臺灣博碩士論文加值系統

本實驗利用Bacillus subtilis NPU 001以香茹草作為營養源，生產抗氧化與抗菌活性物質，並探討不同的培養條件對於抗氧化和酵素活性的影響及抗菌物質的抑制性。結果顯示香茹草經B. subtilis NPU 001發酵培養後有抗氧化和酵素活性。抗氧化活性部分，最適培養條件：培養時間二天、香茹草濃度3%、0.1%Tryptone、體積100 mL 有最高的清除DPPH自由基活性931.97±4.15 (trolox eq mg/g sample)；酵素活性部分，最適培養條件：培養時間48小時、香茹草濃度1%、0.1%Tryptone、體積100 mL 之蛋白酶活性為0.34±0.01 U/mL。另外，進一步探討後續抗菌實驗，在發酵液加熱前後發現第48小時的抗菌活性最佳，而水解的最佳抗真菌活性和蛋白質含量，皆以水解反應3分鐘為最佳；這是第一篇有關於利用B. subtilis NPU 001發酵香茹草來產生抗氧化及抗真菌活性物質的論文，並可取代有機溶劑萃取香茹草的方式；此外，本研究發現菌株B. subtilis NPU 001能分泌蛋白酶，具有增強抗氧化和抗真菌的效果。綜合以上結果，香茹草發酵液具有開發保健食品的潛力。

關鍵字： 香茹草、抗氧化活性、抗菌、Bacillus subtilis

This experiment uses Bacillus subtilis NPU 001 to take Glossogyne tenuifolia as nutrient source, which can produce active ingredients of antioxidant and antifungal, and also discuss different cultivating conditions affecting antioxidant and enzyme activities and the inhibition of antiseptic substance. The result shows that after being fermented and cultivated by B.subtilis NPU 001, G. tenuifolia has antioxidant and enzyme activity. In the aspect of antioxidant activity, the best cultivating condition is:two days of cultivating, G. tenuifolia concentration 3%, 0.1% Tryptone, 100 mL volume, and free radical activity with highest DPPH 931.97±4.15 (trolox eq mg/g sample);In the aspect of enzyme activity, the best cultivating condition is:48 hours of cultivating, G. tenuifolia concentration 1%, 0.1%Tryptone, and 100 mL of protease enzyme activity 0.34±0.01 U/mL. In addition, we furthermore discuss following antifungal activity, and find out that before and after heating fermentation broth, the best antiseptic activity is in the forty-eighth hour, plus the best antifungal activity of hydrolysis and protein content are 3 minutes;this is the first report about using B. subtilis NPU 001 to ferment G. tenuifolia for producing active ingredients of antioxidant and antifungal, and this can replace the method of using organic solvent to extract G. tenuifolia; in addition, this research finds out that the strain B. subtilis NPU 001 can secrete protease, and it has the effect of strengthening antioxidant and antifungal. Summing up these results above, G. tenuifolia fermentation broth has the potential of developing dietary supplements.

