臺灣博碩士論文加值系統

Antrodia camphorata俗名稱為牛樟芝，為台灣特有的藥用真菌，其子實體常應用於各種疾病的治療，如，食品及藥物中毒所引起的腹瀉腹痛，高血壓，皮膚癢和抗癌。本研究的目的是探討樟芝固態培植體中具有抑制腫瘤細胞生長及具有抗氧化效果之化合物。我們分別以人類肺癌細胞(A549 cells)及直腸癌細胞(HCT-8 cells)作為篩選分析之細胞株，以搜尋粗萃取物中之有效成分。首先，以樟芝固態培植體乙酸乙酯萃取物作用於A549及HCT-8細胞株48小時獲得IC50分別為100μg/mL及65μg/mL。再進一步，以正向管柱層析法進行分離，由此得到6個fraction，之後將fraction 4經製備型HPLC纯化出一白色結晶物，以IR、MS及NMR進行化學結構鑑定，得此化合物分子式 : C10H12O4 ; 分子量 : 196，其結構式仍在鑑定中。

The fruiting body of Antrodia camphorata is well known in Taiwan as “niu-chang chih” or “jang-jy”. The fruiting body of Antrodia camphorata has been used for the treatment of food and drug intoxication, diarrhea, abdominal pain, hypertension, skin itching and anti-tumor. The objective of this research is to identify the bioactive compounds in Antrodia camphorata’s product from solid-state fermentation with anti-tumor and anti-oxidant activities. By treating A549 cells ( a human lungs cancer cells ) and HCT-8 cells ( a human large intestine cancer cells ) with crude extracts of product of Antrodia camphorata for 48 hrs. the ethyl acetate extract was found to possess the highest anti-tumor activities with the IC50 values of 100μg/mL and 65μg/mL, respectively. The ethyl acetate extract was further separated by running through a silica gel column and six fractions were obtained. The active ingredient in F4 was purified by preparative HPLC and was structurally identified by MS, NMR and IR. The molecular formula and weight of this compound were C10H12O4 and 196, respectively.

摘要 I
ABSTRACT II
誌謝 II
目次 IV
表目錄 VII
圖目錄 VIII
第1章 緒論 1
1.1 前言 1
1.2 研究架構 2
第2章 文獻回顧 3
2.1 菇類三萜類之介紹 3
2.1.1 萜類之介紹 3
2.1.2 三萜類之生合成機制 6
2.1.3 三萜類的分類 8
2.1.4 三萜類的生理活性 11
2.2 樟芝之簡介與相關研究 12
2.2.1 樟芝簡介 12
2.2.2 樟芝深層培養及發酵產物生理機能之研究 13
2.2.3 樟芝之成分分析 17
2.3 自由基與抗氧化的關係 25
2.3.1 抗氧化劑的作用機制 25
2.3.2 抗氧化劑之種類 26
2.3.3 常見的抗氧化能力測定方法 27
第3章 材料與方法 28
3.1 實驗材料 28
3.1.1 樟芝樣品 28
3.1.2 細胞株 28
3.1.3 設備 28
3.1.4 藥品 29
3.2 實驗方法 30
3.2.1 樟芝萃取液之前處理 30
3.2.2 膠體過濾色層分析進行萃取液之初步分離純化 30
3.2.3 製備型HPLC進行萃取液之二次分離純化 31
3.2.4 HPLC分析方法 31
3.2.5 細胞培養 32
3.2.6 抑制腫瘤細胞生長試驗 33
3.2.7 抗氧化能力試驗 34
第4章 結果與討論 35
4.1 樟芝固態培植體不同溶劑萃取物之功能性篩選 35
4.1.1 樟芝固態培植體乙醇萃取物之初步分離 35
4.1.2 樟芝固態培植體之乙醇、水及乙酸乙酯萃取物之抑制腫瘤細胞生長試驗 37
4.1.3 樟芝固態培植體之乙醇、水及乙酸乙酯萃取物之抗氧化能力測定 42
4.2 化合物AC-1之纯化 48
4.2.1 化合物AC-1之結構鑑定 52
4.2.2 化合物AC-1之抑制腫瘤細胞生長試驗 59
4.2.3 化合物AC-1之抗氧化能力測定 61
4.3 樟芝固態培植體乙酸乙酯萃取物經膠體過濾層析所得之其他FRACTION之功能性測定 63
4.3.1 各個fraction之HPLC分析 63
4.3.2 各個fraction之抑制腫瘤細胞生長試驗 66
4.3.3 各個Fraction之抗氧化能力測定 72
第5章 結論 76
參考文獻 77

表目錄
表3-1. 移動相組成 31
表4- 1. 樟芝菌絲體之乙醇、水及乙酸乙酯萃取物捕捉DPPH的能力. 43
表4-2. 樟芝菌絲體之乙醇、水及乙酸乙酯萃取物之還原能力. 46

圖目錄
圖1-1. 天然物生合成的三大路徑 5
圖1-10. 由樟芝菌絲體中分離出五種新的MALEIC和SUCCINIC ACID. 24
圖4-1. 樟芝固態培植體不同溶劑萃取物之HPLC層析圖 36
圖4-2. 不同溶劑的樟芝固態培植體粗萃取物對A549 CELL的抑殺效果。 39
圖4-3. 不同溶劑的樟芝固態培植體粗萃取物對HEP 3B CELL的抑殺效果。 40
圖4-4. 不同溶劑的樟芝固態培植體粗萃取物對HCT-8 CELL的抑殺效果。 41
圖4-6. 樟芝固態培植體之乙醇、水及乙酸乙酯萃取物之還原能力。 47
圖4-7. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析分離之流程圖 49
圖4-8. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析分離所得各個FRACTION之收集率 50
圖4-9. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析法所得F4之HPLC層析圖 51
圖4-10. 化合物 AC-1以分析型HPLC在252NM下分析所得之層析圖譜。 53
圖4-11. 化合物 AC-1之TLC照片 54
圖4-12. 化合物 AC-1之紫外線全波長(200~450NM)掃描光譜。 55
圖4-13. 化合物 AC-1之紅外線光譜圖 56
圖4-14. 化合物 AC-1之1H核磁共振光譜圖 57
圖4-15. 化合物 AC-1之13C-DEPT核磁共振光譜圖 58
圖4-16. 化合物 AC-1之EI-MS質譜圖 59
圖4-17. 化合物AC-1對人類肺癌A549細胞、人類直腸癌HCT-8細胞及人類肝臟正常細胞 ( CHANGE LIVER CELLS) 和人類肝臟星狀細胞 (HSC CELLS)抑制生長之能力 61
圖4-18. 化合物AC-1捕捉DPPH的能力。 63
圖4-19. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析法所得各個FRACTION以UV 252NM分析之HPLC圖譜.(A) F9 (B) F11(C) F14 (D) F15 (E) F19 66
圖4-20. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析法所得各個FRACTION對A549 CELL的抑殺效果 69
圖4-21. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析法所得各個FRACTION對HCT-8 CELL的抑殺效果 70
圖4-22. 樟芝固態培植體乙酸乙酯萃取物、FRACTION 11及AC-1化合物對肝臟正常細胞(CHANG LIVER CELLS)及腫瘤細胞(A549 CELLS，HCT-8 CELLS)抑制生長能力之比較。 72
圖4-23. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析法所得各個FRACTION捕捉DPPH之能力。 74
圖4-24. 樟芝固態培植體乙酸乙酯層萃取物經正向管柱層析法所得各個FRACTION之還原能力。 76

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