臺灣博碩士論文加值系統

　　人體軟骨由於沒有血管和神經分佈，造成軟骨組織缺損後難以自行再生、修復，因此軟骨細胞活化、增生巳成為組織工程領域主要研究課題。爰此，本研究係針對軟骨細胞增生問題，建構一台「脈衝超音波細胞培養刺激系統」，並以實驗驗證不同單一頻率或雙頻率脈衝超音波刺激策略，對立體凍膠孔洞支架培養軟骨細胞之增生與生化表現，進行定性與定量評估。本研究首先建構並測試脈衝超音波刺激細胞培養系統，結果顯示其叢集波寬200us、重覆率1.0kHz、平均強度32.49mW/cm2，經二維聲場分析實驗顯示超音波均能量集中發射；接著，本研究係進行立體凍膠孔洞支架之製備與物化性測試；所設計之支架直徑約7mm、厚度約1.2mm、凍膠材料為多孔性結構，孔洞大小為300-500μm、孔隙率91.42%、含水率93%、最大破壞應力為0.433 ±0.046 MPa；最後，本研究係進行不同超音波刺激細胞培養實驗與結果之定性/定量分析。在兩種不同單一頻率(750kHz及1.5MHz)超音波刺激與無刺激之比較實驗結果發現，經超音波刺激培養三周後兩組細胞均具有良好活性，且細胞外基質分泌正常；細胞增生量方面，以750kHz超音波刺激最為顯著(達265%)，葡萄醣胺聚合醣含量以1.5MHz超音波刺激最佳(達925%)；至於單位細胞葡萄醣胺聚合醣分泌表現方面，以1.5MHz超音波刺激最佳(達520%)。在單一頻率(1.5MHz)與雙頻率(750kHz + 1.5MHz)之超音波刺激比較實驗結果發現，細胞外基質分泌及細胞存活分析有相似結果；在細胞增生量方面雙頻率超音波刺激最佳，三週後之增生量達240%。而葡萄醣胺聚合醣分泌量方面，雙頻率超音波刺激十四天後增加720%為最多，單一頻率刺激分泌量增加632%，兩者具顯著差異(p<0.05)。

　　The purpose of this research is to develop a pulsed ultrasound stimulation system and evaluate the proliferation and biochemical expression of the chondrocytes by seeding it in cryogel scaffold. The proposed ultrasound stimulation system has modulating burst of signals at a width of 200 μs with a pulse repetition frequency (PRF) of 1.0 kHz, intensity of 32.49 mW/cm2. The cryogel scaffold used in this study have outer diameter of 7mm, thickness about 1.2mm, average hole size varies from 300 to 500 μm, porosity of 91.42%, moisture content of 93%, ultimate strength of 0.433±0.046 MPa and comprised of porosity structure. To evaluate the proliferation and biochemical expression of the chondrocytes in the cryogel scaffold using single frequency (750kHz or 1.5MHz) and dual frequency (750kHz + 1.5MHz) pulsed ultrasound stimulation was designed in this study. The experimental results of 750 kHz ultrasound stimulation showed that proliferation of 265% is better than 1.5MHz. However, the 1.5MHz ultrasound stimulation showed that glycosaminoglycan’s (GAGs) growth of 925% which is better than 750 kHz, where the increase of GAGs per cell is 520%. In addition, the single frequency (1.5 MHz) stimulation was then compare to the dual frequency (750kHz + 1.5MHz) stimulation for evaluation of proliferation and biochemical expression. For both cases, similar performance of cell activation and extracellular matrix (ECM) expression were observed. The results of dual frequency ultrasound stimulation showed that an increase of proliferation by 240% in three weeks and was found better than single frequency stimulation. For dual frequency stimulation, glycosaminoglycan’s (GAGs) growth up to 720% in two weeks compared to the single frequency stimulation where the growth was 632% (p <0.05).

