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研究生:洪美戀
研究生(外文):Mein-Lien Hung
論文名稱:不同樟芝菌種發酵液在肝癌細胞之毒殺性比較
論文名稱(外文):Comparison of different strain Antrodia cinnamomea in HepG2 cell line cytotoxity
指導教授:龔瑞林龔瑞林引用關係
指導教授(外文):Zwe-Ling Kong
學位類別:碩士
校院名稱:國立臺灣海洋大學
系所名稱:食品科學系
學門:農業科學學門
學類:食品科學類
論文出版年:2006
畢業學年度:94
語文別:中文
論文頁數:90
中文關鍵詞:樟芝
外文關鍵詞:acetaminophenS9 mix
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摘 要

本研究探討不同樟芝菌種BCRC35396、35398、35716對癌細胞的毒殺性及其毒殺成分之特性。以新竹食品工業發展研究所生資中心之樟芝菌種BCRC 35396、35398這兩株菌株培養時間越久其毒殺Hep G2與MRC-5越強,而BCRC 35716則不具毒殺Hep G2、MCR-5癌細胞之能力。樟芝發酵液的毒殺性可因S9 mix的存在而被抵消。而且樟芝發酵液的毒殺效果很快,在4小時即可顯現出效果。相對於acetaminophen對細胞毒殺效果較慢需24小時才能顯現,且不能被S9 mix分解掉。此三株樟芝菌株之液體培養所產生的多醣體含量,以BCRC 35716為最高,但多醣體含量多寡與細胞毒殺性無關。
Abstract

Cytotoxicity of 3 Antrodia camphorate strains against HepG2 and MRC-5 cell lines was compared and its character was explored in this study, CCRC 35396 and CCRC 35398 have much stronger cytotoxicity than CCRC 35716 does. The toxicity appears cultured-time dependent, but could almost be destroyed by S9 mix adding. The toxicity of
A. cinnamomea liquid cultured filtrate was very obvious even the contact time was short as only 4 hours. Comparing to that by acetaminophen treatment, it required 24 hours to express cytotoxicity.
The content of polysaccharides for these three strains was also investigated. CCRC 35716 contains much more than the other two strains do. There were no relationship existed between the cytotoxicity and polysaccharide content.
目 錄

中文摘要……………………………………………………… ……….1
英文摘要………………………………………………… …………….2
壹、前言…………………………………………………………………….3
貳、文獻整理……………………………………………………………….9
一、樟芝的起源…………………………………………………………….9
二、樟芝的命名…………………………………………………………...11
三、樟芝的分類地位……………………………………………………..12
四、樟芝的生長環境與型態特徵………………………………………..12
五、菇類多醣的介紹……………………………………………………..14
六、樟芝之一般成分分析………………………………………………..15
七、樟芝的化學成分……………………………………………………..18
八、樟芝生理活性的研究………………………………………………...21
1.樟芝多醣體……………………………………………………..…21
2.樟芝三萜類……………………………………………………..…23
3.樟芝的抗氧化性………………………………………………......39
4.樟芝的降血糖功能………………………………………………..41
5.樟芝的保肝作用…………………………………………….…...41
6.樟芝抑制腫瘤細胞生長情形……………………………………43
7.樟芝的其他功能…………………………………………………44
8.樟芝的安全試驗…………………………………………… ……45
六、acetaminophen的介紹……………………………………. ………47
叁、材料與方法…………………………………………………………51
一、材料…………………………………………………………………51
1.樟芝菌株………………………………………………………….51
2.細胞株…………………………………………………………….51
3.實驗藥品………………………………………………………….52
二、設備與器材…………………………………………….……………52
三、實驗方法………………………………………………….…………..54
1.培養基製備………………………………………………………..54
1-1試管斜面培養……………………………………………...54
1-2培養皿平面培養…………………………………………...54
2.樟芝發酵液製備…………………………………………………..56
2-1接種源製備…………………………….…………………..56
2-2液體培養基製備…………………………………………..56
2-3搖瓶培養條件……………………………………………56
2-4菌絲乾重的測定………………………………………….57
3.多醣體含量測定方法…………………………………………….57
4. acetaminophen樣品製備………………………...………………58
5. acetaminophen最佳濃度測試……………………………………58
6.S9 activation system配製方法……………………………………59
7.樟芝細胞毒性測試…………………… ……...…………………..60
8. MTT assay………………………………………………………...63
肆、結果與討論…………………………………………….……………..65
伍、結論…………………………………………………………………..70
陸、參考文獻…………………………………………………..…………71










圖表目錄

Fig. 1、樟芝子實體照片………………………………………………….83
Fig. 2、由樟芝子實體萃取物中發現新的三帖類化合物(Nakamura et al., 2004, 1990)………………………………………………………..6
Table 1、樟芝抑制細胞株的研究…………………………………………7
Table 2、樟芝一般成分分析(陳等,2001)……………………………17
Table 3、文獻中樟芝之化學成分分析與鑑定之相關研究……………..20
Table 4、化合物10、2、21之藥理活性試驗(王,2004)…………..26
Fig. 3、 樟芝液體搖瓶培養於溫度25℃、振盪速度110 rpm/min的培養環境下,培養7天、14天、21天之生長曲線…………….……..83
Fig. 4 (A)葡萄糖標準溶液曲線圖。(B)CCRC35396、CCRC35398、CCRC35716三株樟芝之多醣體含量。………………………..84
Fig. 5 不同acetaminophen濃度(1) 0.01 mg/ml (2) 0.05 mg/ml (3) 0.1 mg/ml (4) 0.5 mg/ml (5) 1.25 mg/ml (6) 2.5mg/ml (7) 5 mg/ml對MRC-5與Hep G2細胞增生的影響……………………………....85
Fig. 6 不含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液,對MRC-5與Hep G2 cell 增生的影響(反應時間4小時,未添加acetaminophen)……………………………....…………………..86
Fig. 7 不含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液但添加acetaminophen 5 mg/ml,對MRC-5與HepG2 cell 增生的影響(反應時間4小時)………….………………………………...……..86
Fig. 8 不含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液,對MRC-5與Hep G2 cell 增生的影響(反應時間1天,未添加acetaminophen)…………….…………………………….…….87
Fig. 9 不含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液但添加acetaminophen 5 mg/ml,對MRC-5與HepG2 cell 增生的影響(反應時間1天)……………………………………………..………87
Fig. 10 含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液,對MRC-5與HepG2 cell 增生的影響(反應時間4小時,未添加acetaminophen)…………….……….……..……………..………88
Fig. 11 含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液但添加acetaminophen 5 mg/ml,對MRC-5與HepG2 cell 增生的影響(反應時間4小時)….……………………………..…………………88
Fig. 12 含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液,對MRC-5與HepG2 cell 增生的影響(反應時間1天,未添加acetaminophen)………………….……………………………..89

Fig. 13 含S9系統中添加不同株及不同培養時間樟芝發酵液但添加acetaminophen 5 mg/ml,對MRC-5與HepG2 cell 增生的影響(反應時間1天)……………………..…….……..…………89
陸、參 考 文 獻

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QRCODE
 
 
 
 
 
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                               
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