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研究生:蔡碧玉
研究生(外文):Bi-Yu Tsai
論文名稱:芒果炭疽病原菌之分離與初步對峙試驗
論文名稱(外文):Isolation and Preliminary Confrontation Tests of Mango Anthracnose Pathogen Colletotrichum gloeosporioides
指導教授:劉炳嵐
指導教授(外文):Bing-Lan Liu
口試委員:張耀南詹效松
口試委員(外文):Yaw-Nan ChangHsiao-Sung Chan
口試日期:2013-05-30
學位類別:碩士
校院名稱:朝陽科技大學
系所名稱:應用化學系
學門:自然科學學門
學類:化學學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2014
畢業學年度:102
語文別:中文
論文頁數:73
中文關鍵詞:拮抗菌對峙實驗芒果炭疽病炭疽菌
外文關鍵詞:Microbial antagonnistConfrontation testMango anthracnose pathogenColletotrichum gloeosporioides
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芒果是台灣非常重要之外銷水果,然而儲藏性病害炭疽病(Anthracnose)嚴重的影響其出口的品質,大大的降低芒果的產值,炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)是引發芒果炭疽病最主要的病原菌。本研究嘗試以白殭菌(Beauveria bassiana)、黑殭菌(Metarhizium anisopliae var. anisopliae Metschnikoff)、蠟蚧輪枝菌(Verticillium lecanii)、液化澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)及枯草桿菌(Bacillus subtilis)進行芒果炭疽菌之抑制試驗,進而篩選出有效防治芒果炭疽病之拮抗菌,作為開發微生物製劑的依據。實驗首先自染有芒果炭疽病斑的果實表皮中,分離出芒果炭疽菌,之後再分別和上述五種拮抗菌進行對峙實驗,同時針對分離出之病原菌做初步培養基之探討。結果顯示,細菌類拮抗菌比真菌類拮抗菌對於芒果炭疽菌具有較高的抑制率。細菌性拮抗菌:相同稀釋倍數下的枯草桿菌抑制率比液化澱粉芽孢桿菌略好一些;真菌性拮抗菌:相同稀釋倍數下的黑殭菌和蠟蚧輪枝菌都比白殭菌抑制效果佳。在培養基試驗方面,將芒果炭疽菌分別培養於3種不同氮源:Peptone、Casein、黃豆粉(以Fructose為固定碳源)及5種不同碳源:Glucose、Fructose、Methocel、Glycerol、Sucrose (以Peptone為固定氮源),分別篩選出最適合之氮、碳源組成。實驗結果發現,以Casein為氮源的孢子數最高(2.1±0.2×104 conidia/mL);碳源則以Sucrose的孢子數最高達3.6±0.5×104 conidia/mL,初步推論Sucrose及Casein較適合作為芒果炭疽菌之碳、氮源。
Mangos are one of the very important export fruits in Taiwan. However, the stored diseases, Anthracnose, seriously affect the export qualities and greatly decline the output value of this fruit. Colletotrichum gloeosporioides is a main pathogenic fungus that causes anthracnose on mango. This research was attempted to employed five rival microorganisms, namely Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae var. anisopliae Metschnikoff, Verticillium lecanii, Bacillus amyloliquefaciens, and Bacillus subtilis, through confrontation test to finds out the inhibition effectiveness on this diseases. Furthermore, the research will sift out the efficient microbial antagonnist as a basis of developing the biological control agent. Furthermore, the proper medium carbon and nitrogen sources for the growth of C. gloeosporioides were also investigated. The C. gloeosporioides was isolated from anthracnose contaminated mangos' peels, antagonistic bacteria against pathogenic mango of C. gloeosporioides was studied. The results revealed that the bacterial antagonnist had better inhibotry activity than fungal antagonist. Amoung bacterial antagonnist, B. subtilis exhibited a better antagonistic activity than B. amyloliquefaciens, under same dilution ratio, against C. gloeosporioides. Parallelly, M. anisopliae var. anisopliae and V. lecanii demonstrated a better antagonistic activity than B. bassiana in fungal antagonist. Preliminary studied on C. gloeosporioides medium were investigated upon three different nitrogen sources (peptone, casein, soy bean powder) under fixed fuctrose as carbon source and five carbon sources namely, methocel, fructose, glucose, glycerol, and sucrose under fixed peptonr as nitrogen source. The highest spores count was observed when casein was main nitrogen source (2.10.2104 conidia/mL) after 7 days cultivation. In contrast, the highest spores count could be reached to 3.60.5104 conidia/mL while sucrose used as a main carbon source. In conclusion, the rudimentary deductions from presented observation indicated that the casein and sucrose would be a proper nitrogen and carbon sources candidate, respectively, for C. gloeosporioides growth in the submerged cultivation.