目錄
長庚大學碩士學位論文指導教授推薦書
長庚大學碩士學位論文口試委員審定書
誌謝 iii
中文摘要 iv
Abstract v
目錄 vi
圖目錄 x
表目錄 xiv
第一章 研究背景、動機與目的 - 1 -
1.1 研究背景與動機 - 1 -
1.2 研究問題界定 - 6 -
1.3 研究假說 - 7 -
1.4 研究目的 - 8 -
1.5 論文架構 - 8 -
第二章 文獻回顧 - 9 -
2.1 物理刺激對細胞增生與分化之影響 - 9 -
2.2 超音波刺激對細胞增生與生化表現之影響 - 17 -
2.3 軟骨細胞增生與生化表現之定性/定量分析方法 - 25 -
2.4 文獻總結 - 27 -
第三章 超音波刺激系統測試、改良與先導實驗 - 28 -
3.1 超音波刺激對細胞增生與分化機制 - 28 -
3.2 單頻可變功率脈衝超音波細胞培養刺激系統測試與改良 - 32 -
3.3 單/雙頻固定功率脈衝超音波細胞培養刺激系統測試 - 39 -
3.4 超音波刺激軟骨細胞增生先導實驗設計與結果分析 - 43 -
3.4.1 無超音波刺激與單一頻率超音波刺激比較實驗 - 43 -
3.4.2 兩種不同單一頻率超音波刺激比較實驗 - 46 -
3.4.3 單一頻率與雙頻率超音波刺激比較實驗 - 48 -
3.4.4 單次超音波刺激細胞增生實驗 - 49 -
3.5 本章結論 - 51 -
第四章 立體凍膠孔洞支架製備與物化性測試 - 52 -
4.1 立體凍膠孔洞支架製備流程 - 52 -
4.2 立體凍膠孔洞支架物化性測試與結果 - 54 -
4.2.1 巨觀/微觀結構及孔洞分佈 - 54 -
4.2.2 孔隙率 - 59 -
4.2.3 澎潤率 - 60 -
4.2.4 抗壓強度 - 62 -
4.3 本章結論 - 64 -
第五章 超音波刺激立體凍膠孔洞支架內軟骨細胞培養實驗設計 - 65 -
5.1 實驗儀器 - 65 -
5.2 實驗分組 - 66 -
5.3 立體凍膠支架軟骨細胞培養實驗流程 - 67 -
5.4 軟骨細胞增生與生化表現分析方法 - 68 -
5.4.1 定性分析 - 68 -
5.4.2 定量分析 - 68 -
5.5 實驗結果統計分析方法 - 69 -
第六章 超音波刺激軟骨細胞增生與生化表現實驗結果分析 - 70 -
6.1 兩種不同單一頻率超音波刺激實驗結果分析 - 70 -
6.1.1 定性分析 - 70 -
6.1.1.1 細胞外基質分泌微觀結構 - 70 -
6.1.1.2 細胞存活螢光表現 - 70 -
6.1.2 定量分析 - 73 -
6.1.2.1 細胞增生量 - 73 -
6.1.2.2 葡萄糖胺聚合醣分泌量 - 74 -
6.1.2.3 單位細胞葡萄糖胺聚合醣分泌量 - 75 -
6.1.3 結果與討論 - 76 -
6.2 單一頻率與雙頻率超音波刺激實驗結果分析 - 77 -
6.2.1 定性分析 - 77 -
6.2.1.1 細胞外基質分泌微觀結構 - 77 -
6.2.1.2 細胞存活螢光表現 - 77 -
6.2.2 定量分析 - 80 -
6.2.2.1 細胞增生量 - 80 -
6.2.2.2 葡萄糖胺聚合醣分泌量 - 81 -
6.2.2.3 單位細胞葡萄糖胺聚合醣分泌量 - 82 -
6.2.3 結果與討論 - 83 -
6.3 本章結論 - 83 -
第七章 結論及未來研究方向 - 84 -
7.1 結論 - 84 -
7.2 未來研究方向 - 85 -
參考文獻 - 86 -
附錄 - 92 -

圖目錄
圖 1 軟骨細胞分佈圗 - 5 -
圖 2 透明軟骨 - 5 -
圖 3 彈性軟骨 - 5 -
圖 4 纖維軟骨 - 6 -
圖 5 小耳症病徵照片 - 6 -
圖 6 本實驗室研究發展示意圖 - 7 -
圖 7 定壓循環壓力實驗結果比較[23] - 11 -
圖 8 力量-位移曲線之比較圖[25] - 12 -
圖 9 最大受力、勁度、最大應力及模數之比較圖[25] - 12 -
圖 10 (a)前膠原蛋白(b)脯氨酸及(c)胸腺嘧啶合成量[26] - 13 -
圖 11 Jeffrey C. Wolchok振動裝置類型一[27] - 13 -
圖 12 Jeffrey C. Wolchok振動裝置類型二[27] - 14 -
圖 13 Jeffrey C. Wolchok支架強度測試結果[27] - 14 -
圖 14 直流與電容耦合的電刺激示意圖[30] - 15 -
圖 15 細胞電刺激效果示意圖[30] - 15 -
圖 16 超音波刺激與否之放射線圖片比較[33] - 19 -
圖 17 骨密度量測結果[33] - 20 -
圖 18 骨痂面積比例比較圖[33] - 20 -
圖 19 超音波刺激平台架設示意圖[38] - 21 -
圖 20 複合材料細胞刺激培養3周顯微鏡影像[38] - 21 -
