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研究生:林名薇
研究生(外文):Ming-Wei Lin
論文名稱:探討Eupafolin抑制脂多醣體誘導RAW 264.7巨噬細胞發炎反應之效用與作用機制
論文名稱(外文):The Anti-Inflammatory Effects and Mechanisms of Eupafolin in Lipopolysaccharide-Induced inflammatory response in RAW 264.7 Macrophages
指導教授:王淑慧王淑慧引用關係
口試委員:陳金銓潘思樺龔秀妮李江文
口試日期:2013-06-28
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣大學
系所名稱:解剖學暨細胞生物學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2013
畢業學年度:101
語文別:中文
論文頁數:64
中文關鍵詞:Eupafolin脂多醣體RAW 264.7iNOSCOX-2MAPKsNF-κB
外文關鍵詞:EupafolinLipopolysaccharideRAW 264.7iNOSCOX-2MAPKsNF-κB
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Eupafolin是一種類黃酮的物質,經由鴨舌癀Phyla nodiflora. (Verbenaceae) 此中草藥萃取而來。類黃酮通常是用來治療發炎、癌症及一些經細菌感染等的疾病。然而,Eupafolin的抗發炎效果及其作用機轉都尚未十分清楚,因此本篇的主要研究目的是利用老鼠的巨噬細胞 (RAW 264.7) 及小鼠腳掌與肺臟經脂多醣體 (LPS) 刺激發炎產生後,進一步觀察及釐清 Eupafolin 的抗發炎效果及作用機制。首先在in vitro方面,使用RAW 264.7細胞來進行體外實驗;以LPS作為刺激劑,作用於RAW 264.7細胞,來誘發發炎反應的產生,初步結果發現Eupafolin的預先作用能夠有效的降低LPS所誘發的inducible nitric oxide synthase (iNOS) 及cyclooxygenase (COX-2) 表現與NO的產生。藉由西方墨點法及免疫細胞化學染色法的分析,發現Eupafolin 是藉由抑制 LPS 所誘發的MAPKs中的c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) 磷酸化的表現,與nuclear factor-kappa B (NF-κB) 及activator protein-1 (AP-1) 這兩種轉錄因子的活化來達到抗發炎的作用。除此之外,在in vivo 實驗方面,經由組織染色的實驗結果也發現,相較於 LPS 單獨注射的刺激組,Eupafolin的預先投予,能有效的降低LPS誘發小鼠後腳掌所產生的發炎症狀-嗜中性球的浸潤現象和腳掌水腫,在肺臟誘發發炎方面,Eupafolin能有效減緩LPS誘發小鼠肺臟所產生的組織發炎、充血和巨噬細胞、嗜中性白血球、淋巴球等發炎細胞聚集的現象。由以上實驗結果推論,Eupafolin可能主要是藉由調降JNK、NF-κB和AP-1等訊息傳遞路徑,抑制發炎因子COX-2、iNOS、NO的表現。綜合上述,此次實驗結果發現Eupafolin 提供了另一種新潁且有效治療發炎相關疾病的藥物選擇。

Eupafolin, a flavonoid isolated from Phyla nodiflora.(Verbenaceae), has been used traditionally to treat disease such as inflammation, cancer and infections by fungi, bacteria, and viruses. However, its mechanism remains unknown. The aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory effects and underlying the regulatory mechanisms of the eupafolin on Lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells in vitro and mouse paw, lung in vivo. First at all, in in vitro study, eupafolin significantly decreased LPS-induced NO production and expressions of iNOS and COX-2 in RAW 264.7 cells. Furthermore, eupafolin suppressed NF-κB p65 translocation and activator protein-1 (AP-1) activation as well as NH (2)-terminal kinase (JNK) phosphorylation. In in vivo assay, eupafolin reduced the neutrophil infiltration, edema and inflammatory mediators expression in LPS-induced mouse paw and lung. The present results showed that eupafolin exerts its anti-inflammatory effects through the decrease of inflammatory mediators, expression by suppressing pJNK, NF-κB and AP-1 signaling pathways. Taken together, our results indicate that eupafolin may provide a useful therapeutic approach for inflammation-associated diseases.

