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研究生:游立人
研究生(外文):You, Li- Ren
論文名稱:葡萄藻對於紫外線照射後之傷口修復的影響
論文名稱(外文):Effects of Caulerpa microphysa on wound healing after Ultraviolet irradiation
指導教授:劉威忠劉威忠引用關係
指導教授(外文):Liu, Wei-Chung
口試委員:林群智許博翔劉威忠
口試委員(外文):Lin, Chun-ChihHsu, Po-HsiangLiu, Wei-Chung
口試日期:2016-11-25
學位類別:碩士
校院名稱:慈濟科技大學
系所名稱:放射醫學科學研究所
學門:醫藥衛生學門
學類:醫學技術及檢驗學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2017
畢業學年度:105
語文別:中文
論文頁數:53
中文關鍵詞:葡萄藻萃取液多醣體傷口癒合紫外線單核細胞趨化蛋白-1
外文關鍵詞:Caulerpa racemosa extracpolysaccharidewound healingUVMCP-1
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摘 要
紫外線輻射可能引發過敏反應,導致皮膚損傷。本論文目的為探討葡萄藻萃取液(Caulerpa racemosa extract,CE)與多醣體 (Caulerpa racemosa polysaccharides,CP)在紫外線(3.87 mJ/cm2)的照射下細胞對於紫外線傷害後傷口修復的潛力與可能機轉。本研究培養小鼠纖維母細胞(C2C12 cells)及小鼠單核球細胞(RAW264.7 cell)來評估葡萄藻對傷口癒合的作用。實驗條件分為六組,包括對照組、葡萄藻萃取液處理組、葡萄藻多醣體處理組、紫外線處理組(3.87 mJ/cm2)、紫外線外加萃取液處理組及紫外線外加多醣體處理組。

結果顯示,葡萄藻萃取液比起多醣體具有相當顯著的抗氧化能力,研究發現萃取液及多醣體皆可刺激傷口修復,證實透過萃取液的刺激可以促進單核球細胞 MCP-1 的表現,同時萃取液可刺激細胞停滯於 G2/M 時期介而促使細胞進行有絲分裂。也可在 HPLC 中發現到萃取液中具有沒食子酸,由結果推論,葡萄藻萃取液及多醣體可以藉由刺激小鼠纖維母細胞,誘導細胞活化提升細胞遷移速率而達到加速傷口癒合的效果。

Abstract

UV radiation can trigger an allergic reaction leading to skin damage. The purpose of this study was to investigate the healing potential and wound healing. mechanism of Caulerpa racemose extract (CE) and Caulerpa racemose polysaccharides (CP) for wound healing after UV (3.87 mJ/cm2) irradiation. In cell culture, C2C12 cells, a mouse fiber cell line, and RAW264.8 cells, a mouse monocytic cell line, were cultured to evaluate the effect of Caulerpa racemose on wound healing. The experiment were divided into six groups, including control group, Caulerpa racemose extract treatment group, Caulerpa racemose polysaccharides treatment group, UV treatment group, UV plus Caulerpa racemose extract treatment group and UV plus Caulerpa racemose polysaccharide treatment group.

The results showed that the extract of the Caulerpa racemose and the polysaccharides could stimulate the repair of the wound. It was confirmed that the stimulation of the extract could promote the Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) expression of monocyte. At the same time extract can stimulate cell stagnation in the G2/M phase and promote cell mitosis. Using HPLC assay, the results indicated that the extract contains gallic acid. Our results suggest that Caulerpa racemose can decrease the damage of cells treated with UV irradiation possibly via stimulating cell migration rate to achieve accelerated wound healing effect.

目 錄

目 錄.......................... I
摘 要.......................... 1
ABSTRACT ...................... 2
第一章 緒論................... 3
1.1 研究目的..................... 3
1.2 皮膚功能與結構 .............................. 4
1.3 傷口修復...................................... 4
1.3.1 凝血期(Hemostasis)............................. 5
1.3.2 發炎期(Inflammatory phase) ............................ 5
1.3.3 增生期(Proliferative or Fibroblastic phase)............... 6
1.3.3 重塑期(Remodeling phase).................................. 6
1.4 影響傷口癒合的原因.......................................... 6
1.5 紫外線...................................................... 7
1.6 紫外線對皮膚的影響......................................... 8
1.7 海藻...................................................... 9
1.7.1 海藻簡介................................................. 9
1.7.2 葡萄藻 .................................................. 9
1.7.2 葡萄藻多醣體.............................................. 10
1.8 介白素-6 (INTERLEUKIN-6,IL-6) ............................. 10
1.9 單核細胞趨化蛋白-1 (MONOCYTE CHEMOATTRACTANT PROTEIN-1,MCP-1) ... 11

