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研究生:陳筱琪
研究生(外文):Hsiao-Chi Chen
論文名稱:Nif3 蛋白純化結晶與 X-ray 初步分析
論文名稱(外文):Expression, purification, crystallization and preliminary X-ray analysis of Nif3 protein
指導教授:陳曄陳曄引用關係
指導教授(外文):Yeh Chen
學位類別:碩士
校院名稱:弘光科技大學
系所名稱:生物科技研究所
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
畢業學年度:102
語文別:中文
論文頁數:45
中文關鍵詞:詹氏甲烷 球菌假設性蛋白質結晶學
外文關鍵詞:Methanocaldococcus jannaschiihypothetical proteincrystallization
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全球基因體計畫已定序出大量的基因體序列,其中假設性的未知功能蛋白質之數量穩步的增加,而全球性的結構基因體計畫也已解出數以千計的蛋白質結構,並從其蛋白質結構的角度推斷出該蛋白質的功能,為了釐清這些假設性蛋白質的未知功能,我們需要先研究其蛋白質結構,而新的蛋白質結構則可以對於未確認之演化關係提供更進一步的見解。NIF3蛋白質結構在基因體計畫中被定為高優先順位的目標蛋白,因為這個保守的假設性蛋白廣泛存在於各個生物體中,並且參與著各項重要的轉錄因子調控,MJ0927屬於NIF3的家族成員,其在生物體中具有高度的保留性演化,雖然有些細菌的NIF3蛋白質晶體結構已經被解出,但是我們對於古生菌中NIF3蛋白質結構訊息仍是不清楚的。為了瞭解細菌與古生菌中NIF3蛋白質結構上的差異,我們要將來自於古生菌Methanocaldococcus jannaschii 中的MJ0927蛋白進行蛋白純化與蛋白結晶,希望藉由X-ray繞射方法解析出MJ0927蛋白3D結構,以了解細菌與古生菌中NIF3家族成員之間的結構及功能差異性。
NGG1p-interacting factor 3 (Nif3)-like superfamily, is considered as a high-priority target since the conserved hypothetical protein is widely distributed in all kingdoms of living organisms and is involved in transcriptional regulation. MJ0927 is a member of the Nif3 family and is also widely distributed across living organisms. Although several crystal structures of Nif3 proteins have been reported, structural information on archaeal Nif3 is limited. To understand structural differences between bacterial and archaeal Nif3 and to determine its structure, MJ0927 was purified and crystallized from Methanocaldococcus jannaschii using the sitting-drop vapor-diffusion method. The crystals diffracted to a resolution of 2.47 Å and belonged to orthorhombic space group C222, with unit-cell parameters a = 81.21, b = 172.94, c = 147.42 Å. Determination of this structure may provide insights into the function of MJ0927.


中文摘要…………………………………………………………………………………...… ...I
英文摘要…………………………………………………………………………………...… ...II
目 錄…………………………………………………………………...…………………...III
第一章、緒論……………………………………………………………………………...…..1
1-1、NIF3蛋白家族………………………………………………………………...…..1
1-2、NIF3家族金屬離子結合特性………………………………………………..5
1-3、實驗目的……………………………………………………………………...…....8
第二章、實驗材料與方法………………………………………………………......9
2-1、質體之構築………………………………………………………………….......9
2-2、蛋白質表現測試……………………………………………………………...…..12
2-3、MJ0927蛋白質之純化 ……………………………………………………....14
2-4、蛋白質晶體培養……………………………………………………………...…...18
2-5、篩選合適之抗凍劑…………………………………………………………...…..19
2-6、X-Ray晶體繞射實驗 ………………………………………………………...….20
2-7、結構測定……………………………………………………………………...… .... 21
2-8、結構精緻化…………………………………………………………………...… ....22
第三章、結果與討論 ……………………...………………………………………………….23
3-1、實驗結果……………………………………………………………………...… .....23
3-2、討論…………………………………………………………………………...… ......29
附錄 …………………………………………………………………………...………………......33
參考文獻 ……………………………………………………………………...……………….....45


參考文獻

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