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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:鄭元凱
研究生(外文):Yuan kai Cheng
論文名稱:雲芝LH1之胞外低分子量多醣體生物活性探討
論文名稱(外文):Evaluation Bioactivity of Extracellular Low Molecular Polysaccharides from Coriolus versicolor LH1
指導教授:楊博文楊博文引用關係
指導教授(外文):Po wen Yang
口試委員:尤耿賢,陳信泰
口試日期:2012-07-06
學位類別:碩士
校院名稱:大葉大學
系所名稱:生物產業科技學系
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2012
畢業學年度:100
語文別:中文
論文頁數:78
中文關鍵詞:雲芝低分子量多醣DPPH 自由基清除能力清除OH.自由基能力α-glucosidase 活性抑制
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研究以本土新穎雲芝菌(Coriolus Versicolor) LH1菌絲體液態培養之低分子量多醣體進行抗氧化活性與α-glucosidase活性抑制評估。雲芝菌LH1菌絲體液態培養液,經酒精沉澱、透析收集含低分子量多醣體混合物 (分子量為12-16 kDa以下)、再經HP20大孔吸附樹脂分離後,即可獲得數個含低分子量多醣體混合物之fractions,接著分析清除DPPH自由基與清除OH.自由基能力評估其抗氧化活性能力,分析α-glucosidase活性抑制評估人體腸道澱粉水解後之血糖調控機制,最後再以最佳的低分子量多醣體分餾液再進一步進行DEAE Sepharose CL-6B離子交換樹脂,以獲得最佳抗氧化與酵素抑制活性之低分子量多醣體分餾液。
實驗結果顯示,雲芝菌LH1菌絲體液態培養液之低分子量多醣體混合物,經由HP20大孔吸附樹脂可獲得7個fractions,以清除DPPH自由基能力與清除OH.自由基能力等抗氧化分析以及α-葡萄糖苷酶活性抑制分析後,發現fraction-2 (低分子量多醣體-F2)和fraction-5 (低分子量多醣體-F5)的效果最好,再以DEAE Sepharose CL-6B 離子交換樹脂層析後,以分液F2-4 α-glucosidase活性抑制效果最好,其IC50為1.54 mg/ml。

The extracellular low molecular polysaccharides from submerged fermentation culture of Coriolus versicolor LH1 new strain in Taiwan has been analyzed the abilities of antioxidant and α-glucosidase inhibition in this research. The extracellular culture medium was processed in ethanol precipitation method to obtain the precipitated, and then went on dialysis with membrane to obtain the small molecular low molecular polysaccharides mixture (the molecular weight is less than 12-16 kDa). The seven low molecular polysaccharides mixture mixture fractions were obtained after seperation from HP20 macroporous adsorption resins. The abilities of antioxidant were owing to the scavenging assays of the diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) and the hydroxyl radical (OH), and the ability of blood sugar regulation was owing to the α-glucosidase inhibition where was existed in the human intestines and hydrolyzed the starch. Finally, Better low-molecular-weight polysaccharides fraction on during DEAE Sepharose CL-6B anion-exchange column. To obtain the best atioxidant and enzyme inhibition activity of low molecular weight polysaccharide fraction .
The results showed, extracellular low molecular Polysaccharides from submerged fermentation culture of Coriolus versicolor LH1. Get seven low molecular polysaccharides mixture mixture fractions were obtained after seperation from HP20 macroporous adsorption resins. By the Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) 、hydroxyl radical (OH) and the α-glucosidase inhibition analysis. Found best effect of fraction-2 andfraction-5, using a DEAE Sepharose CL-6B anion-exchange column can be divided into two signals. Against two signals for components analysis、UV full wavelength detection、molecular weight analysis use HPLC-RI(Refractive Index) Detector and FT-IR analysis.