目錄
口試委員會審定書 i
致謝 …… ii
中文摘要 …… iii
英文摘要 …… iv
目錄 …… v
圖目錄 …… viii
壹、 緒論 …… 1
一、引言 1
二、發炎的成因 1
三、巨噬細胞與發炎之關係 2
四、內毒素與發炎之關係 2
五、NO、iNOS、COX-2表現與發炎之關係 3
六、Mitogen Activated Protein Kinases、Akt 與發炎之關係 4
七、NF-κB、AP-1與發炎之關係 5
八、Eupafolin之藥理性質與應用 6
九、研究動機 6
貳、 實驗材料 7
叁、 實驗方法 14
一、細胞實驗 (in vitro) 14
1.細胞培養 (Cell culture) 14
2.細胞活性分析 (MTT assay) 14
3. 西方墨點分析法 (Western blotting). 14
4. 免疫細胞螢光染色法 (Immunocytochemistry; ICC) 17
5. Cytokine Array 17
6. 一氧化氮檢測試驗 (NO test; Griess assay) 18
7. 動物實驗 18
8. 蘇木紫- 伊紅染色 (Hematoxylin-eosin staining) 20
9. 支氣管肺泡灌洗液 (bronchoalveolar lavage fluid; BALF) 21
10. 流式細胞儀分析 (Flow cytometry analysis) 21
11. 免疫組織化學染色 (Immunohistochemistry; IHC) 22
肆、 實驗結果 25
一、細胞實驗 (in vitro study) 25
1. 利用細胞活性分析法觀察LPS對RAW 264.7之影響 25
2. 利用細胞活性分析法觀察eupafolin對RAW 264.7細胞之影響. 25
3. 利用西方墨點法分析LPS對RAW 264.7細胞的COX-2之表現 25
4. Eupafolin藉由調控RAW 264.7細胞中發炎相關蛋白COX-2之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 26
5. Eupafolin藉由調控RAW 264.7細胞發炎相關蛋白iNOS和NO之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 26
6. Eupafolin藉由調控RAW 264.7細胞發炎相關cytokines和chemokines之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 27
7. 在RAW 264.7細胞中eupafolin透過抑制MAPKs及Akt活化達到抑制LPS經誘發發炎的作用 28
8. Eupafolin在經LPS誘發發炎狀況的RAW 264.7細胞中抑制磷酸化MAPKs蛋白質表現 28
9. Eupafolin能透過抑制AP-1和NF-κB進入RAW 264.7細胞核內,達到抗發炎效果 29
二、動物實驗 (in vivo study) 30
1. Eupafolin減緩老鼠腳掌組織經LPS刺激所誘發的發炎反應…………… 30
2. Eupafolin藉由調控LPS誘發之巨噬細胞聚集所產生發炎相關蛋白COX-2、iNOS之表現達到抑制老鼠腳掌發炎的作用………. 31
3. Eupafolin減緩老鼠肺臟組織經LPS刺激所誘發的發炎反應 31
4. Eupafolin調控受LPS刺激的老鼠支氣管肺泡灌洗液中的發炎細胞表達 31
5. Eupafolin藉由調控LPS誘發之巨噬細胞聚集所產生發炎相關蛋白COX-2、iNOS之表現達到抑制老鼠肺臟發炎的作用 32
伍、 討論 -----------------------------------------------------------------------------------------33
陸、 參考文獻------------------------------------------------------------------------------------37
柒、 附圖------------------------------------------------------------------------------------------42


圖目錄
圖. 1 Eupafolin的結構式 42
圖. 2 利用細胞活性分析法觀察LPS對RAW 264.7細胞之影響 43
圖. 3 利用細胞活性分析法觀察eupafolin對RAW 264.7細胞之影響 44
圖. 4 LPS對RAW 264.7細胞中COX-2之表現 45
圖. 5 Eupafolin藉由調控RAW 264.7細胞發炎相關蛋白COX-2之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 46
圖. 6 以免疫細胞螢光染色法觀察eupafolin及LPS 對COX-2 之表現影響 47
圖. 7 Eupafolin藉由調控RAW 264.7細胞中發炎相關蛋白iNOS和NO之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 48
圖. 8 Eupafolin 藉由調控RAW 264.7細胞發炎相關cytokines和chemokines之表達抑制經LPS誘發發炎的作用 50
圖. 9 在RAW 264.7細胞中LPS經活化MAPKs及Akt訊息傳遞路徑誘發發炎的作用 51
圖. 10 Eupafolin在經LPS誘發發炎狀況的RAW 264.7細胞中抑制磷酸化 MAPKs蛋白質表現 52
圖. 11 Eupafolin在經LPS誘發發炎狀況的RAW 264.7中抑制磷酸化MAPKs蛋白質表現 53
圖. 12 Eupafolin能透過抑制NF-κB進入RAW 264.7細胞核內, 達到抗發炎效果 54
圖. 13 Eupafolin能透過抑制NF-κB位移進入RAW 264.7細胞核內,達到抗發炎效果 55
圖. 14 Eupafolin能透過抑制AP-1進入RAW 264.7細胞核內,達到抗發炎效果 56
圖. 15 Eupafolin減緩老鼠腳掌組織經LPS刺激所誘發的發炎反應 57
圖. 16 Eupafolin藉由調控LPS誘發之巨噬細胞聚集所產生發炎相關蛋白COX-2、iNOS之表現達到抑制老鼠腳掌發炎的作用 58
圖. 17 Eupafolin減緩老鼠肺臟組織經LPS刺激所誘發的發炎反應 59
圖. 18 Eupafolin調控受LPS刺激的老鼠支氣管肺泡灌洗液中的發炎細胞 表達 60
