十字花科黑腐病菌（XANTHOMONAS CAMPESTRIS PV. CAMPESTRIS ，以下簡稱X. CAMPE
STRIS ）是一種革蘭氏陰性植物病原菌，可感染多種蔬菜，造成葉片之黑腐褐化。X.
CAMPESTRIS 分泌多種胞外酵素，與一般革蘭氏陰性菌很少產生胞外蛋白情形不同，
其分泌機制鮮為人知。本研究之主要課題在藉對其胞外酵素基因分子特性之探討，以
期揭開其分泌機制之奧秘。
α澱粉分解 （α－AMYLASE ）為X. CAMPESTRIS 主要胞外酵素之一，其產量高，且
分析便利。X. CAMPESTRIS 之分泌突變株（OUT-）累積α－AMYLASE 在胞質周緣區（
PERIPLASMIC SPACE ），顯示α－AMYLASE 的分泌途徑可能經由細胞內膜（CYTOPLAS
MIC MEMBRANE）、胞質周緣區，最後通過外膜到達胞外。本研究從事α－AMYLASE 基
因子特性之分析，以探討α－AMYLASE 被X. CAMPESTRIS 分泌過程中被PROCESSED 之
情形。
α－AMYLASE 基因已被選殖出來，並且在E. COLI 中表現。本實驗進一步對α－AMYL
ASE 進行基因定序，由基因定序可以推知此酵素的SIGNAL PEPTIDE及成熟部份的胺基
酸組成順序。基因定序採SANGER之定序系統稍加修改。欲定序之DNA 片斷，以噬菌體
M13 為載體經一連串次選殖；每個重組噬菌體DNA 再分別以兩個方向進行核 定序，
最後將整個基因的核 順序連起。
在整個核 序列靠近5'端可找到轉譯起始密碼；靠近3'端可找到終點密碼。此OPEN R
EADING FRAME可轉譯一分子量為51.9kd的蛋白質。與不同來源之α－AMYLASE 互相比
較胺基酸組成，可以找到類似之區域；所推知之SIGNAL PEPTIDE也符合一般SIGNAL P
EPTIDE的基本構造。
第二階段的研究工作是α－AMYLASE 蛋白本身Ｎ端的胺基酸定序。藉胺基酸定序可以
確定SIGNAL PEPTIDE實際長度，也可比較X. CAMPESTRIS 野生株及OUT-突變株所合成
之蛋白質在分泌過程中是否在不同位置進行PROCESSING。累積這些研究成果將可促進
對X. CAMPESTRIS 蛋白質分泌機制之瞭解。
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