圖 21 分化實驗結果[41] - 21 -
圖 22 免疫組織染色結果[41] - 22 -
圖 23 Wolff提出之骨骼網狀結構[46] - 31 -
圖 24 空穴效應頻譜表現圖[46] - 31 -
圖 25 單頻可變功率超音波訊號調控主機實體照片 - 33 -
圖 26 單頻可變功率超音波間接刺激系統實驗平台實體照片 - 33 -
圖 27 LCD調控面板實體照片 - 34 -
圖 28 示波器實體照片Tektronix TDS - 1002 - 34 -
圖 29 浸入式傳感器實體照片PANAMETRICS - V303 - 34 -
圖 30 時域分析-運作週期(Duty cycle)100% - 35 -
圖 31 時域分析-運作週期(Duty cycle)50% - 35 -
圖 32 三軸自動化定位平台實體照片 - 36 -
圖 33 聲場分析實驗設備架設示意圖 - 36 -
圖 34 間接刺激二維聲場分析實驗結果 - 36 -
圖 35 改良後實驗平台架設示意圖 - 37 -
圖 36 改良後實驗平台架設實體圖 - 37 -
圖 37 直接刺激二維聲場分析設備架設示意圖 - 38 -
圖 38 改良後直接刺激二維聲場分析實驗結果 - 38 -
圖 39 單/雙頻固定功率超音波直接刺激系統實體照片 - 40 -
圖 40 單/雙頻超音波訊號驅動電路板實體照片 - 40 -
圖 41 細胞實驗平台實體照片 - 41 -
圖 42 GUI操作介面實體圖 - 41 -
圖 43 單/雙頻固定功率超音波直接刺激系統聲場分析結果 - 42 -
圖 44 功能區塊區分標示圖 - 42 -
圖 45 實驗工作時間示意圖 - 44 -
圖 46 先導實驗步驟流程示意圖 - 44 -
圖 47 單一頻率超音波刺激細胞增生量比較圖 - 45 -
圖 48 單一頻率超音波刺激細胞增生量比較圖 - 45 -
圖 49 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞增生量比較直條圖 - 47 -
圖 50 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞增生量比較折線圖 - 47 -
圖 51 單一頻率與雙頻率超音波刺激細胞增生量比較直條圖 - 49 -
圖 52 單一頻率與雙頻率超音波刺激細胞增生量比較折線圖 - 49 -
圖 53 單次超音波刺激實驗工作時間示意圖 - 50 -
圖 54 單次超音波刺激細胞增生量比較直條圖 - 51 -
圖 55 單次超音波刺激細胞增生量比較折線圖 - 51 -
圖 56 凍膠3D支架製備流程示意圖 - 53 -
圖 57 實體顯微鏡OLYMPUS SZ40 - 55 -
圖 58 掃描式電子顯微鏡 HITACHI S-3000N - 56 -
圖 59 臨界點乾燥機BALZERS CPD 030 - 56 -
圖 60 實驗試片製備流程圖 - 56 -
圖 61 凍膠裁切示意圖 - 57 -
圖 62 凍膠(cryogel)俯瞰照 - 57 -
圖 63 凍膠(cryogel)側視照 - 57 -
圖 64 凍膠(cryogel)SEM 倍率30倍 - 58 -
圖 65 凍膠(cryogel)SEM 倍率300倍 - 58 -
圖 66 孔隙率實驗照 - 59 -
圖 67 純水機實體照片 ELGA Purelab CLASSIC - 61 -
圖 68 電子秤實體照片Mettler Toledo New Classic MF - 61 -
圖 69 澎潤率測試結果 - 62 -
圖 70 材料試驗機實體照片Instron 5544 - 63 -
圖 71 材料試驗樣本擺放實體照片 - 63 -
圖 72 壓縮負荷示意圖 - 64 -
圖 73 細胞取樣流程示意圖 - 67 -
圖 74 兩種不同單一頻率超音波刺激微觀結構分析(×500倍) - 71 -
圖 75 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞細胞存活螢光表現 - 72 -
圖 76 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞增生量比較圖 - 73 -
圖 77 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞GAG分泌量比較圖 - 74 -
圖 78 兩種不同單一頻率超音波刺激單位細胞GAG分泌量比較圖 - 75 -
圖 79 單一頻率與雙頻率超音波刺激微觀結構分析(×500倍) - 78 -
圖 80 單一頻率與雙頻率超音波刺激細胞存活螢光表現 - 79 -
圖 81 單一頻率與雙頻率超音波刺激細胞增生量比較圖 - 80 -
圖 82 單一頻率與雙頻率超音波刺激GAG分泌量比較圖 - 81 -
