中文摘要 I
Abstract II
誌謝 III
目 錄 IV
表目錄 VI
圖目錄 VII
附 錄 VIII
第一章 背景介紹 1
第一節 基因的調控 1
第二節 MicroRNA 的介紹 1
第三節 大腸直腸癌的演進 4
第四節 APC的突變引發Wnt pathway的持續活化 5
第五節 NLK (nemo-like kinase) 的介紹 6
第六節 研究動機 7
第二章 實驗材料與方法 8
實驗材料 8
蛋白質電泳緩衝液配製 12
實驗方法 14
第一節 細胞培養 (Cell culture) 14
第二節 萃取含 miRNA 的全量 RNA 14
第三節 反轉錄反應 (reverse transcription, RT) 15
一、反轉錄反應 15
二、MiR-181b 的反轉錄反應 15
第四節 即時聚合酶連鎖反應 (Real-time PCR) 16
一、以即時聚合酶連鎖反應分析基因表現情形 16
二、以即時聚合酶連鎖反應分析 miR-181b 的表現情形 16
第五節 西方點墨法 (Western blot) 16
一、蛋白質分離 16
二、蛋白質電泳轉印法 (transfer) 17
三、免疫染色法 17
第六節 質體建構 (plasmid construct) 17
一、DNA 膠體分離製備 17
二、從膠體萃取DNA 18
三、二次質體建構 (sub-clone)、轉型作用(transformation)及藍白篩選殖(Blue-white screen) 18
四、放大質體與 DNA 純化 19
五、MiR-181b 表現載體 20
六、含有NLK 3’UTR的報導基因載體 20
第七節 短暫性轉移感染 (transient transfection) 21
第八節 雙冷光報導基因偵測 (Dual-luciferase reporter assay) 21
第三章 實驗結果 23
第一節 MiR-181b 在惡化的細胞株 SW620 中表現量較高 23
第二節 NLK mRNA可能是miR-181b的目標 23
第三節 NLK 的表現量受到 miR-181b 的影響 24
第四節 MiR-181b 抑制 NLK 的表現是藉由調控其 3’UTR 24
第五節 從病人檢體中觀察 miR-181b 及 NLK mRNA 的表現 25
第四章 討論 27
第一節 MiR-181b 在癌症中的角色 27
第二節 MiR-181b 與 NLK 精密調控細胞發育 28
第三節 NLK 與 miR-181b 於檢體中的表現 28
第四節 MiR-181 的家族成員 29
總結與未來展望 30
第五章 參考文獻 31
附 表 38
附 圖 39
附 錄 46
自 述 51
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