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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:童詠舜
研究生(外文):TUNG,YUNG-SHUN
論文名稱:台灣白芨調節血糖功能性評估
論文名稱(外文):Regulation of blood glucose levels by Bletilla formosana
指導教授:黃嘉新黃嘉新引用關係
指導教授(外文):Chia-Hsin Huang
口試委員:李國陽許晉勳
口試委員(外文):Kuo-Yang LeeChin-Hsun Hsu
口試日期:2017-07-18
學位類別:碩士
校院名稱:中華醫事科技大學
系所名稱:醫學檢驗生物技術系碩士班
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學技術及檢驗學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2017
畢業學年度:105
語文別:中文
論文頁數:169
中文關鍵詞:台灣白芨糖尿病AMPKpAMPK
外文關鍵詞:Bletilla formosanaDiabetes mellitusAMPKpAMPK
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糖尿病是多種成因的代謝異常,醣類經過呼吸氧化作用,產生能量。氧化作用伴隨著自由基表現,可能是致病因素。AMP-activated protein kinase (AMPK)是一個細胞內能量代謝的一個關鍵中樞,細胞藉著AMPK的活化而促進糖類的代謝,因此AMPK己被廣泛的認為是治療糖尿病的分子標靶。
本研究是選用台灣白芨(Bletilla formosana)磨粉(BFP)後以酒精和水進行萃取,分別所得酒精萃取物(BFEE)及水萃取物(BFWE)進行抗自由基清除實驗,結果顯示BFEE效果最好,在10000 ppm BFEE自由基清除能力為 80.44 %。以HepG2和3T3細胞,證實BFEE可以啟動AMPK和pAMPK的路徑。以STZ誘導高血糖鼠動物,BFP和BFEE使用416.8、833.5和1666.7 mg/KgB.W.劑量具有調節血糖能力。由於此材料為台灣本土材料,雖然具有調節血糖能力,但是否可食用,以衛生福利部公告健康食品法之進行安全性評估,使用83.3、1666.7及8333.3 mg/KgB.W.三劑量,經由90天餵食毒性試驗,體重與控制組統計上相同(P>0.05),試驗結束後,犧牲小鼠採集血液及臟器進行血清生化分析,各試驗組與對照組間均無明顯差異,須待由病理切片證實其安全性。

台灣白芨是原生種蘭科植物,本研究經合理的試驗,確認可調節血糖,其機制是啟動細胞AMPK途徑,如經90天餵食安全評估通過衛生福利部審查通過,有機會為可食用的原料,未來可作為調節血糖的新潛力材料,但其有效成分仍待分析。
關鍵字:台灣白芨、糖尿病、AMPK、pAMPK

Diabetes mellitus is the metabolic abnormality resulted from multiple causes, sugar through the respiratory oxidation, resulting in energy. Oxidation is accompanied by free radicals and may be a causative agent. AMP-activated protein kinase (AMPK) is a key center of intracellular energy metabolism, and cells promote the metabolism of carbohydrates by AMPK activation. Therefore, AMPK has been widely regarded as a molecular target for the treatment of diabetes mellitus.
Bletilla formosana was used to extract alcohol and water, and the alcohol extract (BFEE) and water extract (BFWE) were used to carry out anti-free radical scavenging experiments. The results showed that BFEE Well, at 10,000 ppm BFEE free radical scavenging capacity was 80.44%. With HepG2 and 3T3 cells, it was confirmed that BFEE could initiate AMPK and pAMPK pathways. Four doses of 416.8, 833.5 and 1666.7 mg / KgB.W were used in STZ-induced hyperglycemic mice, BFP and BFEE. Since this material is a local material for Taiwan, although it has the ability to regulate blood sugar, but whether it is edible, the Ministry of Health and Welfare announced the safety assessment of health food law, using 83.3,1666.7 and 8333.3 mg / KgB.W. three doses, (P> 0.05). After the end of the experiment, blood and organs were collected from sacrificed mice for serum biochemical analysis. There was no significant difference between the test group and the control group, and there was no significant difference between the control group and the control group Pathological sections confirm their safety.
Bletilla formosana is a native species of Orchidaceae, this study has been a reasonable test to confirm the regulation of blood glucose, the mechanism is to start the cell AMPK pathway, such as by 90 days feeding safety assessment by the Ministry of Health and Welfare review, have the opportunity for edible raw materials , The future can be used as a new potential for regulating blood sugar material, but its active ingredients remain to be analyzed.
Key words: Bletilla formosana, Diabetes mellitus, AMPK, pAMPK