Key words:Glossogyne tenuifolia, antioxidant activity,
antifungal activity, Bacillus subtilis

目錄
謝誌…………….………………………………...………………………I
目錄……………………………………………………………………...II
圖目錄……………………………………………...…………...……....VI
表目錄………………………………………………………..….……....X
中文摘要……………………………………………………….……….XI
英文摘要……………………………………………………………….XII
壹、前言………………………………………………………………….1
貳、文獻探討…………………………………………………………….3
一、Bacillus subtilis之特性與應用……………………………………..3
(一) 特性……………………………………………………….…...3
(二) 應用…………………………………………………………....5
二、香茹草………………………………………………………….……8
(一) 香茹草的型態與介紹…………………………………….…...8
(二) 香茹草對人體的影響及其保健功效………………...…….…8
(三) 香茹草的成分………………………………………………....8
三、蛋白酶 (Protease) 之介紹………………………………………...22
四、自由基、抗氧化物與疾病…....……………………….…………..23
(一) 自由基與抗氧化物質的關係………...……………………...23
(二) 油脂自氧化反應……………………………………………..27
(三) 常見抗氧化劑種類…….…………………….…..…...............28
(四) 抗氧化活性之測定..................................................................31
1. DPPH自由基清除能力測定………………………….……….31
2. 螯合亞鐵離子能力測定……………………………………....32
3. 還原力測定…………………………………………………....33
參、研究目的與實驗架構……………………………………..………..34
肆、材料與方法………………………………………….………….…..37
一、材料………………………………………………………..…..…….37
(一) 香茹草…………………………………………...…………...37
(二) 菌種……………………………………………...………..….37
(三) 培養基……………………………………………...………...37
(四) 藥品………………………………………………...………...38
(五) 儀器設備…………………………………………..…………39
二、實驗方法…………………………………………………….…....…41
(一) 樣品製備與菌種篩選…………………………...…………...41
(二) 最適培養條件之探討…………………………….……...…..42
(三) 抗氧化活性分析……………………………...…….………..45
DPPH自由基清除能力測定…………………………………..45
(四) 酵素活性分析………………...……………….……………..46
1. 蛋白酶 (Protease) 活性測定…………………………………..46
2. 幾丁聚醣酶 (Chitosanase) 活性測定………………………...47
3. 幾丁質酶 (Chitinase) 活性測定………………………...…....47
4. 纖維素酶 (Cellulose) 活性測定…………………...………....48
(五) 蛋白質定量…………………………….……………….….....50
(六) B. subtilis NPU 001發酵香茹草之上清液測定…………...…51
1. 生物分析法……………………………………………………..51
2. 發酵液對A. niger BCRC 31883之抑制菌絲測定…..…52
(七) 統計分析…………………………………….………….….....53
伍、結果與討論…………………………………………………………54
ㄧ、菌種鑑定……………………………………………………………54
二、最適培養條件之探討………………………………………………59
(一) 培養時間之探討…………………………………………......59
(二) 發酵液酵素活性測試……………………………...………...61
(三) 最適培養額外碳源………………………………………......62
