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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:蔣佳蓉
研究生(外文):Chiang,Chiajung
論文名稱:利用痰抹片結果評估TBcID之鑑定報告時效性
論文名稱(外文):To Evaluate Of Timeliness Of TBcID From Sputum Smear Results
指導教授:姜泰安博士廖東南博士
指導教授(外文):Chiang TaianLiao,Tungnan
口試委員:姜泰安博士廖東南博士吳佩芬博士
口試委員(外文):Chiang TaianLiao,TungnanWu, Peifen
口試日期:2012-06-21
學位類別:碩士
校院名稱:中華醫事科技大學
系所名稱:醫學檢驗生物技術系碩士班
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學技術及檢驗學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2012
畢業學年度:100
語文別:中文
論文頁數:71
中文關鍵詞:MPB64抗原IS6110生物晶片免疫色層分析法
外文關鍵詞:MPB-64 antigenIS6110biochipsICA
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本研究分別利用快速鑑定 (免疫色層分析法 )為偵測結核菌群中獨有MPB-64抗原檢測方式及分子生物檢測方式(生物晶片) 為偵測結核菌群中獨有的IS6110 片段為探針之檢測方式,利用結核菌液態快速培養基陽性後、進行抗酸菌染片觀察為結核菌索狀形態後,若原始痰檢體之結核菌價數判斷菌落數分別為4+、3+、2+、1+、scanty、陰性,分別平均6.9、9.2、10.6、13.8、11.6、17.0天即可知道鑑定是否為結核桿菌群,而快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)之檢測發現敏感度、特異性、偽陰性、偽陽性、陽性預測值、陰性預測值、準確性分別為91.9%、98.2%、8.1 %、1.8%、96.6%、95.7%,96.0%;分子生物檢測方式(生物晶片)之檢測發現敏感度、特異性、偽陰性、偽陽性、陽性預測值、陰性預測值、準確性分別為95.9%、91.1%、4.0%、8.8%、85.6%、97.6%、92.9%,顯示分子生物檢測方式(生物晶片)在偽陽性比快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)高,兩者有顯著差異(8.8%vs 1.8%)(p<0.05);快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)檢測方式在特異性、陽性預測值(生物晶片) 比分子生物較佳(98.2%、96.6% vs、91.1%、85.6%)兩者有顯著差異(p<0.05),但敏感度、偽陰性、陰性預測值、準確性兩者無顯著差異(91.9%, 8.1%, 95.7%, 96.0% v.s. 95.9%, 4.0%, 97.6%, 92.9%)(p>0.05);快速鑑定檢測方式(免疫色層分析法)其檢測方法簡單只需15分鐘,因此若X光臨床診斷非肺結核(支氣管肺炎、肺炎等),利用結核菌液態快速培養基陽性後、進行染片觀察結核菌索狀、高價數之結核菌在一週左右即可知道鑑定是否為結核桿菌群,操作快速,且不需任何儀器,成本相對較分子生物檢測方式(PCR)低廉,除了分子生物檢測方式(生物晶片)外,利用ICA檢測方式(免疫色層分析法)為提供臨床鑑定上良好之結核菌鑑定工具,以利臨床報告之參考依據。
In this study,we use both Immuno-chromatography (ICA) assay,which detects MPB-64 antigen of TB,and Nucleic acid amplification test,which detects IS 6110 gene of TB.The samples were processed with tuberculisos culture from MGIT,and checking cord formation by Ziehl-Neelsen stain,sequentially.The result shows that the time to identify takes 6.9,9.2,10.6,13.8,11.6,17.1 days while the smear of sputum was4+,3+,2+,1+,scanty and negative,respectively.
The sensitivity, specificity, false negatives (FN), false positives (FP), positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV), and accuracy of Immuno-chromatography assay were 91.9%, 98.2%, 8.1%, 1.8%, 96.6%, 95.7%, and 96.0%, respectively. On the other hand, Nucleic acid amplification test was 95.9%, 91.1%, 4.0%, 8.8%, 85.6%, 97.6%, and 92.9%, respectively.
According the results, the NAA had more false positives than ICA (8.8% v.s. 1.8%, p<0.05), consequently ICA showed higher specificity and positive predictive value than NAA (98.2%, 96.6% v.s. 91.1%, 85.6%; p<0.05).Above all results got significant difference (p<0.05), but sensitivity, FN, NPV, and accuracy didn’t (91.9%, 8.1%, 95.7%, 96.0% v.s. 95.9%, 4.0%, 97.6%, 92.9%, p>0.05).
Therefore, Immuno-chromatography assay (ICA) will be an excellent tool for MTB identification because of its rapidity, easiness, device-free, and lower cost. In strong smear-positive case, the identification results will be reported about 1 week by MGIT culture, checking cord formation, and ICA test. In conclusion, ICA could be a good choice other than NAA to provide tuberculosis diagnosis and identification.