論文口試委員審書.i
致謝.ii
中文摘要.iv
Abstract.vi
表目錄.xviii
圖目錄.xxi
縮寫表.xxii
第一章 文獻回顧.1
第一節 糖尿病.1
第二節 白芨.2
第三節 AMP-activated protein kinase (AMPK).3
第四節 葡萄糖轉運蛋白 (glucose transporter).4
第五節 自由基與抗氧化物.4
第六節 誘導糖尿藥物-Streptozotocin(鏈脲佐菌素).5
第二章 研究動機與目的.7
第三章 實驗流程.8
第四章 實驗材料與方法.9
第一節 儀器設備.9
第二節 實驗藥品.12
第三節 實驗方法與步驟.17
1.樣品處理.17
2.樣品萃取.17
2-1.台灣白芨球莖片磨粉為BFP.17
2-2.BFWE萃取.17
2-3.BFEE萃取.17
2-4.分析樣品.17
3.基源鑑定.18
3-1.抽取DNA.18
3-2.聚合酶連鎖反應(PCR).19
3-3.DNA電泳.20
3-3-1.試劑配置.20
3-3-2.步驟.20
3-4.膠體純化.20
4.清除DPPH自由基能力測定.21
4-1.DPPH法測定抗氧化力之原理.21
4-2.DPPH之測定.22
5.細胞株.22
6. MTT.23
6-1.原理.23
6-2.試劑配置.23
6-3.實驗步驟.24
7.西方墨點法(Western blot).25
7-1.試劑配置.25
7-2.收細胞.27
7-3.細胞蛋白質的測定.27
7-4.鑄膠.28
7-5.Sample 前處理.29
7-6.蛋白質電泳(SDS-聚丙醯胺膠體電泳).29
7-7.轉漬.30
7-8.抗體雜交.30
7-9.照相.31
8.動物實驗.31
8-1.90天亞慢性餵食毒性試驗 (90-day subchronic feeding toxicity test).31
8-2.檢體分析.33
8-2-1.血液檢驗(Hematology).33
8-2-1-1.試劑配置.33
(1)抗凝固劑EDTA-Na2.33
(2)儀器.33
(3)步驟.34
8-2-2.血清生化檢驗(Clinical Chemistry).34
8-2-2-1.檢驗試劑.34
(1)抗凝固劑肝素(Heparin).34
(2)儀器.34
(3)步驟.35
8-2-3.組織病理檢驗.35
8-2-3-1.臟器稱重.36
8-3.第一型糖尿病動物模式.36
8-3-1.試劑配置.36
8-3-2.誘導高糖造模.36
第五章 實驗結果.39
第一節 台灣白芨萃取物之產率.39
第二節 基源鑑定.39
第三節 台灣白芨抗自由基能力.40
1.BFEE清除DPPH 自由基能力.40
2.BFWE清除DPPH 自由基能力.41
第四節 台灣白芨對細胞毒性分析.42
(一)BFEE對HEPG2和3T3-L1細胞的影響.42
(二)BFWE對HEPG2和3T3-L1細胞的影響.42
第五節 台灣白芨對AMPK 和pAMPK的表現量.43
(一)BFEE對HEPG2細胞蛋白表現量.43
(二)BFEE對3T3-L1細胞蛋白表現量.43
(三)BFWE對HEPG2細胞蛋白表現量.44
(四)BFWE對3T3-L1細胞蛋白表現量.44
(五)總結.45
第六節 90天亞慢性餵食毒性試驗 (90-day subchronic feeding toxicity test).45
(一)體重變化.45
1.公鼠.45
2.母鼠.46
3.總結.46
(二)肉眼觀察病變.46
(三)臟器重量.47
1.28天中期試驗臟器.47
2.90天試驗結束臟器.47
3.總結.48
(四)血液分析.48
1.28天中期試驗.48
2.90天實驗結束.48
3.總結.50
(五)血清生化分析.50
1.28天中期試驗.50
2.90天實驗結束.53
3.總結.58
第七節 Streptozotocin 誘導第一型糖尿病.59
(一)試驗期體重變化.59
1.BFEE.59
1-1.公鼠體重變化.59
1-2.母鼠體重變化.60
2.BFWE.60
2-1.公鼠體重變化.60
2-2.母鼠體重變化.61
3.BFP.62
3-1.公鼠體重變化.62
3-2.母鼠體重變化.63
4. 總結.63
(二) BFEE , BFWE and BFP的血糖變化.64
1.BFEE.64
1-1.公鼠血糖變化.64
1-2.母鼠血糖變化.64
1-3.小結.65
2.BFWE.65
2-1.公鼠血糖變化.65
2-2.母鼠血糖變化.65
2-3.小結.65
3.BFP.66
3-1.公鼠血糖變化.66
3-2.母鼠血糖變化.66
3-3.小結.66
4.總結.67
(三)肉眼觀察病變.67
(四)臟器重量.67
1.BFEE臟器重量.67
1-1.公鼠臟器.67
1-2.母鼠臟器.68
1-3.小結.68
2.BFWE臟器重量.69
2-1.公鼠臟器.69
2-2.母鼠臟器.69
2-3.小結.70
3.BFP臟器重量.70
3-1.公鼠臟器.70
3-2.母鼠臟器.71
3-3.小結.72
4.總結.72
(五)血液分析.72
1.BFEE.72
1-1公鼠血液分析.72
1-2.母鼠血液分析.73
1-3.小結.75
2.BFWE.75
2-1.公鼠血液分析.75
2-2.母鼠血液分析.76
2-3.小結.78
3.BFP.78
3-1.公鼠血液分析.78
3-2.母鼠血液分析.79
3-3.小結.81
4.總結.81
(六)生化血清分析.81
1.BFEE.81
1-1.公鼠血清生化.81
1-2.母鼠血清生化.84
1-3.小結.87
2.BFWE.88
2-1.公鼠血清生化.88
2-2.母鼠血清分析.90
2-3.小結.93
3.BFP.93
3-1.公鼠血清生化分析.93
3-2.母鼠血清生化分析.96
3-3.小結.102
4.總結.103
第六章 討論.104
一.基源鑑定.104
二.清除自由基能力.104
三.AMPK的活化.105
四.90天亞慢性餵食毒性試驗 (90-day subchronic feeding toxicity test).106
五.Streptozotocin 誘導第一型糖尿病.106
第七章 總結.106
第八章 參考文獻.110
第九章 圖表.118

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