圖. 19 Eupafolin藉由調控老鼠肺臟發炎相關蛋白COX-2之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 62
圖. 20 Eupafolin藉由調控老鼠肺臟發炎相關蛋白iNOS之表現達到抑制經LPS誘發發炎的作用 63
圖. 21 細胞模式圖 64


Choi, J. H., Cha, D. S., and Jeon, H. (2012) Journal of ethnopharmacology 144, 379-386
2.Nworu, C. S., Nwuke, H. C., Akah, P. A., Okoye, F. B., and Esimone, C. O. (2012) Journal of immunotoxicology, Early online 1-9
3.Zanoni, I., Ostuni, R., Barresi, S., Di Gioia, M., Broggi, A., Costa, B., Marzi, R., and Granucci, F. (2012) The Journal of clinical investigation 122, 1747-1757
4.Vajja, B. N., Juluri, S., Kumari, M., Kole, L., Chakrabarti, R., and Joshi, V. D. (2004) International immunopharmacology 4, 901-909
5.Lee, M. S., Kwon, M. S., Choi, J. W., Shin, T., No, H. K., Choi, J. S., Byun, D. S., Kim, J. I., and Kim, H. R. (2012) Journal of agricultural and food chemistry 60, 9120-9129
6.Park, E. J., Kim, Y. M., Park, S. W., Kim, H. J., Lee, J. H., Lee, D. U., and Chang, K. C. (2013) Food and chemical toxicology : an international journal published for the British Industrial Biological Research Association 55, 386-395
7.Seehase, S., Lauenstein, H. D., Schlumbohm, C., Switalla, S., Neuhaus, V., Forster, C., Fieguth, H. G., Pfennig, O., Fuchs, E., Kaup, F. J., Bleyer, M., Hohlfeld, J. M., Braun, A., Sewald, K., and Knauf, S. (2012) PloS one 7, e43709
8.Claudino, R. F., Kassuya, C. A., Ferreira, J., and Calixto, J. B. (2006) The Journal of pharmacology and experimental therapeutics 318, 611-618
9.Kilar, A., Dornyei, A., and Kocsis, B. (2013) Mass spectrometry reviews 32, 90-117
10.Schuh, K., and Pahl, A. (2009) Biochemical pharmacology 77, 1827-1834
11.Byeon, S. E., Yi, Y. S., Oh, J., Yoo, B. C., Hong, S., and Cho, J. Y. (2012) Mediators of inflammation 2012, 512926
12.Park, H. S., Jung, H. Y., Park, E. Y., Kim, J., Lee, W. J., and Bae, Y. S. (2004) Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 173, 3589-3593
13.Park, H. H., Kim, M. J., Li, Y., Park, Y. N., Lee, J., Lee, Y. J., Kim, S. G., Park, H. J., Son, J. K., Chang, H. W., and Lee, E. (2013) International immunopharmacology 15, 296-302
14.Lee, S. J., Lee, I. S., and Mar, W. (2003) Archives of pharmacal research 26, 832-839
15.Salvemini, D., Kim, S. F., and Mollace, V. (2013) American journal of physiology. Regulatory, integrative and comparative physiology 304, R473-487
16.Lee, Y. J., Park, S. Y., Kim, S. G., Park da, J., Kang, J. S., Lee, S. J., Yoon, S., Kim, Y. H., Bae, Y. S., and Choi, Y. W. (2010) Biochemical and biophysical research communications 391, 1687-1692
17.Kim, Y. H., Woo, K. J., Lim, J. H., Kim, S., Lee, T. J., Jung, E. M., Lee, J. M., Park, J. W., and Kwon, T. K. (2005) Biochemical and biophysical research communications 329, 591-597
18.Huang, G. J., Bhaskar Reddy, M. V., Kuo, P. C., Huang, C. H., Shih, H. C., Lee, E. J., Yang, M. L., Leu, Y. L., and Wu, T. S. (2012) European journal of medicinal chemistry 48, 371-378
