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臺灣博碩士論文加值系統

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研究生:游婷婷
研究生(外文):YOU, TING-TING
論文名稱:分析臺中市大坑地區藍綠菌族群變化與臺灣鋏蠓密度之關聯性
論文名稱(外文):Analyze the correlation between the dynamic of cyanobacterial population and the densities of Forcipomyia taiwana in Da-Ken area of Taichung city
指導教授:李孟娟李孟娟引用關係
指導教授(外文):LEE, MONG-CHUAN
口試委員:李憲明林春福
口試委員(外文):LEE, HSIEN-MINGLIN, CHUEN-FU
口試日期:2019-01-29
學位類別:碩士
校院名稱:中臺科技大學
系所名稱:生物科技暨醫學工程研究所
學門:工程學門
學類:生醫工程學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2019
畢業學年度:108
語文別:中文
論文頁數:80
中文關鍵詞:臺灣鋏蠓變性梯度膠體電泳藻類族群
外文關鍵詞:Forcipomyia taiwanaPCR-DGGEAlgal populations
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近年來,臺灣各地臺灣鋏蠓 (Forcipomyia taiwana) 族群數量有逐漸增加之趨勢,由於有些人會因雌成蟲叮咬會造成搔癢或嚴重的過敏反應,已嚴重影響居民生活品質與當地觀光產業,而本校所處臺中市大坑地區正是臺灣鋏蠓高密度的地區,故本研究重點為發展相關的防治方法。過去多以噴灑化學藥劑抑制成蟲數量,但抑制臺灣鋏蠓數量的效果有限,目前已知臺灣鋏蠓幼蟲主要的食物來源為藻類,故本實驗室期望針對藻類發展出防治方法。本實驗目的為瞭解臺灣鋏蠓的密度變化與藻類種類分布的關聯性,根據過去研究結果,臺灣鋏蠓族群數量在6至8月時會到達高峰,所以我們收集大坑地區4月份到 10月份,根據過去的臺灣鋏蠓密度調查,挑選共8個地點的藻類樣品,其中4個地點為臺灣鋏蠓低密度地區,4個地點為臺灣鋏蠓高密度地區,針對幼蟲主要的食物藍綠藻及綠藻基因體,以Polymerase chain reaction-Denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) 的方式分析其基因片段與序列比對,確認藻類族群分布及變化與臺灣鋏蠓族群密度的關聯性,結果發現在臺灣鋏蠓密度較少地點,Arthrospira platensis或 Halomicronema excentricum 在 DGGE 上只出現單一條帶,而臺灣鋏蠓密度較高地點則會出現兩種以上的結果。
In recent years, the number of Forcipomyia taiwana populations in Taiwan has gradually increased. Because some people may cause itching or severe allergic reactions due to female adult bites, which seriously affects the quality of life of residents and local tourism. Because our school is located in the Da-Ken area of Taichung City, which is a high-density area of F. taiwana in Taiwan, the focus of our laboratory research is to develop relevant prevention methods. In the past, spraying chemicals to suppress the number of adults, but the effect of inhibiting the number of F. taiwana is limited. It is known that the main food source of F. taiwana is algae, so our laboratory hopes to develop prevention and control methods for algae. Therefore, the purpose of this study is to understand the correlation between the density change of F. taiwana and the distribution of algae species in Da-Ken. According to past research results, the number of F. taiwana will reach a peak in June-August, so we collected the algae sample from April to October in Da-Ken area. According to the past F. taiwana density survey, we selected algae samples from eight locations, four of which were low-density areas in Da-Ken and four in high-density areas in Da-Ken. Polymerase chain reaction-Denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) was used to analyze the gene fragments of the main foods of larvae, blue-green algae and green algae, and to analyze the relationship between the distribution of algal populations and the density of F. taiwana populations. The experimental results show that in low-density areas, Arthrospira platensis or Halomicronema excentricum only show a single DNA band on DGGE, while in high-density areas, more than two DNA bands appear.
目錄

中文摘要 I
英文摘要 III
目錄 V
圖表目錄 VII
第一章、 前言 1
第二章、 文獻回顧 4
一、 臺灣鋏蠓 5
二、 變性梯度膠體電泳 (Denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE) 8
三、 藻類族群鑑定 10
第三章、 材料與方法 11
一、 儀器、試劑、藥品及酵素 12
二、 臺灣鋏蠓的收集及密度調查 14
三、 臺灣鋏蠓生長環境模擬 15
四、 藻類染色體DNA之製備 18
五、 以PCR增幅藍綠藻之16S rRNA基因 20
六、 以PCR增幅藍綠菌之GC-16S rRNA基因 22
七、 變性梯度膠體電泳-垂直膠 (Perpendicular denaturing gradient gel electrophoresis) 24
八、 變性梯度膠體電泳-平行膠 (Parallel denaturing gradient gel electrophoresis) 26
九、 切膠回收及定序 28
第四章、 結果 30
第五章、 討論 36
第六章、 參考文獻 39


圖表目錄
圖 1. 以大坑二號步道登山口收集的土壤建立的臺灣鋏蠓生長環境模型 43
圖 2. 在解剖顯微鏡下觀察臺灣鋏蠓生長模型上的蟲卵 44
圖 3. 在解剖顯微鏡下觀察臺灣鋏蠓生長模型上的幼蟲 45
圖 4. 在解剖顯微鏡下觀察臺灣鋏蠓生長模型上的蛹 46
圖 5. 在生長環境模型中羽化後的成蟲 47
圖 6. 藍綠藻16S rRNA之PCR產物電泳圖 48
圖 7. 以DGGE垂直膠測試10 % ~ 90 % 變性劑條件之電泳圖 49
圖 8. 4月份16S rRNA之PCR產物進行DGGE之電泳結果 50
圖 9. 隨機混合檢體DNA其16S rRNA之PCR產物進行DGGE之電泳圖 51
圖 10. 4月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 52
圖 11. 5月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 53
圖 12. 6月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 54
圖 13. 7月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 55
圖 14. 8月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 56
圖 15. 9月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 57
圖 16. 10月份16S rRNA PCR產物進行DGGE之電泳圖 58

表 1. 臺灣鋏蠓密度調查 (F. taiwana / 20 min) 59
表 2. 4月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 60
表 3. 5月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 62
表 4. 6月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 64
表 5. 7月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 65
表 6. 8月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 67
表 7. 9月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 69
表 8. 10月份DGGE圖譜,DNA條帶回收後進行定序比對之結果 71


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