(四) 最適培養額外氮源………………………………………......65
(五) 最適培養濃度………………………………………...……...69
(六) 最適培養體積………………………………………...……...72
(七) 最適培養時間…………………………………………...…...75
三、B. subtilis NPU 001發酵香茹草之上清液測定…………………...79
(一) 生物分析法………………………………………………......79
(二) 發酵液對A. niger BCRC 31883之抑制菌絲測定….....91
陸、結論…………………………………………………………..……..92
柒、參考文獻………………………………………………….…..……101

柒、參考文獻
丹羽韌負。1995。SOD與自由基。青春出版社。台北，台灣。
王子慶。2000。葡萄子與皮抗氧化性之研究。國立屏東科技大學食
品科學系碩士論文。屏東，台灣。
王秋月。2005。抗氧化配方製品對於大白鼠脂質代謝及抗氧化之影響。臺北醫學大學保健營養學系碩士論文。台北。台灣。
王美華。2006。木黴菌Trichoderma virens FT-333拮抗病原真菌特性分析及其抗菌蛋白之純化。國立嘉義大學生物科技研究所碩士論文。嘉義，台灣。
王志鵬 。2006。開發枯草桿菌持續型及誘導型表現系統以應用於自體、同源及異源蛋白質之表現暨建立芽孢桿菌益生菌表現系統。國立中興 大學食品暨應用生物科技學系碩士論文。台中，台灣。
王章存，康艷玲。2008。鹼性蛋白酶提取花生水解蛋白的研究。食品科技2008卷3期。
王強、彭開松、嚴兵、屠利民、塗健、祁克宗。2010。枯草芽孢桿菌源抗生素研究進展。動物醫學進展。第31卷第9期:97-101。
王朋朋、常娟、王平、左瑞雨、尹清強。2009。蛋白酶和澱粉酶產生菌的篩選及酶學性質分析研究。中國畜牧雜誌。第45卷第21期。
王城、趙杰、李旋亮、尹荣焕。2010。枯草芽孢桿菌對禽舍分離致
　病菌的抑菌作用研究。中國農學通報。第26卷第3期。
石佳平。2007。枯草桿菌Bacillus subtilis Y1336及放線菌Streptomyces candidus Y21007菌種之分子鑑定技術及其抑菌效果之研究。高雄師範大學生物科技系碩士論文。高雄，台灣。
朱天輝、楊佐忠、李姝江、韓珊。2010。枯草芽孢桿菌水溶性代謝產物及對血橙防腐保鮮效果。林業科學。第46卷1期。
李振登。2006。基礎食品微生物學，第三版。偉明圖書出版社。台北，台灣。
吳幸娟、吳佳娟、金惠民、胡淑惠、陳惠欣、章樂綺、張琳、黃惠煐、曾美智、劉慧蓉、蔡秀玲。2007。營養評估，第三版。華格那企業有限公司。台中，台灣。
邱建緯。2008。養殖九孔之腸胃道中分離出具分解洋菜能力的菌株研究。國立高雄海洋科技大學水產食品科學所碩士論文。高雄，台灣。
李秀、賴茲漢。1992。食品分析與檢驗。精華出版社。台中，台灣。
李建文、蔡震方、熊睿。2009。比色法測定含酶飼料還原糖的研究。飼料工業，第30卷第23期。
何红、蔡學清、關雄、胡方平。2003。辣椒内生枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis )BS-2和BS-1防治辣椒炭疽病研究。植物病理學報。第33卷第2期。
何珮琳。2009。利用Bacillus subtilis E20做為南美白蝦飼料益生菌之研究。國立屏東科技大學水產養殖系碩士論文。屏東，台灣。
李風娟、程永強、殷麗君、劉曉慶、穆慧玲、李裡特。2009。枯草芽孢桿菌 B1的發酵大豆對血管緊張素轉換酶的抑製作用。食品科技。第34卷第9期。
林福呈，李德葆。2003。枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis) S9對植物病原真菌的溶菌作用。植物病理學報。第33第2期。
林芷妘。2006。桿菌屬臨床分離菌株抗真菌作用之分析。大 葉 大 學分子生物科技學系碩士班碩士論文。彰化，台灣。
林忠昇。2006。雞肉絲菇其菌種分離及菌種活性之探討。南台科技大學生物科技系碩士論文。台南，台灣。
林士艦。2008。以黑黴菌Aspergillus niger液態發酵生產聚乾露糖酶-椰乾萃油與噴流攪拌之研究。朝陽科技大學應用化學系碩士論文。台中，台灣。
金莉莉。2009。東北林蛙皮抗菌肽及其生物學特性。中國醫科大學博士學位論文。中國，大陸。
卓林霞、吳暉、劉冬梅。2009。枯草芽孢桿菌發酵豆粕產蛋白酶優化試驗研究。現代食品科技。第24卷第10期。
林智雄。2009。香茹萃取物對肝癌細胞之毒殺效果與其作用機轉。義守大學生物技術與化學工程學系碩士論文。高雄，台灣。
施淑銀。2006。以重複批次策略培養Aspergillus niger及其在維生素C醣苷生產之研究。國立清華大學化學工程學系碩士論文。新竹，台灣。
