臺灣博碩士論文加值系統

摘要 2
Abstract 3
第一章、 前言 11
第一節、 研究背景 11
一、黃病毒科 (Flaviviridae) 11
二、茲卡病毒與流行病學 (Zika virus) 11
三、茲卡病毒基因結構 (genome structure) 12
四、茲卡病毒感染細胞途徑 (Life cycle) 13
五、茲卡病毒臨床症狀 (Clinical symptoms of ZIKV) 13
六、感染性質體 (Infectious clone) 14
七、單次感染性顆粒SRIP(Single Round Infectious Particles) 15
八、疫苗及治療 15
九、甘草酸 (Glycyrrhizic acid ; GL)、衍生物及其抗病毒功效 16
十、甘草次酸 (Glycyrrhetic acid;GLA)、衍生物及其抗病毒功效 16
第二節、 研究動機與目的 17
一、動機 17
二、目的 17
第二章、 研究方法 18
第一節、研究設計 18
第二節、研究材料 19
一、細胞株 (Cell strains) 19
二、病毒株 (Virus strains) 20
三、藥物 (Drugs) 20
四、複製子、引子 (Replicon, Primer) 31
五、酵素 (Enzymes) 31
六、抗體 (Antibodies) 31
七、試劑 (Reagents) 32
八、儀器 (Instruments) 33
第三節、研究方法 34
一、細胞培養 (Cell culture) 34
二、病毒放大 34
三、細胞存活率試驗 (MTT assay) 34
四、細胞病變抑制試驗 (Cytopathic effect, CPE) 35
五、螢光/可見光顯微鏡觀察 (microscopy analysis) 35
六、免疫螢光染色 (immunofluorescence assay, IFA) 35
七、連續波長多功能分光光譜儀 (plus Molecular Devices) 36
八、病毒產率實驗 (Virus yield assay) 36
九、Time of addition assay 38
十、病毒中RNA純化（Virus RNA purification） 39
十一、反轉錄聚合酶連鎖反應（Reverse transcription PCR） 39
十二、質體純化 ( Plasmid purify ) 39
十三、DNA限制酶切割( DNA restriction enzyme digestion ) 40
十四、DNA樣本回收與純化 (DNA gel extraction and clean-up) 40
十五、DNA樣本膠體電泳分析 ( DNA electrophoresis ) 40
十六、質體轉染 ( Plasmid transfection into cell ) 41
第三章、 甘草酸衍生物之研究結果 42
第一節、 測量甘草酸衍生物對SF268的半毒殺劑量 (CC50) 42
第二節、 篩選抗茲卡病毒的甘草酸衍生物 42
一、測量茲卡病毒50%感染細胞之劑量(TCID50) 42
二、確定甘草酸衍生物抑制茲卡病毒感染細胞之功效 42
三、確定甘草酸衍生物抑制茲卡病毒非結構蛋白NS1的表現及抑制率 43
第三節、 甘草酸衍生物抑制茲卡病毒能力之測定 43
一、甘草酸衍生物依照藥物濃度增加，抑制茲卡病毒感染細胞的細胞病變能力以及降低茲卡病毒NS1蛋白表現 43
第四節、 甘草酸衍生物的抗茲卡病毒機轉之測定 45
一、確定甘草酸衍生物對茲卡病毒是否有治療功效 45
第四章、 甘草次酸衍生物之研究結果 49
第一節、 測量甘草次酸衍生物對SF268的半毒殺劑量(CC50) 49
第二節、 篩選抗茲卡病毒的甘草次酸衍生物 49
一、確定甘草次酸衍生物抑制茲卡病毒感染細胞之功效 49
二、確定甘草次酸抑制茲卡病毒非結構蛋白NS1的表現及抑制率 49
第三節、甘草次酸衍生物抑制茲卡病毒能力之測定 50
一、甘草次酸衍生物依照藥物濃度增加，抑制茲卡病毒感染細胞的細胞病變能力以及降低茲卡病毒NS1蛋白表現 50
第四節、 甘草次酸衍生物的抗茲卡病毒機轉之測定 51
一、確定甘草次酸衍生物對茲卡病毒是否有治療功效 51
第五章、 結論與討論 53
第一節、 甘草酸與甘草次酸及其活性衍生物抗茲卡病毒的能力 53
第二節、 甘草酸抗其他病毒之能力 53
第三節、 甘草酸衍生物抗其他病毒之能力 54
第四節、 甘草次酸抗其他病毒之能力 54
第五節、 甘草次酸衍生物抗其他病毒之能力 54
第六節、 甘草次酸有效藥物結構之比較 55
第七節、 未來展望 55
圖三、 不同效價之茲卡病毒感染的細胞病變狀況 56
圖四、 甘草酸及其衍生物對SF268細胞的細胞存活率 57
圖五、 甘草酸及其衍生物抗茲卡病毒能力篩選 58
圖六、 甘草酸及其衍生物抑制茲卡病毒非結構蛋白NS1之表現 61
圖七、 甘草酸(GL) 抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 63
圖八、 GL-2抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 65
圖九、 GL-3抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 67
圖十、 GL-6抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 69
圖十一、 GL-10抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 71
圖十二、 GL-13抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 73
圖十三、 GL-14抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 75
圖十四、 GL-19抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 77
圖十五、 GL-20抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 79
圖十六、 GL-33抑制茲卡病毒感染SF268細胞之細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 81
圖十七、 GL-2抑制SRIP感染A549細胞之細胞病變及病毒EGFP表現 83
圖十八、 GL-10抑制SRIP感染A549細胞之細胞病變及病毒EGFP表現 85
圖十九、 甘草酸(GL)與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 87
圖二十、 GL-2與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 89
圖二十一、GL-3與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 91
