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研究生:鄭維仁
研究生(外文):Cheng Wei Jen
論文名稱:探討不同木屑萃出物培養牛樟芝菌種生長特性及活性分析
論文名稱(外文):Study on different wood extract for the culture growth of Taiwanofungus camphoratus and it bioactivitie
指導教授:陳啟楨陳啟楨引用關係
學位類別:碩士
校院名稱:南台科技大學
系所名稱:生物科技系
學門:生命科學學門
學類:生物科技學類
論文種類:學術論文
論文出版年:2012
畢業學年度:100
語文別:中文
論文頁數:68
中文關鍵詞:牛樟芝
外文關鍵詞:Taiwanofungus camphorates
相關次數:
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  牛樟芝 ( Taiwanofungus camphoratus = Antrodia camphorata = Antrodia cinnamomea ) 為食用藥用菇,只生長在台灣特有的牛樟樹(Cinnamomum kanehirae)內,屬於擔子菌門 ( Basidiomycota ) 、無褶菌目 ( Aphyllophorales ) 、多孔菌科 ( Polyporaceae )。在民間盛傳牛樟芝的功效頗多,其最令人注意的是保肝、抗癌以及抗腫瘤效果,而目前所知的是牛樟芝所含的三萜類為保健主要成分。 牛樟芝僅生長在台灣特有的保育類植物牛樟樹,因為只生長在牛樟樹上,導致被大量盜伐瀕臨絕種。本研究探討以其他木材來代替牛樟木培養牛樟芝菌種,進而分析成分與活性。
  初步以木屑萃取物加入培養基中觀察牛樟芝生長情形,培養30天之後顯示牛樟樹木屑、冇樟木屑,6%香樟木屑的水萃物培養基均生長到7cm以上,而酒萃物培養基則以冇樟木屑培養基均達到7cm以上。清除DPPH試驗中,其中以樟芝生長在12%香樟木屑水萃培養基中效果最佳,清除率為61%,其次為12%牛樟樹木屑培養基,清除率為60%以及3%與6%冇樟木屑培養基,清除率為52%。抗腫瘤細胞實驗中,抑制A549肺腺癌細胞以6%冇樟木屑水萃物培養基,抑制率60%為最佳,其次為3%香樟木屑水萃物培養基與12%牛樟樹木屑水萃物培養基,抑制率分別為58%與57%。抑制Hep G2肝母細胞癌以6%牛樟樹木屑水萃物培養基,抑制率73%為最佳,其次為12%與3%牛樟樹木屑水萃物培養基,抑制率分別為71%與68%。抑制Hep 3B肝癌細胞以3%牛樟樹木屑酒萃物培養基與12%牛樟樹木屑水萃物培養基為最佳,抑制率分別為63%與62%。細胞抗氧化能力測試,結果顯示出生長在3%、12牛樟樹木屑水萃物培養基與6%、12%香樟木屑水萃物培養基上的樟芝,其保護細胞能力具有顯著性差異(細胞存活率高於H2O2的存活率)。
  研究結果顯示出,加入木屑萃取物其樟芝生長情形、清除DPPH能力、抗腫瘤試驗以及細胞抗氧化試驗,皆比單純PDA培養來的佳,其加入水萃取物其生長情形以及活性皆比加入酒萃取物來的佳。
  Taiwanofungus camphoratus (synonym also known as Antrodia camphorata and Antrodia cinnamomea) is a famous medicinal mushroom, an endemic species in Taiwan, which is so far only grows in endemic host tree, Cinnamomum kanehirae. The fungus is belonging to Basidiomycota, Aphyllophorales, Polyporaceae. It is used for hepatoprotective, anti-cancer and anti-tumor effect in Taiwan, mainly active compounds are triterpenoids. This study aims on using other trees to instead of C. kanehirae for inoculating culture of Taiwanofungus camphoratus and the activities of their extracts. The preliminary study with three different sawdust extracts, i.e. C. kanehirae, C. micranthum and C. camphora, was added into the culture base medium. The anti-tumor activities of mycelial extracts are discussed.
  Taiwanofungus camphoratus growing habits of preliminary observation woods extract added to the media, cultured for 30 days after the C. kanehirae, C. micranthum, 6% C. camphora, water extract medium growth to more than 7 cm, ethanol extract C. micranthum medium to reach more than 7 cm. DPPH assay which the growth of Taiwanofungus camphoratus the best results in 12% C. camphora water extract medium, scavenging ability was 61%, followed by 12% C. kanehirae water extract medium, scavenging ability was 60%, 3% and 6% C. camphora water extract medium, scavenging ability was 52%. The inhibition of tumor cell viability of 6% C. micranthum water extract medium on Human lung carcinoma (A549), inhibition rate of 60%, followed by 3% C. camphora water extract medium and 12% C. kanehirae water extract medium, inhibition rate of 58% and 57%. The 6% C. kanehirae water extract medium inhibition Human hepatoblastoma (Hep G2), inhibition rate of 73%, followed by 12% and 3% C. kanehirae water extract medium, inhibition rate of 71% and 68%. The 3% C. kanehirae ethanol extract medium and 12% C. kanehirae water extract medium inhibition Human hepatocellular carcinoma (Hep 3B), inhibition rate of 63% and 62%. Cell anti-inflammatory test the results show that growth at 3%, 12 C. kanehirae water extract medium and 6%, 12% C. camphora water extract medium of Taiwanofungus camphorates, Its ability to protect cells with significant differences (cell survival rate is higher than the survival rate of H2O2)
  The results show woods extract added to the media of Taiwanofungus camphorates growth situation, DPPH assay, inhibition of tumor cell viability and Cell anti-inflammatory test are to the good than PDA medium culture, adding woods water extract the growth situation and activity, than to add the ethanol extract good.
