臺灣博碩士論文加值系統

　　神經元（neuron）是一種高度特化的細胞，具有許多特化性次細胞結構。其中軸突（axon）是一種細長的神經纖維（process），從神經細胞本體（soma）中延伸出去接上目標細胞，在神經系統的功能和發育上軸突都扮演相當重要的角色。然而目前對中樞神經系統（central nervous system）軸突的研究並沒有很好的體外培養（in vitro）研究平台。因此本論文發展一個裝置，此裝置可以將大鼠（SD rats）海馬迴神經細胞（hippocampal cells）的軸突和細胞本體以及樹突（dendrites）分離開來，裝置使用孔徑為1μm的PCTE（聚碳酸酯）膜，並在PCTE膜下方緊貼著有孔洞且厚度為500μm的PDMS膜，之後上下由兩個大小相同的PDMS夾板固定組成。將海馬迴神經細胞養在PCTE膜上，因細胞本體的直徑約為10μm，所以會被侷限在PCTE膜上，僅有神經纖維可以穿過PCTE膜的孔洞往PDMS膜生長；成熟的神經細胞其樹突的長度只能長到約300μm，然而軸突的長度可以長到超過500μm，所以利用此裝置能夠在PDMS膜下層部分收集到單純的軸突。利用免疫螢光染色法證實在此裝置的PDMS膜下層僅有軸突而沒有樹突或是細胞本體存在。

Abstract i
摘要 ii
壹、緒論 1
貳、實驗材料與方法 5
一、實驗材料 5
（一） 老鼠育種 5
（二） 細胞培養 5
（三） 裝置液體隔離效能測試 6
（四） 裝置夾板的製作 6
（五） 免疫螢光染色法 6
二、實驗方法 8
（一） 裝置的製造及組裝 8
（二） 上下層PDMS夾板的製作拔除與清洗 9
（三） 有孔洞且具厚度的PDMS膜之模仁(mold)製作 9
（四） 製作有孔洞且具厚度的PDMS膜與清洗 11
（五） 大鼠解剖 11
（六） 神經細胞的培養 12
（七） 裝置液體隔離效能測試 12
（八） 免疫螢光染色法觀察神經細胞的生長情況 14
（九） 擷取免疫螢光染色圖片 14
參、結果 15
一、裝置的設計 15
（一） 裝置的組成元件 15
（二） 裝置的設計原理介紹 15
二、裝置的研究 16
（一） 有孔洞且具有厚度PDMS膜之製作 16
（二） 裝置的液體隔離效能測試 16
（三） 神經細胞培養之條件 17
（四） 以裝置區隔神經次細胞結構之生長－利用免疫螢光染色法觀察神經細胞(DIV17)於PCTE膜及PDMS膜正背面之生長情形 18
肆、討論 20
一、有孔洞的PDMS膜的製作 20
二、上下層夾板的製作 20
三、裝置的組裝 21
四、神經細胞培養之條件 21
伍、圖集 22
圖一、裝置之製作流程圖 22
圖二、裝置示意圖 23
圖三、裝置實際外觀 24
圖四、裝置的液體隔離效能測試 25
圖五、裝置於不同區域的免疫螢光染色圖（DAPI、GFAP、βIII tubulin） 26
圖六、裝置於不同區域的免疫螢光染色圖（DAPI、MAP2、 SMI312） 28
陸、參考資料 30

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