論文口試委員審定書 i
授權書 ii
中文摘要 iii-v
英文摘要 vi-vii
誌謝 viii-ix
論文目錄 x
圖表目錄 xiv

第一章 續論 1
第一節、研究背景 2
第二節、肺結核的病原與致病機轉 3
第三節、臺灣結核病流行病學 6
第四節、肺結核的傳染方式 7
第五節、結核病個案定義 8
第六節、分枝桿菌的生長特性 9
第七節、分枝桿菌的細菌學診斷及鑑定 11
第二章 研究目的 12
第三章 研究方法與材料 15
第一節、研究對象 15
第二節、研究方法 15
一、細菌學檢查 16
1、檢體處理: 16
(1)、檢體種類 16
(2)、材料與試劑 16
○1 試劑配製 16
○2 phosphate buffer 17
(3)、儀器 17
(4)、痰液檢體處理方法 17
2、MGIT管檢體接種及次培養接種 18
(1)、MGIT原理 18
(2)、材料 20
○1 液態培養基 20
○2 PANTA,OADC 20
○3無菌吸管 20
○4 廢液桶 20
(3)、儀器 20
(4)、MGIT試管接種方法 20
(5)、次培養接種 20
3、抗酸菌抹片處理 21
(1)、原理 21
(2)、檢體種類 21
(3)、材料 21
○1 顯微鏡、拭鏡紙、鏡油、95%酒精棉 21
○2 玻片、標籤 21
○3 Ziehl-Neelsen(ZN)染色液 21
(4)、儀器設備 21
(5)、Ziehl-Neelsen 染色法 22
二、TBcID檢測方式(免疫色層分析法) 23
1、原理 23
2、檢體種類 23
3、材料 23
4、儀器 23
5、檢測方法 23
6、相關流程 24
三、分子生物檢測方式(生物晶片分析法) 24
1、原理 24
2、檢體種類 25
3、材料與試劑 25
4、儀器 27
5、方法 28
(1)、檢體核酸萃取 28
(2)、核酸增幅放大 29
(3)、核酸雜交 30
(4)、洗滌及呈色 31
6、流程 32
7、分析結果 32
四、傳統生化鑑定檢測 33
1、Niacin試驗原理 33
(1)、檢體種類 33
(2)、試劑 33
(3)、方法步驟 34
2、硝酸鹽還原試驗原理 34
(1)、檢體種類 35
(2)、試劑 35
(3)、方法步驟 35

第三節、資料處理及統計方法 36
第四章 結果及討論 37
第一節、結核菌診斷方法 37
第二節、結核菌檢驗方法 37
第三節、結核病防治問題 38
第四節、研究結果 40
第五章 結論與建議 44
參考文獻 47
附錄圖、表 51
表一、抗酸菌抹片價數報告結果 51
表二、 TBcID陽性與分子生物檢測一致性比較 52
表三、TBcIDa結果與傳統鑑定結果比較 53
表四、分子生物結果與傳統鑑定結果比較 54
表五、TBcID檢測結果與分子生物結果比較 55
表六、結核菌抹片結果次數分配表 56
表七、報告平均天數結果次數分配表 56
表八、分子生物檢測與TBcID檢測報告天數比較 57
表九、分子生物檢測與TBcID檢測成本比較 57
圖一、研究設計圖 58
圖二、抗酸菌抹片報告圖片結果 59
圖三、TBcID陰性反應 61
圖四、TBcID陽性反應 61
圖五、免疫色層分析法檢測流程圖 62
圖六、分子生物(生物晶片)作業流程 63
圖七-1、圖片參考資料:晶宇生物科技有限公司 64
圖七-2、分子生物(生物晶片)檢測結果 65
圖八-1、TBcID/分子生物(生物晶片)檢測結果比較圖 66
圖八-2、TBcID/分子生物(生物晶片)檢測結果比較圖 66
圖九、結核菌抹片結果次數分配圖 67
圖十、抗酸菌抹片結果陰性與報告天數直方圖 67
圖十一、抗酸菌抹片結果Scanty與報告天數直方圖 68
圖十二、抗酸菌抹片結果1+與報告天數直方圖 68
圖十三、抗酸菌抹片結果2+與報告天數直方圖 69
圖十四、抗酸菌抹片結果3+與報告天數直方圖 69
圖十五、抗酸菌抹片結果4+與報告天數直方圖 70
圖十六、抗酸菌抹片結果與平均報告天數直方圖 70
圖十七、抗酸菌抹片結果/報告天數結果盒型圖 71





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