第二章 、研究方法........................................... 12
2.1.1 研究藥品與材料 ................................. 12
2.1.2 儀器設備......................................... 13
2.2 研究方法...................................... 15
2.2.1 葡萄藻萃取物及其多醣的配置 .......................... 15
2.2.2 RAW 264.7 細胞培養 ................................. 15
2.2.3 C2C12 細胞培養 ...................................... 15
2.2.4 細胞繼代培養 ......................................... 16
2.2.5 細胞冷凍 ............................................. 16
2.2.6 MTT 細胞毒性測試...................................... 16
2.2.7 MTT 細胞增生測試....................................... 17
2.2.8 DPPH 自由基清除能力 ............................. 18
2.2.9 活性氧化物測定......................................... 18
2.2.10 細胞週期分析 ......................................... 19
2.2.11 ECIS 細胞行為全自動分析................................. 19
2.2.12 巨噬細胞分化百分比統計 ................................. 20
2.2.13 CBA 相關激素測定................................. 20
2.2.14 利用 HPLC 分析沒食子酸.................................... 23
2.2.14 UV 照射 .................................................. 23
2.2.15 統計及分析 ............................................... 23

第三章 結果..................................................... 24
3.1 比較葡萄藻萃取液與多醣體的產率 ................................. 24
3.2 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7 和 C2C12 細胞的毒性測試 ......... 24
3.3 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7 和 C2C12 細胞的增生測試 ........ 24
3.4 抗壞血酸對於清除 DPPH 的功效................................... 25
3.5 葡萄藻萃取液及其多醣對於清除 DPPH 的功效 ................... 25
3.6 葡萄藻萃取液與多醣體抑制細胞內 ROS 的產生.................. 26
3.7 比較經紫外線照射後葡萄藻萃取液與多醣體對於細胞周期的影響 ......... 26
3.9 比較紫外線傷害後萃取液與多醣體對傷口癒合的影響............. 27
3.10 葡萄藻萃取液與多醣體對刺激巨噬細胞分化的影響 ............. 27
3.11 葡萄藻萃取液 HPLC 檢測分析.................................. 28
3.11 葡萄藻萃取液與多醣體對刺激修復機制 .......................... 28

第四章 討論.............................................. 29
4.1 葡萄藻萃取液與多醣體的萃取 .................................. 29
4.2 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7、C2C12 細胞生長影響......... 29
4.3 葡萄藻萃取液與多醣體的抗氧化能力................................. 30
4.4 紫外線傷害後葡萄藻萃取液與多醣體對皮膚纖維母細胞細胞周期的影響...... 30
4.5 比較紫外線傷害後萃取液與多醣體對傷口癒合的影響.......... 31
4.6 葡萄藻萃取液與多醣體刺激巨噬細胞分化 ........................... 31
4.7 葡萄藻萃取液與多醣體刺激細胞增生的路徑........................ 31
總 結......................................................... 33
圖表說明........................................................ 34
參考文獻............................................. 49

圖目錄
圖 1-1. 皮膚結構圖。 .......................................... 4
圖 1-2. 電磁波光譜。 ............................................ 7
圖 1-3. 葡萄藻。 ................................................ 9
圖 1-4. 葡萄藻多醣體。.......................................... 10
圖 3-1. 比較葡萄藻萃取液及其多醣體的產率。 ........................ 35
圖 3-2. 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7 和 C2C12 細胞的毒性測試。.... 36
圖 3-3. 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7 和 C2C12 細胞的增生測試。.... 37
圖 3-4. 抗壞血酸對於 DPPH 自由基清除的功效。....................... 38
圖 3-5. 葡萄藻萃取液與多醣體對於 DPPH 清除的功效。 ............ 39
圖 3-6. 葡萄藻萃取液與多醣體細胞內抑制 ROS 的功效。............. 40
圖 3-7. 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7 細胞周期的影響。....... 41
圖 3-8. 葡萄藻萃取液與多醣體對 C2C12 細胞周期的影響。.......... 42
圖 3-9. 葡萄藻萃取液與多醣體對 RAW264.7 細胞周期的影響。....... 43
圖 3-10. 葡萄藻萃取液與多醣體對 C2C12 細胞周期的影響。......... 44
圖 3-11. 比較紫外線傷害後萃取液與多醣體對傷口癒合的影響。....... 45
圖 3-12. 葡萄藻萃取液與多醣體對刺激巨噬細胞分化的影響........... 46
圖 3-13. 比較紫外線傷害後萃取液與多醣體對 MCP-1 的影響。 ....... 47
圖 3-14. 沒食子酸標準品與葡萄藻萃取液 HPLC 圖譜................. 48

表目錄
表 2-1. CBA KIT STANDARD 濃度表 .............................. 22
表 3-1. 葡萄藻萃取液產量 ...................................... 34
表 3-2. 葡萄藻多醣體產量 ...................................... 34

參考文獻
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