封面內頁
簽名頁
中文摘要 iii
英文摘要 iv
誌謝 v
目錄 vi
圖目錄 x
表目錄 xi

1.前言 1
2.文獻回顧 2
2.1 雲芝(Coriolus Versicolor)的簡介 2
2.1.1 雲芝的型態及生長分布 2
2.1.2 雲芝化學成分 6
2.1.3雲芝的液態培養 6
2.2雲芝之活性成分介紹 7
2.2.1雲芝多醣 7
2.2.2腺苷 7
2.2.3三萜類 8
2.2.3.1萜類的單體 8
2.2.3.2菇類之萜類的基本結構 9
2.2.4 皂苷簡介 11
2.2.4.1皂甘結構 13
2.2.4.2 三萜類皂苷 18
2.3 雲芝功效成份介紹 18
2.3.1線苷(Adenosine) 18
2.3.2 多醣體 19
2.3.3三萜類 20
2.3.4 皂苷 21
2.4分離方法介紹 22
2.4.1離子交換層析法 22
2.4.2 凝膠樹脂 24
2.4.3大孔樹脂 25
2.4.3.1大孔吸附樹脂的吸附原理 27
2.4.3.2 大孔吸附樹脂的特性 27
2.4.3.3 大孔吸附樹脂吸附的影響因素 28
2.5抗氧化活性之測定原理 29
2.5.1 DPPH自由基清除能力 29
2.5.2 清除OH.自由基能力 30
2.5.3 α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)活性抑制之調控血糖體外試驗 30
2.6試驗方法 31
2.6.1研究目的 31
2.6.2樣品預處理試驗 31
3.材料與方法 32
3.1試驗流程圖 32
3.2試驗材料 34
3.3儀器設備 34
3.4.化學試藥 34
3.5分離用樹脂 35
3.6樣品前處理 36
3.7大孔樹脂層析 36
3.7.1樹脂前處理 36
3.7.2 大孔樹脂層析條件分析 36
3.8離子交換樹脂層析 37
3.8.1離子交換樹脂前處理 37
3.8.2離子交換樹脂層析 37
3.9分析方法 38
4.結果與討論 42
4.1雲芝發酵液低分子量多醣體製程與活性分析 42
4.2 HP20 大孔樹脂層析 44
4.3低分子多醣體大孔吸附層析分餾液之活性分析(清除DPPH自由基、清除OH.自由基及抑制α-glucosidase) 46
4.4 DEAE Sepharose CL-6B離子交換層析 49
4.5雲芝胞外低分子量多醣體分液F2、F5之活性分析 52
4.6 分餾液F2、F2-4、F5經由Sephadex G50 colunm 純化 57
4.7 分餾液F2、F2-4、F5 分子量分析 60
4.8 分餾液F2、F2-4、F5單醣成分分析 66
4.9 分餾液F2、F2-4、F5 紫外光全波長掃描 67
4.10 FTIR分析 69
5.結論 72
參考文獻 73
圖目錄
圖1雲芝在真菌門的分類 4
圖2雲芝子實體野生照 5
圖3菌類三萜的分類 10
圖4角鯊烯的骨架環化各種皂苷 12
圖5皂苷配糖體的三種主要構型 14
圖6三萜類與固醇類皂苷生合成路徑 15
圖7Squalene-2, 3-epoxide環化形成三萜類之過程 16
圖8單醣皂苷與雙醣皂苷 17
圖9抗氧化劑RH 與DPPH 自由基反應之機制 29
圖10LH1發酵液低分子量多醣之HP20大孔吸附樹脂層析圖 45
圖11分液低分子量多醣體-F2之DEAE-Sepharose CL-6B離子交換樹脂層析圖 50
圖12分液低分子量多醣體-F5之DEAE-Sepharose CL-6B離子交換樹脂層析圖51
圖13分液低分子量多醣體-F2之Sephadex G50管柱層析圖 57
圖14分液低分子量多醣體-F5之Sephadex G50管柱層析圖 58
圖15分液低分子量多醣體-F2-4之Sephadex G50管柱層析圖59
圖16分子量標準曲線 61
圖17F2分子量 63
圖18F5分子量 64
圖19F2-4分子量 65
圖20分餾液F2紫外光全波長掃描 67
圖21分餾液F2-4紫外光全波長掃描 68
圖22分餾液F5紫外光全波長掃描 68
圖23分液F2、F2-4、F5的FT-IR 指紋圖譜 70
表目錄
表1各種纖維素交換樹脂及其活性基團 23
表2三種凝膠樹脂的型號 25
表3雲芝發酵液及其處理後之活性成分分析 43
表4雲芝發酵液低分子量多醣體分液之活性分析 47
表5雲芝發酵液低分子量多醣體分液之成份分析 48
表6雲芝胞外低分子量多醣分液-F2之活性分析 53
表7雲芝胞外低分子量多醣分液-F5之活性分析 54
表8雲芝發酵液低分子量多醣體分液-F2之成份分析 55
表9雲芝發酵液低分子量多醣體分液-F5之成份析 56
表10分液F1-F7和F2-4分子量分析 62
表11多醣分餾液單醣組成份 66
表12FT-IR多醣之官能基 71

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