圖 83 單一頻率與雙頻率超音波刺激單位細胞GAG分泌量比較圖 - 82 -

 
表目錄
表 1 物理刺激對細胞增生與分化之影響相關文獻彙整表 - 16 -
表 2 勁度量測結果[33] - 22 -
表 3 骨折病患分組資料及癒合時間[37] - 22 -
表 4 超音波刺激實驗結果表[38] - 23 -
表 5 超音波刺激細胞增生與生化表現相關文獻彙整表 - 24 -
表 6 軟骨細胞相關定性與定量實驗相關文獻彙整表 - 26 -
表 7 單頻可變功率脈衝超音波刺激系統實驗參數設定表 - 44 -
表 8 單/雙頻固定功率脈衝超音波刺激系統實驗參數設定表 - 46 -
表 9 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞增生量實驗數據 - 47 -
表 10 單一頻率與雙頻率超音波刺激細胞增生量實驗數據 - 48 -
表 11 單次超音波刺激細胞增生量實驗數據表 - 50 -
表 12 實驗參數設計表 - 66 -
表 13 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞增生量比較實驗數據 - 73 -
表 14 兩種不同單一頻率超音波刺激細胞GAG分泌量比較實驗數據 - 74 -
表 15 兩種不同單一頻率超音波刺激單位細胞GAG分泌量實驗數據 - 75 -
表 16 單一頻率與雙頻率超音波刺激細胞增生量實驗數據 - 80 -
表 17 單一頻率與雙頻率超音波刺激GAG分泌量實驗數據 - 81 -
表 18 單一頻率與雙頻率超音波刺激單位細胞GAG分泌量實驗數據 - 82 -

[1] H. Michael, I. Gordon, and P. Wojciech, "Histology: a text and atlas," Lippincott Williams and, vol. 47, pp. 602-641, 2003.
[2] 唐智宏, "雷射燒結組織支架製作與水膠結合體外軟骨細胞評估," 長庚大學, 2008.
[3] D. L. Wise, "Biomaterials and Bioengineering Handbook," Sensor Review, vol. 21, pp. 323-324, 2001.
[4] 傅宇輝, "骨科學原理及應用 (上冊), 大中國圖書公司," 1987.
[5] 簡千翔, "明膠與陶瓷複合式支架培養關節軟骨細胞的研究," 清華大學化學工程學系學位論文, pp. 1-81, 2006.
[6] J. S. Temenoff and A. G. Mikos, "Review: tissue engineering for regeneration of articular cartilage," Biomaterials, vol. 21, pp. 431-440, 2000.
[7] 章世豪, "膠原蛋白改質聚 a 羥酸支架應用於軟骨修復的研究," 2001.
[8] S. Wakitani, T. Goto, S. J. Pineda, R. G. Young, J. M. Mansour, A. I. Caplan, et al., "Mesenchymal cell-based repair of large, full-thickness defects of articular cartilage," The Journal of Bone &; Joint Surgery, vol. 76, pp. 579-592, 1994.
[9] R. Lanza, R. Langer, and J. P. Vacanti, Principles of tissue engineering: Academic press, 2011.
[10] L. E. Freed, R. Langer, I. Martin, N. R. Pellis, and G. Vunjak-Novakovic, "Tissue engineering of cartilage in space," Proceedings of the National Academy of Sciences, vol. 94, pp. 13885-13890, 1997.
[11] P. Brun, G. Abatangelo, M. Radice, V. Zacchi, D. Guidolin, D. D. Gordini, et al., "Chondrocyte aggregation and reorganization into three‐dimensional scaffolds," Journal of biomedical materials research, vol. 46, pp. 337-346, 1999.