侯順連。2006。枯草芽孢桿菌 XM16菌株抗真菌蛋白的分離純化及性質結構研究。萊陽農學院植物病理學碩士學位論文。山東，大陸。
姜莉莉、陳彥闖、辛明秀。2009。枯草芽孢桿菌在防治植物病害上的應用及研究進展。安徽農學通報。第15卷第7期。
陳炳輝。2000。類胡蘿蔔素的特性與應用。科學發展月刊。第28卷第8期。
陳盈潔。2001。梔子萃取液之抑菌及抗氧化性之探討。國立屏東科技大學食品科學系碩士論文。屏東，台灣。
陳宜孜。2005。溫度與pH 對不同品種山藥抗氧化特性及其儲存性蛋白質dioscorin 安定性之影響。靜宜大學食品營養學系碩士論文。台中，台灣。
高學文、姚仕義、Huong Pham、Joachim Vater、王金生。2003。枯草芽孢杆菌B2菌株產生的抑菌活性物質分析。中國生物防治。第19第4期。
連潔群、楊又才。2006。新編實用營養學，第一版。藝軒圖書出版社。台北，台灣。
陳翠卿。2007。青草茶常用原料之抗氧化活性及成分。國立臺灣海洋大學食品科學學系碩士論文。基隆，台灣。
陳吉村。2008。抗氧化分析技術在農業上之應用。花蓮區農業專訊第六十四期。
陳秀蓉。2009。枯草芽孢桿菌 B2的發酵工藝及其復配研究。甘肅農業大學碩士學位論文。甘肅，大陸。
孫佳佳、王紅英、錢斯日古楞。常凱。2010。產膠原蛋白酶枯草芽孢桿菌的篩選。大連工業大學學報。第29卷4期。
張瑩貞。2000。Bacillus subtilis生產抗真菌物質之研究。大同大學生物工程研究所碩士論文。台北，台灣。
張為憲。2003。高等食品化學。華香園出版社。台北，台灣。
張文智。2003。利用Bucillus cereus發酵蝦蟹殼廢棄物所生產抗真菌酵素之分離純化及其應用。國立中興大學食品科學系博士論文。台中，台灣。
張竣凱、王姿文、田乃月、林美惠、賴雪端、羅怡珮。2006。生物學。美商麥格羅‧希爾國際出版公司 台灣分公司。台北，台灣。
張涵。2008。生防細菌W1的種類鑑定及其抗菌蛋白的分離純化與性質研究。揚州大學植物病理學碩士論文。江蘇，大陸。
曹輝、馬海樂、賈俊強、曲文娟、丁青芝、駱琳、王振斌、何榮海。2008。大米蛋白的雙酶分步水解及其產物的抗氧化研究。中國糧油學報。第23卷第6期。
黃仕政、蔡淑瑤、楊瓊花、韓青梅、施純堅、毛正倫。2006。香茹草之一般組成及其熱水萃取物之抗致突變性。中州學報第24期。
程洪斌、劉曉橋、陳紅漫。2006。枯草芽抱桿菌防治植物真菌病害研究進展。上海農業學報。
黃勤純。2008。發酵前及發酵後中草藥在抑制植物病原菌活性之研究。國立台南大學環境生態學系碩士論文。台南，台灣。
楊金豔。2009。枯草芽孢桿菌 XM16分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分離純化。河南農業科學。第2009卷12期。
葛俊宏。2009。利用Bacillus subtilis NPU 001 發酵香菇柄生產抗氧化活性物質。亞洲大學保健營養生技學系碩士論文。台中，台灣。
鄭佳倩。2007。以自由基捕捉/螢光法量測光催化反應中氫氧自由基之生成。國立高雄第一科技大學環境與安全衛生工程系碩士論文。高雄，台灣
劉靜、王軍、姚建銘、潘仁瑞、餘增亮。2004。枯草芽孢桿菌AJ抗菌物特性的研究及抗菌肽的分離純化。微生物學報第44卷第4期。
潘咸嘉。2005。多酚類化合物對抗興奮性毒性之神經元保護潛力研究。國立陽明大學生物藥學系碩士論文。台北，台灣。
潘冠守。2007。發酵前及發酵後中草藥抑菌活性之研究。國立臺南大學環境生態研究所碩士論文。台南，台灣。
劉盈芬。2007。批次高密度培養納豆菌之發酵條件探討。南台科技大學生物科技系碩士論文。台南，台灣。
蔡伊婷。2008。褐藻萃取物對大腸癌細胞株HT29細胞之增生抑制作用。元培科技大學醫學檢驗生物技術研究所碩士論文。新竹，台灣。
劉永鋒、陳志誼、周明國、張傑、宋福平、劉郵洲，羅楚平。2007。枯草芽孢桿菌Bs-916的液菌活性及其抑菌物質初探。農藥學學報第一期。
劉柏青。2008。利用枯草桿菌水解台灣鯛魚鱗膠原蛋白。國立成功大學化學研究所系碩士論文。台南，台灣。
賴宣妤。2003。青花菜之抗真菌蛋白基因。東海大學食品科學系碩士論文。台中，台灣。
賴力勤。2007。飼糧添加維生素C 或E 對白羅曼鵝屠後骨骼肌肌原纖維蛋白質降解之影響。國立嘉義大學動物科學系碩士論文。嘉義，台灣。
韓青梅、毛正倫、蔡淑瑤。2005。澎湖地區香茹栽培方法改進及其成分、精油與抗氧化力分析。高雄區農業改良場研究彙報第16卷第2期。
謝奉家。2005。植物病害的殺手明星枯草桿菌。科學發展。391期。
謝昆霖。2007。番木瓜果實水萃取物之抗氧化能力研究。靜宜大學食品營養學系碩士論文。台中，台灣。
