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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:蕭敬達
研究生(外文):Hsiao, Ching-Ta
論文名稱:法夫酵母2-Cys peroxiredoxin基因選殖及表現之研究
論文名稱(外文):Cloning and expression of 2-Cys peroxiredoxin from Xanthophyllomyces dendrorhous
指導教授:林棋財
指導教授(外文):Lin, Chi-Tsai
口試委員:許垤棋陳玉婷耿全福
口試委員(外文):Sheu, Dey-ChyiChen, Yu-TingKen, Chuian-Fu
口試日期:2016-06-29
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣海洋大學
系所名稱:生命科學暨生物科技學系
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2016
畢業學年度:104
語文別:中文
論文頁數:35
中文關鍵詞:法夫酵母過氧化氫酶
外文關鍵詞:Xanthophyllomyces dendrorhousperoxiredoxinexpression
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目錄
謝辭 i
摘要 ii
Abstract iii
縮寫表 iv
目錄 v
壹、前言 1
一、Xanthophyllomyces dendrorhous 1
二、Peroxiredoxins的分類 1
三、Peroxiredoxins的起源 1
四、Peroxiredoxins的作用 2
五、研究動機 3
貳、實驗材料 4
一、真菌、質體及微生物材料 4
(一) 真菌材料: 4
(二) 質體材料: 4
(三) 微生物材料: 4
二、培養基 5
三、套組 5
四、標準品 5
五、儀器設備 5
六、實驗藥品 6
(一) 酵素 6
(二) 緩衝液 6
(三) 培養基添加物 6
(四) 染劑 7
(五) 蛋白質電泳及純化相關藥品 7
(六) 活性染色相關藥品 7
(七) 其他 7
七、實驗耗材 8
八、引子 8
參、實驗方法 9
一、XdPrx基因選殖 9
(一) 片段選殖 9
(二) DNA電泳分析方法 10
(三) 目標DNA純化 10
(四) 目標DNA選殖載體之建構與序列確認 10
(五) XdPrx全長序列 11
二、XdPrx之蛋白質表現 11
(一) 表現載體之構築 11
大腸桿菌表現載體 11
(二) 重組表現質體之轉形作用 12
1.抽取質體DNA 12
2.大腸桿菌勝任細胞之製備 13
3.大腸桿菌之轉型作用 13
(三) XdPrx蛋白質誘導表現、純化及電泳分析 14
1. XdPrx於大腸桿菌之誘導表現 14
2.親和性管柱層析 14
3.聚丙烯醯胺電泳分析 14
(四) XdPrx純化後之透析 15
三、XdPrx之特性分析 16
(一) 蛋白質的濃度測定 16
(二) XdPrx活性測定 16
(三) 蛋白質分子特性分析 16
熱穩定性 16
肆、結果 17
一、XdPrx之基因選殖 17
(一) 5' RACE與3' RACE XdPrx cDNA選殖 17
(二) XdPrx全長 17
二、XdPrx之生物資訊分析與3-D結構模擬 17
(一) 生物資訊分析 17
(二) 3-D結構模擬 18
三、XdPrx之表現與純化 18
(一) 建構表現載體 18
(二) 重組XdPrx的誘導表現及純化 18
大腸桿菌之表現及純化 18
四、重組XdPrc之特性分析 19
熱穩定性 19
伍、討論 20
陸、參考文獻 21
圖表 23
Appendix 32


參考文獻
廖怡珍,2006,樟芝 2-Cys peroxiredoxin 之基因選殖及特性分析,國立臺灣海洋大學 生物科技研究所 碩士學位論文

劉家愷,2015,法夫酵母錳型超氧歧化酶基因選殖、表現及其性質之研究,國立臺灣海洋大學 生物科技研究所 碩士學位論文

潘俊深,2014,紫紅硬孔菌多功能木質素過氧化酶之基因選殖及蛋白質表現,國立臺灣海洋大學 生物科技研究所 碩士學位論文

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Klughammer, B., Baier, M., and Dietz, KJ. (1999). Nactivation by gene disruption of 2-cysteine-peroxiredoxin in Synechocystis sp. Physiologia Plantarum 104, 699-706

Lim, MJ., Chae, HZ., Rhee, SG., Yu, DY., Lee, KK., and Yeom, RI. (1998). The type II peroxiredoxin gene family of the mouse: molecular structure, expression and evolution. Gene 216, 197-205.

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