圖二十二、GL-10與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 93
圖二十三、GL-13與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 95
圖二十四、GL-14與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 97
圖二十五、GL-19與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 99
圖二十六、GL-20與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 101
圖二十七、GL-33與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 103
圖二十八、甘草酸(GL)在病毒感染後處理下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 105
圖二十九、GL-2在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 107
圖三十、 GL-3在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 109
圖三十一、GL-6在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 111
圖三十二、GL-10在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 113
圖三十三、GL-13在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 115
圖三十四、GL-14在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 117
圖三十五、GL-19在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 119
圖三十六、GL-20在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 121
圖三十七、GL-33在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 123
圖三十八、GL-2在病毒感染2小時後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 125
圖三十九、GL-10在病毒感染2小時後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 127
圖四十、 GL-2在藥物處理24小時，並洗淨後感染病毒的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 129
圖四十一、GL-10在藥物處理24小時，並洗淨後感染病毒的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 131
圖四十二、GL-2在藥物處理24小時，直接感染病毒的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 133
圖四十三、GL-10在藥物處理24小時，直接感染病毒的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 135
圖四十四、甘草次酸衍生物對SF268細胞的細胞存活率 136
圖四十五、甘草次酸衍生物抗茲卡病毒能力篩選 137
圖四十六、草次酸及其衍生物抑制茲卡病毒非結構蛋白NS1之表現 139
圖四十七、GLA-2抑制茲卡病毒感染後的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 141
圖四十八、GLA-4抑制茲卡病毒感染後的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 143
圖四十九、GLA-8抑制茲卡病毒感染後的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 145
圖五十、 GLA-11抑制茲卡病毒感染後的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 147
圖五十一、GLA-14抑制茲卡病毒感染後的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現 149
圖五十二、GLA-2與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 151
圖五十三、GLA-4與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 153
圖五十四、GLA-8與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 155
圖五十五、GLA-11與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 157
圖五十六、GLA-14與病毒同時培養情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 159
圖五十七、GLA-2在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 161
圖五十八、GLA-4在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 163
圖五十九、GLA-8在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 165
圖六十、 GLA-11在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 167
圖六十一、GLA-14在病毒感染後處理的情況下，抑制茲卡病毒的細胞病變及非結構蛋白NS1蛋白表現及共分布百分比 169
表一、甘草酸與其衍生物在10μM藥物濃度下抗茲卡病毒的細胞病變現象 170
表二、甘草酸及衍生物之50%藥物毒殺劑量(CC50)、50%抑制濃度(IC50)及治療指標(TI) 171
表三、甘草酸及衍生物在複製早期/晚期中的50%抑制濃度(IC50) 172
表四、甘草次酸衍生物在10μM藥物濃度下抗茲卡病毒的細胞病變現象 173
表五、甘草次酸衍生物之50%藥物毒殺劑量(CC50)、50%抑制濃度(IC50)及治療指標(TI) 174
表六、甘草次酸衍生物在複製早期/晚期中的的50%抑制濃度(IC50) 175

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