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研究生:王永興
研究生(外文):yungsing Wang
論文名稱:利用香樟木為基質栽培樟芝之研究
論文名稱(外文):The study for cultirating Antrodiacinnamomea by using the timber ofCinnamonue camphora .
指導教授:李國陽李國陽引用關係
學位類別:碩士
校院名稱:南台科技大學
系所名稱:生物科技系
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2010
畢業學年度:98
語文別:中文
論文頁數:94
中文關鍵詞:牛樟木香樟木多醣體微量元素重金屬樟芝子實體
外文關鍵詞:the timber of Cinnamonue camphora Cinnamomum kanehirai Haytrac elementpolysaccharideAntrodia cinnamomeaheavy metal
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樟芝(Antrodia cinnamomea)是一種珍貴的藥用真菌,生理活性主要成份包含多醣體、三萜類等,有關藥理活性諸如抗腫瘤、抗氧化、保肝等的研究相當多。文獻上出現相關性有關樟芝培養在香樟木上尚未有相關性的研究論文。因此本研究主要以香樟木材為其基質培養樟芝,並後續探討樟芝對於重金屬的富集率的問題。
研究結果顯示,平面培養添加微量元素部份,添加鐵可增加菌絲生長直徑,添加鋅 (0.4 ppm),對菌絲生長直徑也具有顯著性的差異;在重金屬添加方面,均呈減少的趨勢。 探討樟芝菌絲在平面培養對重金屬的吸附實驗中,可以看出在添加五種重金屬後,以鉛、汞的吸附能力較為顯著,分別達到18.7 (ppm)和18.8 (ppm)。添加香樟與牛樟木屑的實驗,在添加少量香樟木屑會有生長促進的效果,而添加牛樟木屑則是隨著添加的量增加,才會有顯著的生長效果。
香樟和牛樟在段木培養的研發方面,發現第6個月香樟椴木上所得的菌絲乾重會大於牛樟段木菌絲乾重;而多醣部份,在第三個月香樟木菌絲多醣開始會有明顯的上升,但在牛樟木菌絲多醣則是第4個月才有顯著的差異;另一方面活性多醣部份,第三個月香樟β-Glucan含量會高於牛樟菌絲中的β-Glucan含量,但到5個月之後的β-Glucan含量,兩者就沒有顯著性的差異。 HPLC分析部份,隨著月份的增加,香樟與牛樟段木的菌絲體的極性分佈也會提高,但比較兩者牛樟段木菌絲在極性分怖上,會高於香樟段木菌絲;不過在六個月之後,以香樟段木培養的樟芝菌絲體可成功轉化成子實體,且經由 HPLC與野生牛樟芝分析比較,其中香樟段木子實體的極性分佈與野生牛樟芝成份是有相似的,所以在以香樟段木培養樟芝子實體方面,實值得深入研究探討其生理活性與安全性問題。
Antrodia cinnamomea is a valuable medical fungus; which essential component of biological activity includes polysaccharide, triterpenoids, etc. Besides, there are plenty of researches in the relation to pharmacology activity, such as about anti-tumor, the oxidation resistance, and the guarantee of liver. However, we haven't found any literature yet about cultivating the Antrodia cinnamomea on the Cinnamonue camphora, according to this, we decide to use Cinnamonue camphora as a medium to cultivate Antrodia cinnamomea, and continue to discuss about the enrichment rate of heavy metal in Antrodia cinnamomea.

The result shows that adding iron in plate culture would help extending the diameter in growing hypha; and so does in adding zinc (0.4 ppm) in plate culture. Nevertheless, the diameter in growing hypha would reduce in adding heavy metal. In the research of discuss the absorption of heavy metal in hypha, it shows that after we adding five different heavy metal, the mercury and lead are remarkable in the absorptive capacity, reach to 18.7ppm and 18.8ppm respectively. In the research of cultivating hypha with Cinnamonue camphora and Cinnamomum kanehirai Hay in sawdust, we found that adding a small amount of Cinnamonue camphora sawdust can help hypha growing remarkably, but in the sawdust of Cinnamomum kanehirai Hay, we need to add a large amount of it to meet the same result.

As to the cultivation in Cinnamonue camphora and Cinnamomum kanehirai Hay, we found that the dry weight in hypha from Cinnamonue camphora which has cultivated for six months will be heavier than the dry hypha from Cinnamomum kanehirai Hay; and the polysaccharide in hypha from Cinnamonue camphora which has cultivated for three months has apparent raising but not in the hypha from Cinnamomum kanehirai Hay, which has apparent raising until the fourth month. On the other hand, the activity of polysaccharide part, the capacity of β-Glucan from cultivating on Cinnamonue camphora are higher than Cinnamomum kanehirai Hay, but after the fifth month, there's no difference between each of them. In the analysis of HPLC, the polar distribution in hypha of Cinnamonue camphora and Cinnamomum kanehirai Hay would increase by month, but the polar distribution would be much higher in the hypha of Cinnamomum kanehirai Hay than Cinnamonue camphora; however, the hypha of Cinnamonue camphora can transform into carpophore successfully after six months. And test with HPLC between the wild Antrodia cinnamomea and that, the polar distribution between two of them are very similar, so it's worthy to do further research on cultivation in hypha of Antordia cinnamomea from Cinnamonue camphora and discuss its biological activity and secure issue.