謝蓓欣。2010。不同來源黑色素萃取物的物理化學特性及對紫外線之光保護與抗氧化能力之影響。國立嘉義大學動物科學系碩士論文。嘉義，台灣。
羅珮文。2001。台灣數種特有水果抗氧化活性及清除自由基能。輔仁大學食品營養學系碩士論文。台北，台灣。
Blumenthal, C. Z. (2004) . Production of toxic metabolites in Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, and Trichoderma reesei: justification of mycotoxin testing in food grade enzyme preparations derived from the three fungi. Regulatory Toxicology and Pharmacology. 39:214–228.
Binsan, W., Benjakul, S., Visessanguan, W., Roytrakul, S., Tanaka, M., Kishimr, H. (2008) . Antioxidative activity of Mungoong, an extract paste,from the cephalothorax of white shrimp (Litopenaeus vannamei). Food Chemistry. 106: 185–193.
Chiang , C. L., Chang, C. T., Sung, H. Y. (2003) . Purification and properties of chitosanase from a mutant of Bacillus subtilis IMR-NK1. Enzyme and Microbial Technology. 32: 260–267.
Ng, T. B. (2004) . Antifungal proteins and peptides of leguminous and non-leguminous origins. Peptides 25: 1215–1222.
Chu, S. C., and Chen, C. (2006) . Effects of origins and fermentation time on the antioxidant activities of kombucha. Food Chemistry. 98: 42-50.
Chyau, C. C., Tsai, S. Y., Yang, J. H., Weng, C. C., Han, C. M., Shih, C. C., Mau, J. L. (2007) . The essential oil of Glossogyne tenuifolia. Food Chemistry 100: 808–812.
Chang, W. T., Chen, Y. C., Jao, C.L. (2007) . Antifungal activity and enhancement of plant growth by Bacillus cereus grown on shellfish chitin wastes. Bioresource Technology. 98: 1224–1230.
Chena, W. M., Chang, Y. L., Chaolun, A. C., Jih, T. W., Shih, Y. S. (2010) . Involvement of an l-amino acid oxidase in the activity of the marine bacterium Pseudoalteromonas flavipulchra against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Enzyme and Microbial Technology. 47: 52–58.
Deng, A., Wu, J., Zhang, Y., Zhang,G., Wen, T. (2010) . Purification and characterization of a surfactant-stable high-alkaline protease from Bacillus sp. B001. Bioresource Technology. 101: 7100–7106.
Etsuo Niki. (2010) . Assessment of Antioxidant Capacity in vitro and in vivo experiments on pork. Free Radical Biology & Medicine.
