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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:黃笠崴
研究生(外文):Huang, Leiway
論文名稱:應用基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜法 分析口腔癌之細胞與組織中之蛋白質型態發現口腔癌之生物標記
論文名稱(外文):Discovery of a biomarker of oral cancer by MALDI-TOF MS analysis of protein profiles in oral cancer cell lines and cancer tissues
指導教授:龍鳳娣
指導教授(外文):Lung, Fengdi
口試委員:駱碧秀蔡菁華劉建忠
口試委員(外文):Lou, BihshowTsai, JinghuaLiu, Chienchung
口試日期:2012-06-25
學位類別:碩士
校院名稱:東海大學
系所名稱:化學系
學門:自然科學學門
學類:化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2012
畢業學年度:100
語文別:中文
論文頁數:60
中文關鍵詞:口腔癌MALDI-TOF質譜法
外文關鍵詞:Oral squamous cell carcinomaMALDI-TOF MS
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口腔鱗狀細胞癌是好發於抽菸、酗酒以及嚼食檳榔者之惡性與侵襲性之腫瘤。口腔癌為台灣十大致死癌症之一,因此發展一個能偵測口腔癌且能在早期鑑定出高風險族群的方法,是有其急迫性的。本篇論文研究之目的是在優化實驗條件,並研發一個能有效偵測口腔癌進展之方法。我們從六個不同的口腔癌細胞株與三個正常細胞株,以及八個口腔癌組織及其匹配之正常黏膜組織中萃取出所有蛋白質,再應用 基質輔助雷射脫附游離飛行時間質譜法(MALDI-TOF MS)分析蛋白質之型態。細胞株與組織以蛋白質萃取試劑令其均質,經離心與利用C18 固相萃取管柱脫鹽後,經脫鹽的上清液以 MALDI-TOF MS 偵測。質譜分析之結果證實 10.9 kD 的蛋白質片段之訊號強度可能與口腔癌之進展相關。在本研究中,我們優化實驗條件,並應用 MALDI-TOF MS 分析檢體中蛋白質型態,發現10.9 kD 的蛋白質片段可作為口腔癌之生物標記。此生物標記可應用於研發偵測口腔癌之進展與臨床診斷之方法。
Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant and aggressive tumor which was occurred mostly in smokers, alcoholics, and betel squid chewers. OSCC is one of the top ten causes of death from cancers in Taiwan, therefore, there is an urgent need to develop a method for detecting oral cancer and identifying high risk individuals at the earlier stages. The goal of this study is to optimize experimental conditions for developing an efficient method for detecting the progression of oral cancer. We have extracted total proteins from six oral cancer cell lines, three normal cell lines and eight oral tumor tissues and their matched normal mucosas, followed by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) analysis of protein profiles. Cell lines and tissues were homogenized with protein extraction solution, after centrifugation, supernatant were desalted by solid phase extraction using C18 column. The desalted supernatant was analyzed by MALDI-TOF MS, and results demonstrated that the intensity of a protein fragment with molecular weight of 10.9 kD was correlated with progression of oral cancer. We have optimized experimental conditions and discovered a protein biomarker (10.9 kD) of oral cancer. This biomarker can be applied for the development of efficient methods for monitoring the progression of and diagnosis of oral cancer.
目錄

中文摘要.....II
英文摘要.....III
目錄..... VI
圖目錄.....VII
表目錄.....IX

第一章、前言.....1

第二章、文獻探討與研究動機.....3
2-1、口腔癌簡介.....3
  2-1-1、口腔癌相關統計資料.....3
  2-1-2、口腔癌之風險因子.....4
  2-1-3、口腔癌之篩檢與診斷.....5
  2-1-4、口腔癌之癌前病變與分期.....6
2-2、蛋白質體學.....11
2-3、蛋白質體學於口腔癌之應用.....13
2-4、研究動機.....14

第三章、材料與方法.....15
3-1、實驗設計與流程.....15
3-2 細胞培養.....16
  3-2-1 細胞培養之實驗材料與儀器設備.....16
  3-2-2 細胞培養之方法.....17
  3-2-3 細胞株裂解實驗.....27
  3-2-4 細胞裂解液之脫鹽.....28
3-3 口腔癌組織實驗.....31
  3-3-1 組織均質與裂解.....31
  3-3-2 組織裂解液之脫鹽.....32
  3-3-3 蛋白質濃度測定.....33
3-4 應用基質輔助雷射脫附飛行時間質譜法.....35
3-5 應用 30 kD 離心分子篩濾膜進行分離.....37

第四章 結果與討論.....38
4-1 不同品系之口腔癌細胞株部份之結果.....38
 4-1-1 不同基質之蛋白質譜圖比較.....39
 4-1-2 單層、雙層基質與脫鹽、未脫鹽樣品之蛋白質譜圖比較.....41
 4-1-3 不同品系之口腔癌細胞株之蛋白質圖譜比較結果.....42
4-2 不同品系之癌細胞株部份之結果.....44
4-3 口腔癌組織部份之結果.....46
  4-3-1 口腔癌細胞與口腔癌組織之蛋白質圖譜比較結果.....46
  4-3-2 口腔癌組織與正常組織之蛋白質圖譜比較結果.....47
  4-3-3 多組口腔癌組織之蛋白質圖譜比較結果.....49
4-4 內標準品之添加與測試.....53
4-5 以 30 kD離心分子篩濾膜過濾樣品.....56

第五章 結論與未來展望.....58
參考文獻.....59

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