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研究生:潘建州
研究生(外文):Pan, Jian-Jhou
論文名稱:樟芝發酵液及穀物發酵萃取液之抑菌作用研究
論文名稱(外文):Study on the Antibacterial Activities of Antrodia cinnamomea from Culture Broth and Extract of Fermented Grains
指導教授:梁志欽梁志欽引用關係
指導教授(外文):Liang, Zeng-Chin
口試委員:林重宏吳秋曄
口試委員(外文):Lin, Chong-HourngWu, Chiu-Yeh
口試日期:2012-07-13
學位類別:碩士
校院名稱:大葉大學
系所名稱:生物資源學系碩士班
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2012
畢業學年度:100
語文別:中文
論文頁數:168
中文關鍵詞:樟芝液態培養穀物固態培養抑菌活性
外文關鍵詞:Antrodia cinnamomeasubmerged culturesolid state cultureantibacterial activities
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本篇研究以三株樟芝菌株 Antrodia cinnamomea(BCRC 35396、BCRC35398 及 Lu)進行液態培養及不同穀物固態培養(小麥、薏仁、裸麥),分別以其發酵液及穀物發酵萃取液進行抑菌試驗,探討不同樟芝菌株,在不同培養方式及不同培養時間所產生的抑菌活性。液態培養方面,取其發酵液進行抑菌試驗。在不同培養時間條件下,以 BCRC 35396 及 Lu 培養至第 14 天其抑菌活性最高,BCRC 35398 則是培養至第 21 天其抑菌活性最高;比較不同樟芝菌株之抑菌活性,以 Lu 最高,BCRC 35396 次之,BCRC 35398 再次之;其中以 Lu 第 14 天發酵液之抑菌活性最高,可抑制 9 株菌,尤其對 Enterococcus faecalis BCRC 10066 具有最大抑菌圈、最小抑制濃度及最小殺菌濃度,分別為 13.75 mm、0.63 mg/mL 及 2.50 mg/mL。固態培養方面,將發酵穀物以 50℃ 熱水萃取,取萃取液進行抑菌試驗。在不同培養時間條件下,BCRC 35386 以薏仁固態培養樟芝至第 45 天其抑菌活性最高,小麥及裸麥則是培養至第 60 天其抑菌活性最高,BCRC 35398 以三種穀物固態培養樟芝均培養至第 60 天其抑菌活性最高,Lu 以小麥培養至第 45 至 60 天其抑菌活性最高且並無顯著性差異,薏仁及裸麥則是培養至第 60 天其抑菌活性最高;比較不同穀物固態培養樟芝之抑菌活性,均以裸麥最高,薏仁次之,小麥再次之;比較不同樟芝菌株之抑菌活性,以 Lu 最高,BCRC 35396 次之,BCRC 35398 再次之;其中以 Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之抑菌活性最高,可抑制 13 株 菌,尤其對 E. faecalis BCRC 10066 具有最大的抑菌圈活性,最小抑制濃度及最小殺菌濃度,分別為 17.25 mm、0.16 mg/mL 及 0.63 mg/mL。

The aim of this research was to investigate the antibacterial activities of the culture broth and the extract of fermented grains (wheat, coix and pearl barley) from three stains of A. cinnamomea (BCRC 35396, BCRC 35398 and Lu) under different fermentation types and incubation time. Under different incubation time of submerged culture, the culture broth of BCRC 35396 and Lu which incubated at 14th day and BCRC 35398 which incubated at 21th day was shown the strongest antibacterial activities, respectively. Among the three strains of A. cinnamomea, the culture broth of Lu was shown the strongest antibacterial activities,followed by BCRC 35396 and BCRC 35398 in order. Particularly, The culture broth from Lu which incubated at 14th day could inhibit nine pathogenic bacterial strains. They inhibited Enterococcus faecalis BCRC 10066 with the biggest inhibitory zone(13.75 mm), 0.63 mg/mL of minimum inhibitory concentrations and 2.50 mg/mL of minimal bactericidal concentration. During the incubation time of solid state culture, for the BCRC 35396, the extract of fermented coix which incubated at 45th day, and the extracts of wheat and pearl barley which incubated at 60th day were shown the strongest antibacterial activities, respectively. For the BCRC 35398, the extracts of fermented wheat, coix and pearl barley which incubated at 60th day were shown the strongest antibacterial activities, respectively. For the Lu strain, the extract of fermented wheat which incubated at 45th day, and the extracts of coix and pearl barley which incubated at 60th day were shown the strongest antibacterial activities, respectively. The order of the antibacterial activities of these three extracts of fermented grains was pearl barley, followed by coix and wheat. Among the three strains of A. cinnamomea, the extract of Lu was shown the strongest antibacterial activities, followed by BCRC 35396 and BCRC 35398 in order. Particularly, the extract of fermented pearl barley from Lu which incubated at 60th day could inhibit thirteen pathogenic bacterial strains. They inhibited E. faecalis BCRC 10066 with the biggest inhibitory zone (17.25 mm),0.16 mg/mL of minimum inhibitory concentrations and 0.16 mg/mL of minimal bactericidal concentration.
目錄