目次
摘要••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••I
目次•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••II
表目錄••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••V
圖目錄••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••V
第一章 緒論•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••1
1.1前言••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••1
1.2研究動機和實驗目的••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••2
第二章 文獻回顧•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••3
2.1 樟芝的介紹••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••3
2.1.1 樟芝的起源••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••3
2.1.2 樟芝的特徵••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••3
2.1.3 樟芝的成份••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••4
2.1.4 樟芝的生理活性功能••••••••••••••••••••••••••••••••••••4
2.1.4.1 樟芝多醣體的研究••••••••••••••••••••••••••••••••••••4
2.1.4.2 樟芝三萜類••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••6
2.1.5 樟芝之藥理活性••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••7
2.2 牛樟樹介紹••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••8
2.3 香樟樹介紹••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••9
第三章 實驗大綱••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••10
第四章 材料和實驗方法••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
4.1 實驗材料與實驗儀器•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
4.1.1 實驗材料•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
4.1.2 實驗設備•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••13
4.2 實驗方法•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••14
4.2.1 菌種活化•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••14
4.2.1.1 樟芝平盤培養•••••••••••••••••••••••••••••••••14
4.2.1.2 樟芝液態菌種•••••••••••••••••••••••••••••••••15
4.2.1.3 菌種保存•••••••••••••••••••••••••••••••••••••15
4.2.1.4 樟芝液態段木培養•••••••••••••••••••••••••••••16
4.3 不同的培養方式與條件
4.3.1 樟芝平面培養•••••••••••••••••••••••••••••••••••16
4.3.2 樟芝液態培養•••••••••••••••••••••••••••••••••••18
4.3.3 段木培養•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••18
4.4 發酵菌絲體多醣體試驗•••••••••••••••••••••••••••••••••••••20
4.4.1 發酵菌絲體多醣單因子試驗••••••••••••••••••••••••20
4.5 (1-3,1-6) β-Glucan 含量分析••••••••••••••••••••••••••••20
4.6 樟樹微量元素分析•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••21
4.7.1 高效液相層析儀( High Performance Liquid
Chromatography ) ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••21
第五章 結果與討論••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••23
5.1 段木微量元素分析和樟芝菌絲體與子實體元素分析•••••••••••••23
5.2 平面培養•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••26
5.2.1 微量元素添加試驗•••••••••••••••••••••••••••••••••26
5.2.2 重金屬添加試驗•••••••••••••••••••••••••••••••••••29
5.2.3 重金屬添加對樟芝吸附量試驗•••••••••••••••••••••••32
5.2.4 香樟與牛樟椴木木屑添加試驗•••••••••••••••••••••••36
5.2.5 香樟與牛樟椴木滅菌水添加試驗•••••••••••••••••••••39
5.3 液態培養•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••42
5.3.1 菌絲多醣單因子試驗•••••••••••••••••••••••••••••42
5.3.1.1 不同萃取方式探討•••••••••••••••••••••••••••••42
5.3.1.2 乾燥菌絲體不同的處理方式•••••••••••••••••••••44
5.3.1.3 溫度的探討•••••••••••••••••••••••••••••••••••44
5.3.1.4 時間的探討•••••••••••••••••••••••••••••••••••44
5.3.1.5 水料比的探討•••••••••••••••••••••••••••••••••44
5.3.2 微量元素添加試驗•••••••••••••••••••••••••••••••47
5.3.3 香樟與牛樟段木木屑添加試驗•••••••••••••••••••••51
5.3.4 香樟與牛樟段木滅菌水添加試驗•••••••••••••••••••55 5.4 段木栽培試驗•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••59
5.4.1 段木滅菌時間試驗•••••••••••••••••••••••••••••••59
5.4.1.1 培養基對段木菌絲生長試驗•••••••••••••••••••••59
5.4.1.2 不同培養方式對段木菌絲生長試驗•••••••••••••••60
5.4.1.3 不同培養天數對段木菌絲生長試驗•••••••••••••••60
5.4.2 觀察生長於香樟段木上樟芝菌絲的外觀•••••••••••••63
5.4.2.1 測量液態段木菌絲乾重•••••••••••••••••••••••••63
5.4.3 液態香樟與牛樟段木菌絲體多醣探討••••••••••••••66
5.4.4 香樟與牛樟段木菌絲體β-Glucan活性多醣探討••••••66
5.5 香樟段木樟芝菌絲極性成份探討•••••••••••••••••••••68
第六章 結論••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••77
第七章 參考文獻••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••80
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