[12] R. P. Silverman, L. Bonasser, D. Passaretti, M. A. Randolph, and M. J. Yaremchuk, "Adhesion of tissue-engineered cartilage to native cartilage," Plastic and reconstructive surgery, vol. 105, pp. 1393-1398, 2000.
[13] P. D. Benya and J. D. Shaffer, "Dedifferentiated chondrocytes reexpress the differentiated collagen phenotype when cultured in agarose gels," Cell, vol. 30, pp. 215-224, 1982.
[14] 李威勳, "雷射燒結快速成型系統開發與組織工程支架應用研究," 長庚大學, 2005.
[15] 潘楷明, "雷射燒結孔洞支架製作及測試," 長庚大學, 2007.
[16] 蔡冠宇, "軟硬骨複合式組織支架快速成型技術開發與應用研究," 長庚大學, 2006.
[17] 劉喜文, "雷射燒結快速成型技術結合高分子水膠於硬骨組織支架製程之發展與臨床評估," 長庚大學, 2008.
[18] 王修誠, "聚己內酯結合三鈣磷酸鹽生物支架表面改質與功能性骨生成刺激支架載子設計製作研究," 長庚大學, 2010.
[19] 盧偉傑, "組織支架表面改質與動態培養軟骨細胞增生實驗," 長庚大學, 2011.
[20] 陳璽鎔, "聚己內酯支架添加第 II 型膠原蛋白體外驗證與壓力感測支架載子設計製作研究," 長庚大學, 2010.
[21] F. Guilak, D. L. Butler, and S. A. Goldstein, "Functional tissue engineering: the role of biomechanics in articular cartilage repair," Clinical Orthopaedics and Related Research, vol. 391, pp. S295-S305, 2001.
[22] R. L. Carrier, M. Papadaki, M. Rupnick, F. J. Schoen, N. Bursac, R. Langer, et al., "Cardiac tissue engineering: cell seeding, cultivation parameters, and tissue construct characterization," Biotechnology and bioengineering, vol. 64, pp. 580-589, 1999.
[23] S. Mizuno, T. Tateishi, T. Ushida, and J. Glowacki, "Hydrostatic fluid pressure enhances matrix synthesis and accumulation by bovine chondrocytes in three‐dimensional culture," Journal of cellular physiology, vol. 193, pp. 319-327, 2002.
[24] R. L. Smith, D. R. Carter, and D. J. Schurman, "Pressure and shear differentially alter human articular chondrocyte metabolism: a review," Clinical orthopaedics and related research, vol. 427, pp. S89-S95, 2004.
[25] D. L. Butler, N. Juncosa‐Melvin, G. P. Boivin, M. T. Galloway, J. T. Shearn, C. Gooch, et al., "Functional tissue engineering for tendon repair: A multidisciplinary strategy using mesenchymal stem cells, bioscaffolds, and mechanical stimulation," Journal of Orthopaedic Research, vol. 26, pp. 1-9, 2008.
[26] E. C. Breen, "Mechanical strain increases type I collagen expression in pulmonary fibroblasts in vitro," Journal of applied physiology, vol. 88, pp. 203-209, 2000.
[27] J. C. Wolchok, C. Brokopp, C. J. Underwood, and P. A. Tresco, "The effect of bioreactor induced vibrational stimulation on extracellular matrix production from human derived fibroblasts," Biomaterials, vol. 30, pp. 327-335, 2009.
[28] S. Mishima, "The effect of long-term pulsing electromagnetic field stimulation on experimental osteoporosis of rats," Journal of UOEH, vol. 10, pp. 31-45, 1988.
[29] J. Rubin, K. J. McLeod, L. Titus, M. S. Nanes, B. D. Catherwood, and C. T. Rubin, "Formation of osteoclast‐like cells is suppressed by low frequency, low intensity electric fields," Journal of Orthopaedic Research, vol. 14, pp. 7-15, 1996.
[30] R. Balint, N. J. Cassidy, and S. H. Cartmell, "Electrical stimulation: a novel tool for tissue engineering," Tissue Engineering Part B: Reviews, vol. 19, pp. 48-57, 2012.
[31] F. Lejbkowicz, M. Zwiran, and S. Salzberg, "The response of normal and malignant cells to ultrasound in vitro," Ultrasound in medicine &; biology, vol. 19, pp. 75-82, 1993.