19.Fu, P. K., Wu, C. L., Tsai, T. H., and Hsieh, C. L. (2012) Evidence-based complementary and alternative medicine : eCAM 2012, 837513
20.Yang, T., Huang, Y., Heasley, L. E., Berl, T., Schnermann, J. B., and Briggs, J. P. (2000) The Journal of biological chemistry 275, 23281-23286
21.Soromou, L. W., Chu, X., Jiang, L., Wei, M., Huo, M., Chen, N., Guan, S., Yang, X., Chen, C., Feng, H., and Deng, X. (2012) International immunopharmacology 14, 66-74
22.Pearson, G., Robinson, F., Beers Gibson, T., Xu, B. E., Karandikar, M., Berman, K., and Cobb, M. H. (2001) Endocrine reviews 22, 153-183
23.Hotamisligil, G. S. (2005) Diabetes 54 Suppl 2, S73-78
24.Zhang, J. Y., and Selim, M. A. (2012) American journal of cancer research 2, 691-698
25.Kwon, J. Y., Hong, S. H., Park, S. D., Ahn, S. G., Yoon, J. H., Kwon, B. M., and Kim, S. A. (2012) European journal of pharmacology 696, 179-186
26.Choi, H. J., Chung, T. W., Kim, J. E., Jeong, H. S., Joo, M., Cha, J., Kim, C. H., and Ha, K. T. (2012) International immunopharmacology 14, 267-274
27.Kim, H. J., Lee, H. S., Chong, Y. H., and Kang, J. L. (2006) Toxicology 225, 36-47
28.Seong, K. H., Maekawa, T., and Ishii, S. (2012) Genes to cells : devoted to molecular & cellular mechanisms 17, 249-263
29.Yoon, S., and Seger, R. (2006) Growth factors (Chur, Switzerland) 24, 21-44
30.Kasza, A. (2013) Cytokine 62, 22-33
31.Ojaniemi, M., Glumoff, V., Harju, K., Liljeroos, M., Vuori, K., and Hallman, M. (2003) European journal of immunology 33, 597-605
32.Zhang, W. J., Wei, H., Hagen, T., and Frei, B. (2007) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 104, 4077-4082
33.Yunhe, F., Bo, L., Xiaosheng, F., Fengyang, L., Dejie, L., Zhicheng, L., Depeng, L., Yongguo, C., Xichen, Z., Naisheng, Z., and Zhengtao, Y. (2012) European journal of pharmacology 689, 255-261
34.Barnes, P. J., and Karin, M. (1997) The New England journal of medicine 336, 1066-1071
35.Shaulian, E. (2010) Cellular signalling 22, 894-899
36.Jiang, S., Zhu, W., Li, C., Zhang, X., Lu, T., Ding, Z., Cao, K., and Liu, L. (2013) International immunopharmacology 16, 100-107
37.Soromou, L. W., Jiang, L., Wei, M., Chen, N., Huo, M., Chu, X., Zhong, W., Wu, Q., Balde, A., Deng, X., and Feng, H. (2013) Journal of immunotoxicology, Early online 1-6
38.Priscila Dabaghi-Barbosa, A. M. R., Anderson Franco, Da Cruz Lima1, B. s. H. D. O., Maria Benigna Martinelli De, Oliveira, E. G. S. C., Si ’ Lvia M.S.C. Cadena1, & Maria, and Rocha, E. M. (2005) TAYLOR & Francis 39(12), 1305-1315
39.Lee, Y. S., Kang, O. H., Choi, J. G., Oh, Y. C., Chae, H. S., Kim, J. H., Park, H., Sohn, D. H., Wang, Z. T., and Kwon, D. Y. (2008) Journal of microbiology (Seoul, Korea) 46, 283-288
40.Pelzer, L. E., Guardia, T., Osvaldo Juarez, A., and Guerreiro, E. (1998) Farmaco (Societa chimica italiana : 1989) 53, 421-424