Flyunt, R., Makogon, O., Asmusc, K. D. (2002) . Some new aspects in the chemistry of halogenated oxyl and peroxyl radicals. Radiation Physics and Chemistry. 65: 299–307
Guglielmetti, S., Mora, D., Parini, C. (2007) . Small rolling circle plasmids in Bacillus subtilis and related species: Organization, distribution, and their possible role in host physiology. Plasmid 57: 245–264.
Hsu, H. F., Houng, J. Y., Cang, C. L., Wu, C. C., Chang, F. R ., Wu, Y. C. (2005) . Antioxidant Activity, Cytotoxicity, and DNA Information of Glossogyne tenuifolia. 53: 6117-6125.
Ha, C. L., Weng, C. Y., Wang, L., Lian, T. W., Wu. M. J. (2006) . Immunomodulatory effect of Glossogyne tenuifolia in murine peritoneal macrophages and splenocytes. Journal of Ethnopharmacology. 107: 116–125.
Hu, Y., Du, Y., Yang, J., Kennedy, J.F., Wang, X., Wang, L. (2007) . Synthesis, characterization and antibacterial activity of guanidinylated chitosan. Carbohydrate Polymers. 67: 66–72.
Hsu, H. F., Houng, J. Y., Kuo, C. F., Tsao, N., Wua,Y. C. (2008) . Glossogin, a novel phenylpropanoid from Glossogyne tenuifolia, induced apoptosis in A549 lung cancer cells. Food and Chemical Toxicology. 46: 3785–3791.
Hsu, H. F., Wu, Y. C., Chen,L. C., Houng, J. Y. (2009) . Induction of Apoptosis of A549 Lung Cancer Cell Line by Dehydrocostus Lactone Isolated from Glossogyne Tenuifolia. Journal of Food and Drug Analysis. 17(2): 107-115.
J. Leonel O. S., Jorge, O. Soto. (2006) . The functional property of Bacillus for shrimp feeds. Food Microbiology. 23: 519–525.
Keijer, J., T, Bunschoten, A., Palou, A., Nicole, L.W., Hal, F.V. (2005) . Beta-carotene and the application of transcriptomics in risk–benefit evaluation of natural dietary components. Biochimica et Biophysica Acta. 1740: 139– 146.
Kudo, K., Onodera, S., Takeda, Y., Benkeblia, N., Shiomi, N. (2009) . Antioxidative activities of some peptides isolated from hydrolyzed potato protein extract. Journal of Functional Foods. 1: 170–176.
Kameji, H., Mochizuki, K., Miyoshi, N., Goda, Toshinao. (2010) . β-Carotene accumulation in 3T3-L1 adipocytes inhibits the elevation of reactive oxygen species and the suppression of genes related to insulin sensitivity induced by tumor necrosis factor-a. Nutrition. 26: 1151–1156.
Kumar, S., Kannabiran, K. (2010) . Antifungal activity of Streptomyces VITSVK5 spp. against drug resistant Aspergillus clinical isolates from pulmonary tuberculosis patients. Journal de Mycologie Médicale. 20: 101-107.
Lauera, I., Bonnewitza, B., Meunierb, A., Beverin, Mi. (2000) . New approach for separating Bacillus subtilis metalloprotease and a-amylase by affinity chromatography and for purifying neutral protease by hydrophobic chromatography. Journal of Chromatography B. 737: 277–284.
Lin, P., Ng, T, B. (2008) . A novel and exploitable antifungal peptide from kale (Brassica alboglabra) seeds. Peptides. 29: 1664 –1671.
Lin, Y.W., Hsiao, Y.C., Chiang, B.H. (2009) . Production of high degree polymerized chitooligosaccharides in a membrane reactor using purified chitosanase from Bacillus cereus. Food Research International. 42: 1355–1361.
Lin, P., Wong, J, H., Xia, L., Ng, T, B. (2009) . Campesin, a thermostable antifungal peptide with highly potent antipathogenic activities. Journal of Bioscience and Bioengineering. 108(3): 259–265.