總目錄
摘要 I
Abstract II
謝誌 III
總目錄 V
圖目錄 VIII
表目錄 IX
第一章 緒論 1
1-1 前言 1
1-2 研究動機 2
1-3 研究目的 3
第二章 文獻回顧 7
2-1 生物防治 7
2-2 芒果炭疽病 9
2-3 拮抗菌介紹 12
2-3-1拮抗微生物 12
2-3-2白殭菌(Beauveria bassiana) 13
2-3-3黑殭菌(Metarhizium anisopliae var. anisopliae Metschnikoff) 14
2-3-4蠟蚧輪枝菌(Verticillium lecanii) 17
2-3-5液化澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) 18
2-3-6枯草桿菌(Bacillus subtilis) 19
第三章 材料與方法 22
3-1 儀器設備 22
3-2 培養基配製 23
3-3 菌種培養 24
3-4 實驗方法 26
3-4-1分離芒果炭疽菌及菌種保存 26
3-4-2孢子數的測量 27
3-4-3製作檢量線 27
3-4-4對峙培養 27
3-4-5芒果炭疽菌液態培養基初步篩選 28
第四章 實驗結果與討論 32
4-1 分離芒果炭疽菌 32
4-2 菌種活化 37
4-3 對峙實驗 40
4-3-1白殭菌 41
4-3-2黑殭菌 44
4-3-3蠟蚧輪枝菌 46
4-3-4液化澱粉芽孢桿菌 48
4-3-5枯草桿菌 50
4-4 芒果炭疽菌之液態培養基初步篩選 54
4-4-1不同氮源培養基 54
4-4-2不同碳源培養基 58
第五章 結論與未來展望 62
5-1 結論 62
5-2 未來展望 64
參考文獻 67
作者簡歷 73
圖目錄
圖1 論文研究架構 6
圖2 受芒果炭疽病感染之葉部(A)及果實(B) 11
圖3 實驗架構圖 30
圖4 對峙實驗示意圖 31
圖5 芒果炭疽病菌初步分離平面培養 33
圖6 芒果炭疽病菌不同稀釋濃度分離培養情形 34
圖7 芒果炭疽菌純粹培養情形 35
圖8 芒果炭疽菌以位相差顯微鏡觀察之型態圖(×400) 36
圖9 本研究使用之病原菌及拮抗菌在3%PDA培養情形 38
圖11 對照組無菌水(左)與白殭菌(右)對峙試驗結果 43
圖12對照組無菌水(左)與黑殭菌(右)對峙試驗結果 45
圖13對照組無菌水(左)與蠟蚧輪枝菌(右)對峙試驗結果 47
圖14對照組無菌水(左)與液化澱粉芽孢桿菌(右)對峙試驗結果 49
圖15對照組無菌水(左)與枯草桿菌(右)對峙試驗結果 51
圖16 不同氮源液態培養7天情形 55
圖17 芒果炭疽菌液態培養7天後以位相差顯微鏡觀察之型態圖(×400) 57
圖18 不同碳源液態培養7天情形 59
圖19 芒果炭疽菌液態培養7天後以位相差顯微鏡觀察之型態圖(×400) 61目錄
表1 近年來台灣芒果種植面積、產量及產值變化 5
表2 目前已商業化的黑殭菌產品 16
表3 芒果炭疽菌及各拮抗菌之孢子數 42
表4 不同拮抗菌對芒果炭疽菌之抑制率 53
表5不同氮源液態培養基對孢子數之影響 56
表6不同碳源液態培養基對孢子數之影響 60








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