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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:陳沭勝
研究生(外文):Shu-ShengChen
論文名稱:臺灣侵襲性綠膿桿菌對碳氫黴烯類抗藥性之特性分析
論文名稱(外文):Characteristics of carbapenem-resistance among invasive Pseudomonas aeruginosa in Taiwan
指導教授:吳俊忠
指導教授(外文):Jiunn-Jong Wu
學位類別:碩士
校院名稱:國立成功大學
系所名稱:微生物及免疫學研究所
學門:生命科學學門
學類:微生物學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2011
畢業學年度:100
語文別:中文
論文頁數:116
中文關鍵詞:綠膿桿菌碳氫黴烯抗生素OprDAmpC碳氫黴烯酶
外文關鍵詞:Pseudomonas aeruginosacarbapenemOprDAmpCcarbapenemase
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中文摘要 ..................... i
英文摘要 .................... ii
誌謝 .................. iii
目錄 ................... iv
表目錄 ............ viii
圖目錄 ............... ix
符號與縮寫 .............. x
第一章 緒論 ............. 1
1-1 綠膿桿菌 ..................................... 1
1-2 抗生素 ............................................ 2
1-2-1 乙內醯胺類(β-lactams) ................ 2
1-2-2 氟喹諾酮類(Fluoroquinolones) ...................... 5
1-2-3 胺基醣苷類(Aminoglycosides) ............... 5
1-2-4 四環黴素類(Tetracyclines) ................ 6
1-2-5 福利黴素類(Rifamycins) .................. 6
1-2-6 巨內酯環類(Macrolides) ................... 6
1-2-7 脂肽類(Lipopeptides) .................... 7
1-3 抗藥基因 ............................................. 7
1-3-1 Class A β-lactamases ........................... 8
1-3-2 Class B β-lactamases ........................ 11
1-3-3 Class D β-lactamases .......................... 14
1-4 綠膿桿菌對carbapenem 的內生性抗藥機轉 ................ 17
1-4-1 Efflux pumps ...................................... 17
1-4-2 AmpC overproduction ........................ 19
1-4-3 Porin loss ............................ 19
1-4-4 Penicillin binding proteins(PBPs) .............. 20
1-5 研究目的 ............................... 21
第二章 材料與方法 .................................... 22
2-1 菌株來源、培養與保存 ....................... 22
2-2 抗生素感受性測試 ................................. 22
2-2-1 最小抑制濃度(minimum inhibitory concentration, MIC)測定 ................ 22
2-2-2 Modified Hodge test (MHT) ............... 23
2-2-3 2-MPA 雙紙錠協同試驗(2-mercaptopropionic acid double-disk synergy test) ....... 24
2-2-4 DPA 結合紙錠試驗(dipicolinic acid combined disk test, DPA-CDT) ..... 24
2-2-5 Efflux pump inhibition (EPI)assay ................. 25
2-2-6 Cloxacillin inhibitory assay ................. 25
2-3 DNA 實驗操作 ................................. 25
2-3-1 DNA 粗萃取 .......................... 25
2-3-2 聚合酶連鎖反應(Polymerase chain reaction, PCR)......25
2-3-3 DNA 定序(DNA sequencing) .............. 26
2-3-4 序列重組與分析(Sequence alignment and analysis) ............ 26
2-4 蛋白質實驗操作 .................................. 27
2-4-1 綠膿桿菌外膜蛋白質萃取(Extraction of P. aeruginosa outer membrane proteins) ................ 27
2-4-2 蛋白質濃度測定 .............................. 28
2-4-3 SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) .... 28
第三章 結果 .................... 29
3-1 綠膿桿菌之抗生素感受性測試 .................. 29
3-1-1 Antimicrobial agent susceptibilities ............. 29
3-1-2 Prevalence of carbapenem non-susceptible P. aeruginosa in NCKUH .......... 29
3-2 綠膿桿菌抗藥基因 ..................................... 30
3-2-1 Class A β-lactamases .................... 30
3-2-2 Class B β-lactamases ..................... 30
3-2-3 Class D β-lactamases ..................... 31
3-3 Efflux pump inhibition assay .................... 32
3-4 AmpC 大量表現與ESAC .................... 32
3-4-1 AmpC overproduction ....................... 32
3-4-2 ESAC characteristics ........................ 33
3-5 Porin profile 與OprD 蛋白質序列分析 .................. 33
3-5-1 oprD 基因的PCR 增幅 ...................... 33
3-5-2 OprD 蛋白的序列分析 ..................... 34
3-5-3 綠膿桿菌的outer membrane profile .......... 35
第四章 討論 ....................................... 36
4-1 臺灣與全球carbapenem 抗藥性綠膿桿菌之比較與感染控制 .......... 36
4-2 侵襲性carbapenem 抗藥性綠膿桿菌在臨床的威脅 ............................................. 37
4-3 帶有carbapenemase 的綠膿桿菌表現型檢定 ................................... 38
4-4 Efflux pump inhibition assay 藥物選擇與其他可能的臨床用途 ..... 40
4-5 AmpC 與carbapenem 抗藥性綠膿桿菌 .......... 41
4-6 OprD 與carbapenem 抗藥性綠膿桿菌 ...................... 42
4-7 回顧與展望 ........................................ 44
4-7-1 綠膿桿菌已知的carbapenem 抗藥機轉 ............... 44
4-7-2 綠膿桿菌其他可能的carbapenem 抗藥機轉 ................ 45
4-7-3 Insertion sequences 所造成的抗藥性問題 ............. 46
第五章 總結 ............................................. 48
參考文獻 .......... 49
表 ............. 83
圖 .................. 93
Appendix ........... 100
自述 ................................................ 116

表目錄
Table 1 . The primers used in this study ................ 83
Table 2 . Antimicrobial agent susceptibilities of 82 carbapenem non-susceptible P . aeruginosa strains from NCKUH and NTUH ...................................... 86
Table 3 . Carbapenem-resistant mechanisms and MICs of 82 carbapenem-non-susceptible P . aeruginosa clinical isolates in Taiwan .......................................... 87
Table 4 . Phenotypic screening of class A and B carbapenemases of carbapenem-nonsusceptible P . aeruginosa clinical isolates ................................ 89
Table 5 . Cloxacillin inhibition assay for AmpC overproduction and extended-spectrum AmpC β - lactamase activity .................... 90
Table 6. oprD inactive mutation in P. aeruginosa in Taiwan ............................................ 91
Table 7. Correlation of MIC and carbapenem-resistant mechanisms in P. aeruginosa ..... 92

圖目錄
Figure 1 . Prevalence of carbapenem non-susceptible Pseudomonas aeruginosa in National
Cheng Kung University Hospital from 2000 to February , 2011 ...................... 93
Figure 2 . The size of β - lactamase PCR products .......... 94
Figure 3. Modified Hodge test for class A carbapenemase detection .............................. 95
Figure 4 . Detection of metallo - β - lactamase-producer by 2-MPA synergy disk test and DPA-combined disk test ...... 96
Figure 5 . Genetic characterization of acquired β - lactamases in carbapenem non-susceptible P. aeruginosa clinical isolates in Taiwan ............... 97
Figure 6 . Outer membrane protein profile of 82 carbapenem-non-susceptible P . aeruginosa clinical isolates ..... 98
Figure 7 . Summary of carbapenem-resistant mechanisms in P. aeruginosa in this study 99
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