[32] F. Lejbkowicz and S. Salzberg, "Distinct sensitivity of normal and malignant cells to ultrasound in vitro," Environmental health perspectives, vol. 105, p. 1575, 1997.
[33] A. Shimazaki, K. Inui, Y. Azuma, N. Nishimura, and Y. Yamano, "Low-intensity pulsed ultrasound accelerates bone maturation in distraction osteogenesis in rabbits," Journal of Bone &; Joint Surgery, British Volume, vol. 82, pp. 1077-1082, 2000.
[34] P. Reher, E.-N. I. Elbeshir, W. Harvey, S. Meghji, and M. Harris, "The stimulation of bone formation in vitro by therapeutic ultrasound," Ultrasound in medicine &; biology, vol. 23, pp. 1251-1258, 1997.
[35] A. Mortimer and M. Dyson, "The effect of therapeutic ultrasound on calcium uptake in fibroblasts," Ultrasound in medicine &; biology, vol. 14, pp. 499-506, 1988.
[36] J. S. Sun, Y. H. Tsuang, F. H. Lin, H. C. Liu, C. Z. Tsai, and W. H. S. Chang, "Bone defect healing enhanced by ultrasound stimulation: an in vitro tissue culture model," Journal of biomedical materials research, vol. 46, pp. 253-261, 1999.
[37] J. W. Busse, M. Bhandari, A. V. Kulkarni, and E. Tunks, "The effect of low-intensity pulsed ultrasound therapy on time to fracture healing: a meta-analysis," Canadian Medical Association Journal, vol. 166, pp. 437-441, 2002.
[38] T. Nishikori, M. Ochi, Y. Uchio, S. Maniwa, H. Kataoka, K. Kawasaki, et al., "Effects of low‐intensity pulsed ultrasound on proliferation and chondroitin sulfate synthesis of cultured chondrocytes embedded in Atelocollagen® gel," Journal of biomedical materials research, vol. 59, pp. 201-206, 2002.
[39] C.-C. Wu, "Exposure to low intensity ultrasound stimulates aggrecan gene expression by cultured chondrocytes," Trans. Orthop. Res. Soc., vol. 21, p. 622, 1996.
[40] J. Parvizi, C. C. Wu, D. G. Lewallen, J. F. Greenleaf, and M. E. Bolander, "Low‐intensity ultrasound stimulates proteoglycan synthesis in rat chondrocytes by increasing aggrecan gene expression," Journal of Orthopaedic Research, vol. 17, pp. 488-494, 1999.
[41] Z.-J. Zhang, J. Huckle, C. A. Francomano, and R. G. Spencer, "The effects of pulsed low-intensity ultrasound on chondrocyte viability, proliferation, gene expression and matrix production," Ultrasound in medicine &; biology, vol. 29, pp. 1645-1651, 2003.
[42] P. G. De Deyne and M. Kirsch-Volders, "In vitro effects of therapeutic ultrasound on the nucleus of human fibroblasts," Physical Therapy, vol. 75, pp. 629-634, 1995.
[43] 鄭益利, "超音波對人類軟骨細胞的生物效應," 撰者, 2005.
[44] 郭霽慶, "超音波刺激與動態培養對組織工程支架體外再生組織形成之影響," 2002.
[45] H.-L. Liu, W.-S. Chen, J.-S. Chen, T.-C. Shih, Y.-Y. Chen, and W.-L. Lin, "Cavitation-enhanced ultrasound thermal therapy by combined low-and high-frequency ultrasound exposure," Ultrasound in medicine &; biology, vol. 32, pp. 759-767, 2006.
[46] H. Tang, C. C. J. Wang, D. Blankschtein, and R. Langer, "An investigation of the role of cavitation in low-frequency ultrasound-mediated transdermal drug transport," Pharmaceutical research, vol. 19, pp. 1160-1169, 2002.
[47] 劉. T. 謝. (TW), "多頻驅動單一換能器之超音波系統及訊號產生裝置," 2008.
[48] 劉峻幗, "複合式生醫陶瓷支架上關節軟骨細胞行為的研究," 2005.
[49] 謝汶淇, "以明膠/幾丁聚醣/透明質酸及富含血小板血漿之凍膠作為皮膚創傷癒合," 長庚大學, 2011.
[50] S.-N. Park, H. J. Lee, K. H. Lee, and H. Suh, "Biological characterization of EDC-crosslinked collagen–hyaluronic acid matrix in dermal tissue restoration," Biomaterials, vol. 24, pp. 1631-1641, 2003.