封面內頁
簽名頁
中文摘要…iii
英文摘要…v
誌謝…vii
目錄…viii
圖目錄…xiii
表目錄…xviii

第一章 前言…1
第二章 文獻回顧…5
第一節 致病菌…5
一、革蘭氏陽性菌…7
二、革蘭氏陰性菌…9
第二節 樟芝概述…13
一、樟芝之分類與命名…13
二、樟芝之分佈與型態…15
三、樟芝之生理活性功能…18
第三節 樟芝之培養方式…21
一、影響液態培養之環境因子…23
二、影響固態培養之環境因子…24
三、培養產物…27
第四節 抗生物質…28
一、抗生物質之定義…29
二、抗生物質之作用機制…30
三、抗生物質之合成…33
四、抗生物質之種類…33
五、抗生物質之評估試驗…34
六、菇類特有之抑菌物質…36
七、菇類相關之抑菌文獻…37
第三章 材料與方法…43
第一節 實驗材料…43
一、菌株…43
二、儀器…45
三、藥品…47
四、培養基…50
五、還原糖測定試劑配製試劑配製…50
第二節 樟芝培養…51
一、菌種保存與活化…51
二、樟芝液態培養…51
三、樟芝穀物固態培養…52
第三節 抑菌試驗…55
一、抑菌試驗樣品製備…55
二、細菌保存與活化…55
三、抑菌圈試驗…56
四、最小抑制濃度試驗…56
五、最小殺菌濃度試驗…56
第四節 透析處理…57
一、透析不同分子量區間…57
二、統計分析…59
第四章 結果與討論…60
第一節 樟芝液態培養…60
一、不同樟芝菌株液態培養之生長情況…60
二、不同樟芝菌株其發酵液之抑菌活性…66
三、A. cinnamomea Lu 培養第 14 天其發酵液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…77
四、樟芝液態培養其發酵液之抑菌活性討論…80
第二節 樟芝穀物固態培養…82
一、A. cinnamomea BCRC 35396 於不同穀物固態培養之生長情況…82
二、A. cinnamomea BCRC 35396 於不同穀物固態培養其萃取液之抑菌活性…88
三、A. cinnamomea BCRC 35396 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…99
四、A. cinnamomea BCRC 35396 於穀物固態培養其萃取液之抑菌活性小結…102
五、A. cinnamomea BCRC 35398 於不同穀物固態培養之生長情況…104
六、A. cinnamomea BCRC 35398 於不同穀物固態培養其萃取液之抑菌活性…110
七、A. cinnamomea BCRC 35398 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…121
八、A. cinnamomea BCRC 35398 於穀物固態培養其萃取液之抑菌活性小結…124
九、A. cinnamomea Lu 於不同穀物固態培養之生長情況…126
十、A. cinnamomea Lu 於不同穀物固態培養其萃取液之抑菌活性…132
十一、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…143
十二、A. cinnamomea Lu 於穀物固態培養其萃取液之抑菌活性小結…146
十三、樟芝穀物固態培養其萃取液之抑菌活性討論…148
第三節 透析處理…149
一、A. cinnamomea Lu 培養至第 14 天其發酵液於不同分子量區間之抑菌活性…149
二、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液於不同分子量區間之抑菌活性…152
三、A. cinnamomea Lu 液態培養至第 14 天其發酵液及裸麥固態培養至第 60 天其萃取液於不同分子量區間之抑菌活性討論…155
第五章 結論…156