41.Chung, K. S., Choi, J. H., Back, N. I., Choi, M. S., Kang, E. K., Chung, H. G., Jeong, T. S., and Lee, K. T. (2010) Molecular nutrition & food research 54, 1318-1328
42.Tang, B., Du, J., Wang, J., Tan, G., Gao, Z., Wang, Z., and Wang, L. (2012) Oncology reports 27, 1090-1096
43.Herrerias, T., de Oliveira, B. H., Gomes, M. A., de Oliveira, M. B., Carnieri, E. G., Cadena, S. M., Martinez, G. R., and Rocha, M. E. (2008) Bioorganic & medicinal chemistry 16, 854-861
44.Maas, M., Deters, A. M., and Hensel, A. (2011) Journal of ethnopharmacology 137, 371-381
45.Lai, Z. R., Ho, Y. L., Huang, S. C., Huang, T. H., Lai, S. C., Tsai, J. C., Wang, C. Y., Huang, G. J., and Chang, Y. S. (2011) The American journal of Chinese medicine 39, 1275-1290
46.Chen, Y. C., Shen, S. C., Lee, W. R., Hou, W. C., Yang, L. L., and Lee, T. J. (2001) Journal of cellular biochemistry 82, 537-548
47.Jang, J. H., and Surh, Y. J. (2005) Biochemical and biophysical research communications 331, 1421-1428
48.Chen, J., Wang, J. B., Yu, C. H., Chen, L. Q., Xu, P., and Yu, W. Y. (2013) Journal of ethnopharmacology
49.Huh, J. E., Jung, I. T., Choi, J., Baek, Y. H., Lee, J. D., Park, D. S., and Choi, D. Y. (2013) European journal of pharmacology 698, 57-66
50.Chun, J., Choi, R. J., Khan, S., Lee, D. S., Kim, Y. C., Nam, Y. J., Lee, D. U., and Kim, Y. S. (2012) International immunopharmacology 14, 375-383
51.Aktan, F. (2004) Life sciences 75, 639-653
52.Son, Y., Cheong, Y. K., Kim, N. H., Chung, H. T., Kang, D. G., and Pae, H. O. (2011) Journal of signal transduction 2011, 792639-792644
53.Cakir, Y., and Ballinger, S. W. (2005) Antioxidants & redox signaling 7, 726-740
54.Owona, B. A., Njayou, F. N., Laufer, S., Moundipa, P. F., and Schluesener, H. J. (2013) Journal of ethnopharmacology In Press, Corrected Proof
55.Sanchez-Fidalgo, S., da Silva, M. S., Cardeno, A., Aparicio-Soto, M., Salvador, M. J., Frankland, A. C., Souza-Brito, A., and de la Lastra, C. A. (2013) Journal of ethnopharmacology In Press, Corrected Proof


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1. 川路祥代<1919年日本殖民地臺灣之<孔教論>>,《成大宗教與文化學報》(2001/12)
2. 黃美娥<「文體」與「國體」──日本文學在日治時期臺灣漢語文言小說中的跨界行旅、文化翻譯語書寫錯置>,《漢學研究》(2010/6)
3. 黃美娥<二十世紀初期的「西洋」:《漢文臺灣日日新報》通俗小說中的文化地景、敘事倫理與知識想像>,《臺灣文學研究集刊》(2009/2)
4. 黃美娥<日臺間的漢文關係──殖民地時期臺灣古典詩歌知識論的重構與演繹>,《臺灣文學研究集刊》(2006/11)
5. 黃美娥<從詩歌到小說──日治初期臺灣文學知識新秩序的生成>,《當代》(2006/1)
6. 黃美娥<差異/交混、對話/對譯──日治時期臺灣傳統文人的身體經驗與新國民想像(1895~1937)>,《中國文哲研究集刊》(2006/3)
7. 陳培豐<重新解析殖民地臺灣的國語「同化」教育政策──以日本的近代思想史為坐標>,《臺灣史研究》(2011/6)
8. 陳培豐<日治時期臺灣漢文脈的漂游與想像:帝國漢文、殖民地漢文、中國白話文、臺灣話文>,《臺灣史研究》(2008/12)
9. 許雪姬<日治時期臺灣的「通譯」>,《輔仁歷史學報》(2006/12)
10. 李豐楙<臺灣儀式戲劇中的諧噱性──以道教、法教為主的考察>,《民俗曲藝》(1991/5)
11. 謝崇耀<《崇聖道德報》及其時代意義研究>,《臺灣文學研究學報》(2007/10)
12. 邱各容<臺灣兒童文學一百年的歷史意義>,《全國新書資訊月刊》(2010/10)
13. 洪惟仁<日據時代臺語教育>,《臺灣風物》(1992/9)
14. 林淑慧<臺灣閩南生命禮俗諺語的文化詮釋>,《民間文學年刊》(2007/11)
15. 吳文星<日據時期臺灣總督府推廣日與運動初探(上)>,《臺灣風物》(1987/3)