Liu, B., Huang, L., Buchenauer, H., Kang, Z. (2010) . Isolation and partial characterization of an antifungal protein from the endophytic Bacillus subtilis strain EDR4. Pesticide Biochemistry and Physiology. 98: 305–311.
Lee, N. K., Yeo, I. C., Park, J. W., Kang, B. S., Hahm, Y. T. ( 2010) . Isolation and characterization of a novel analyte from Bacillus subtilis SC-8 antagonistic to Bacillus cereus. Journal of Bioscience and Bioengineering. 110: (3)298-303.
Mehrotra, S., Pandey, P.K., Gaur, R., Darmwal, N.S. (1999) . The production of alkaline protease by a Bacillus species isolate.Bioresource Technology. 67: 201-203.
Mitchel, R. E. J., PhD, McCann, R. A. (2003) . Skin tumor promotion by Vitamin E in mice:amplification by ionizing radiation and Vitamin C. Cancer Detection and Prevention. 27: 102–108.
Nicole, L. W., Hal, F. V., Bunschoten, J. E., Venema, D. P., Peter, C. H., Hollman., Riss, G., Keijer, J. (2005) . Human intestinal and lung cell lines exposed to carotene show a large variation in intracellular levels of carotene and its metabolites. Archives of Biochemistry and Biophysics. 439: 32–41.
Ng, T. B. (2004) . Antifungal proteins and peptides of leguminous and non-leguminous origins. Peptides 25: 1215–1222.
Nagahama, H., Kashiki, T., Nwe, N., Jayakumar, R., Furuike, T., Tamura,H.. (2008) . Preparation of biodegradable chitin/gelatin membranes with GlcNAc for tissue engineering applications. Carbohydrate Polymers. 73: 456–463.
Ramnani, P., Kumar, S. S., Gupta, R. (2005) . Concomitant production and downstream processing of alkaline protease and biosurfactant from Bacillus licheniformis RG1: Bioformulation as detergent additive. Process Biochemistry. 40: 3352–3359.
Romero, D., Vicente, A. D., Rivo, H., Rakotoaly, S. E., Dufour, Veening, J. W., Arebola, E., Francisco, M., Cazorla, Oscar, P., Kuipers, Paquot, M., Alejandro, P.García. (2007) . The Iturin and Fengycin Families of Lipopeptides Are Key Factors in Antagonism of Bacillus subtilis Toward Podosphaera fusca. 20 (4): 430–440.
Rai and Mukherjee. (2010) . Statistical optimization of production, purification and industrial application of a laundry detergent and organic solvent-stable subtilisin-like serine protease (Alzwiprase) from Bacillus subtilis DM-04. Biochemical Engineering Journal. 48: 173–180.
Shahidi, F., Kamil, J., Arachchi, V., JeonYJ. (1999) . Food applications of chitin and chitosans. Trends in Food Science & Technology. 10: 37±51.
Stein, T. (2005) . Bacillus subtilis antibiotics: structures, syntheses and specific functions. Molecular Microbiology. 56: (4)845–857.
Silvia M. Albillos, Marı’a D. Busto, Manuel, P.M., Natividad, O. (2007) . Analysis by capillary electrophoresis of the proteolytic activity of a Bacillus subtilis neutral protease on bovine caseins.International Dairy Journal. 17: 1195–1200.
Sharma, N., Tripathi, A. (2008) . Effects of Citrus sinensis (L.) Osbeck epicarp essential oil on growth and morphogenesis of Aspergillus niger (L.) Van Tieghem. Microbiological Research. 163: 337-344.
Swain, M.R., Ray, R. C. (2009) . Biocontrol and other beneficial activities of Bacillus subtilis isolated from cowdung microflora. MicrobiologicalResearch. 164: 121-130.
Sudhir, K., Rai, Ashis, K., Mukherjee. (2010) . Statistical optimization of production, purification and industrial application of a laundry detergent and organic solvent-stable subtilisin-like serine protease (Alzwiprase) from Bacillus subtilis DM-04. Biochemical Engineering Journal. 48: 173–180.