圖目錄

圖 1、樟芝抑制雜菌生長之情況。…2
圖 2、民國 70 年至 99 年台灣地區食品中毒案件病因物質總計。…7
圖 3、樟芝之子實體。…14
圖 4、樟芝之菌絲型態(全生型)。…16
圖 5、樟芝液態培養之孢子。…17
圖 6、青黴菌抑制葡萄球菌生長之情況。…29
圖 7、抗生物質之作用機制。…32
圖 8、實驗架構圖。…42
圖 9、固態培養所使用之穀物(薏仁、裸麥及小麥)。…49
圖 10、透析流程圖。…57
圖 11、不同樟芝菌株於液態培養期間之 pH 值、還原糖及菌絲體乾重變化。…62
圖 12、A. cinnamomea BCRC 35396 於液態培養期間其菌絲體之生長情況。…63
圖 13、A. cinnamomea BCRC 35398 於液態培養期間其菌絲體之生長情況。…64
圖 14、A. cinnamomea Lu 於液態培養期間其菌絲體之生長情況。…65
圖 15、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 其發酵液在 2 mg/disc 下之抑菌圈情況。…68
圖 16、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 其發酵液在 2 mg/disc 下之抑菌圈情況。…71
圖 17、不同生長期 A. cinnamomea Lu 其發酵液在 2 mg/disc 下之抑菌圈情況。…74
圖 18、不同生長期及不同樟芝菌株其發酵液在 2 mg/disc下 之抑菌圈(革蘭氏陽性菌)。 …75
圖 19、不同生長期及不同樟芝菌株其發酵液在 2 mg/disc下 之抑菌圈(革蘭氏陰性菌)。…76
圖 20、A. cinnamomea Lu 其第 14 天發酵液之最小殺菌濃度。…79
圖 21、A. cinnamomea BCRC 35396 於不同穀物固態培養期間之 pH 值及生物質量變化。…83
圖 22、A. cinnamomea BCRC 35396 於小麥固態培養期間其菌絲體之生長情況。…85
圖 23、A. cinnamomea BCRC 35396 於薏仁固態培養期間其菌絲體之生長情況。…86
圖 24、A. cinnamomea BCRC 35396 於裸麥固態培養期間其菌絲體之生長情況。…87
圖 25、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於小麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…90
圖 26、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於薏仁固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…93
圖 27、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於裸麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…96
圖 28、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於不同穀物固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈(革蘭氏陽性菌)。…97
圖 29、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於不同穀物固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈(革蘭氏陰性菌)。…98
圖 30、A. cinnamomea BCRC 35396 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小殺菌濃度。…101
圖 31、A. cinnamomea BCRC 35398 於不同穀物固態培養期間之 pH 值及生物質量變化。…105
圖 32、A. cinnamomea BCRC 35398 於小麥固態培養期間其菌絲體之生長情況。…107
圖 33、A. cinnamomea BCRC 35398 於薏仁固態培養期間其菌絲體之生長情況。…108
圖 34、A. cinnamomea BCRC 35398 於裸麥固態培養期間其菌絲體之生長情況。…109
圖 35、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於小麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…112
圖 36、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於薏仁固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…115
圖 37、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於裸麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…118
圖 38、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於不同穀物固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈(革蘭氏陽性菌)。…119
圖 39、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於不同穀物固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈(革蘭氏陰性菌)。…120
圖 40、A. cinnamomea BCRC 35398 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小殺菌濃度。…123
圖 41、A. cinnamomea Lu 於不同穀物固態培養期間之 pH 值及生物質量變化。…127
圖 42、A. cinnamomea Lu 於小麥固態培養期間其菌絲體之生長情況。…129
圖 43、A. cinnamomea Lu 於薏仁固態培養期間其菌絲體之生長情況。…130
圖 44、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養期間其菌絲體之生長情況。…131
圖 45、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於小麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…134
圖 46、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於薏仁固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…137
圖 47、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈。…140
圖 48、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於不同穀物固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈(革蘭氏陽性菌)。…141
圖 49、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於不同穀物固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈(革蘭氏陰性菌)。…142
圖 50、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小殺菌濃度。…145
圖 51、A. cinnamomea Lu 其第 14 天發酵液在 2 mg/disc 下於不同分子量區間之抑菌圈。…151
圖 52、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液在 2 mg/disc 下於不同分子量區間之抑菌圈。…154


表目錄

表一、民國 70 年至 99 年台灣地區食品中毒案件各月別案件數統計…6
表二、不同樟芝培養方式之比較…22
表三、抗生物質之種類…33
表四、試驗細菌染色類別、名稱、編號及其來源…44
表五、試驗用儀器、型號、生產公司及其來源…45
表六、試驗材料或藥品其名稱、縮寫、化學式、販售公司及來源…47
表七、液態培養基配方…50
表八、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 其發酵液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…67
表九、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 其發酵液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…70
表十、不同生長期 A. cinnamomea Lu 其發酵液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…73
表十一、A. cinnamomea Lu 其第14天發酵液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…78
表十二、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於小麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…89
表十三、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於薏仁固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…92
表十四、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35396 於裸麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…95
表十五、A. cinnamomea BCRC 35396 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…100
表十六、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於小麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…111
表十七、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於薏仁固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…114
表十八、不同生長期 A. cinnamomea BCRC 35398 於裸麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…117
表十九、A. cinnamomea BCRC 35398 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…122
表二十、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於小麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…133
表二十一、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於薏仁固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…136
表二十二、不同生長期 A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養其萃取液在 2 mg/disc 下之抑菌圈…139
表二十三、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液之最小抑制濃度及最小殺菌濃度…144
表二十四、A. cinnamomea Lu 其第 14 天發酵液在 2 mg/disc 下於不同分子量區間之抑菌圈…150
表二十五、A. cinnamomea Lu 於裸麥固態培養至第 60 天其萃取液在 2 mg/disc 下於不同分子量區間之抑菌
圈…153

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