Theruvathil K. Sini, Sethumadhavan, S ., Paruthapara, T. M. (2007) . Study on the production of chitin and chitosan from shrimp shell by using Bacillus subtilis fermentation. Carbohydrate Research. 34: 22423–2429.
Tripathi, S., Mehrotra, G. K., Dutta, P.K. (2009) . Physicochemical and bioactivity of cross-linked chitosan–PVA film for food packaging applications. International Journal of Biological Macromolecules. 45: 372–376.
Wu, M. J., Wanga, L., Ding, H. Y., Weng, C. Y., Yen, J. H. (2003) . Glossogyne tenuifolia Acts to Inhibit Inflammatory Mediator Production in a Macrophage Cell Line by Downregulating LPS-Induced NF-IB. J Biomed Sci 616.
Wong, J, H., Ng, T. B. (2003) . Gymnin, a potent defensin-like antifungal peptide from the Yunnan bean (Gymnocladus chinensis Baill) . Peptides 24: 963–968.
Wu, M. J., Weng, C. Y., Ding, H. Y., Wu, P. J. (2005) .Anti-inflammatory and antiviral effects of Glossogyne tenuifolia. Life Sciences. 76: 1135–1146.
Wang, X., Du, Y., Yang, J., Wang, X., Shi, X., Hu, Y. (2006) . Preparation, characterization and antimicrobial activity of chitosan/layered silicate nanocomposites. Polymer.47: 6738-6744.
Yang, J. H., Tsai, S. Y., Han, C. M., Shih, C. C., Mau, J. L. (2006) . Antioxidant Properties of Glossogyne tenuifolia. The American Journal of Chinese Medicine. 34: (4)707–720.
Yuan, Y., Gao, Y., Zhao, J., Mao, L. (2008) . Characterization and stability evaluation of b-carotene nanoemulsions prepared by high pressure homogenization under various emulsifying conditions. Food Research International. 41: 61–68.
Yang, D., Wang, B., Wang, J., Chen, Y., Zhou. M. (2009) . Activity and efficacy of Bacillus subtilis strain NJ-18 against rice sheath blight and Sclerotinia stem rot of rape. Biological Control. 51: 61–65.
Yan, L., Jing, T., Yujun, Y., Bin, L., Hui, L., Chun, L. (2011) . Biocontrol Efficiency of Bacillus subtilis SL-13 and Characterization of an Antifungal Chitinase. Chinese Journal of Chemical Engineering. 19: (1) 128-134.
Yu, X., Ai, C., Xin, L., Zhou, G. (2011) . The siderophore-producing bacterium, Bacillus subtilis CAS15, has a biocontrol effect on Fusarium wilt and promotes the growth of pepper. European Journal of Soil Biology. 47: 138-145.
Zainol, M.K., Abd-Hamid, A., Yusof, S. , Muse, R. (2003) . Antioxidative activity and total phenolic compounds of leaf, root and petiole of four accessions of Centella asiatica (L.) Urban. Food Chemistry. 81: 575–581.
Zhu, Y. P., Fan, J. F., Cheng, Y. Q., Li, L. T. (2008) . Improvement of the antioxidant activity of Chinese traditional fermented okara (Meitauza) using Bacillus subtilis B2. Food Control. 19: 654–661.
Zhu, Y. P., Yina, L. J., Cheng,Y. Q., Yamaki, Kohji., Mori, Y., Su, Y. C., Li, L. T. (2008) . Effects of sources of carbon and nitrogen on production of α-glucosidase inhibitor by a newly isolated strain of Bacillus subtilis B2. Food Chemistry. 109: 737–742.
Zhang, B., Xie, C., Yang. X. (2008) . A novel small antifungal peptide from Bacillus strain B-TL2 isolated from tobacco stems. Pepdites. 29: 350–355.