中文摘要 …………………………………………………………………………… i
英文摘要………………………………………………………………………….. iii誌謝…………………………………………………………………………… v目次………………………………………………………………………………….. vi
圖目錄…………………………………………………………………………. ix 第一章 研究動機..…………………………………………………………………. 1
第二章 文獻回顧 …………………………………………………………………. 2
  2.1 真菌簡介 ……………………………………………………………… 2
  2.2 菇類介紹 ……………………………………………………………… 4
  2.3 食藥用菇類生理活性 ………………………………………………… 6
  2.4 樟芝介紹………………………………………………………………… 8
    2.4.1 樟芝簡介 ………………………………………………………. 8
    2.4.2 樟芝成分 …………………………………………………………. 9
    2.4.3 樟芝生理活性 …………………………………………………... 10
    2.4.4 樟芝栽培 ………………………………………………………. 11
第三章 材料與方法………………………………………………………………. 12
  3.1 實驗材料與菌株……………………………………………………… 12
    3.1.1 實驗菌株 ………………………………………………………. 12
    3.1.2 實驗木屑 ………………………………………………………. 12
    3.1.3 實驗細胞株 ……………………………………………………. 12
    3.1.4 材料與藥品 ……………………………………………………. 13
    3.1.5 實驗器材 ………………………………………………………. 14
  3.2 實驗架構……………………………………………………………… 16
  3.3 實驗方法……………………………………………………………… 17
    3.3.1 牛樟芝菌種保存………………………………………………. 17
    3.3.2 木屑培養基製備…………………………………………………. 17
    3.3.3 菌種生長條件探討………………………………………………. 18
    3.3.4 牛樟芝菌絲體萃取製備…………………………………………. 18
    3.3.5 清除DPPH(1,1-diphenyl-2picryl hydrazyl)自由基能力…………. 19
    3.3.6 細胞培養…………………………………………………………. 20
    3.3.7 腫瘤細胞存活率分析( MTT assay) …………………………… 21
3.3.8細胞法抗氧化能力測試………………………………………….. 23
    3.3.9 統計分析…………………………………………………………. 24
第四章 結果與討論………………………………………………………………. 25
  4.1 樟芝生長條件探討 …………………………………………………… 25
    4.1.1 熱水萃取較適生長………………………………………………. 25
    4.1.2 超音波冷萃取較適生長…………………………………………. 25
  4.2清除DPPH(1,1-diphenyl-2picryl hydrazyl)自由基能力測定 …………. 26
  4.3腫瘤細胞存活率分析( MTT assay) …………………………………….. 27
    4.3.1 培養於熱水萃取物培養基樟芝萃取液之抑制腫瘤細胞存活率分析 ……………………………………………………………………………... 27
    4.3.2 培養於超音波冷萃取物培養基樟芝萃取液之抑制腫瘤細胞存活率分析 ………………………………………………………………………………. 28
  4.4 細胞法抗氧化能力測試 ……………………………………………… 30
第五章 結論 ……………………………………………………………………. 32
第六章 參考文獻 ………………………………………………………………. 34










圖目錄
Fig.1 不同木屑熱水萃取物其培養基培養樟芝之生長情形…………………….. 40
Fig.2不同木屑超音波酒精萃取物其培養基培養樟芝之生長情形…………... 41
Fig.3 不同木屑熱水萃取液於稀釋4倍下清除DPPH自由基能力 …………… 42
Fig.4不同音波酒精萃取液於稀釋4倍下清除DPPH自由基能力…... 43
Fig.5 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於稀釋20倍下清除DPPH自由基能力………………………………………………………………………. 44
Fig.6 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於稀釋20倍下清除DPPH自由基能力 …………………………………………………………… 45
Fig.7 不同木屑熱水萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試 ………………. 46
木屑超
Fig.8 不同木屑超音波酒精萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試驗 ……….. 47
Fig.9 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試驗 …………………………………………………………………………. 48
Fig.10 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於肺腺癌細胞(A549) 之存活率試驗…………………………………………………………… 49
Fig.11 不同木屑熱水萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗………… 50
Fig.12 不同木屑超音波酒精萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗…… 51
Fig.13 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗 ………………………………………………………………………... 52
Fig.14 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於肝母細胞癌(Hep G2) 之存活率試驗……………………………………………………………. 53
Fig.15 不同木屑熱水萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗……………… 54
Fig.16 不同木屑超音波酒精萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗……… 55
Fig.17 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗 …………………………………………………………………………. 56
Fig.18 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於肝癌細胞(Hep 3B) 之存活率試驗 ………………………………………………………………. 57
Fig.19 不同木屑熱水萃取液於細胞抗氧化試驗 ……………………………… 58
Fig.20 不同木屑超音波酒精萃取液於細胞抗氧化試驗 ……………………… 59
Fig.21 H2O2細胞毒殺作用曲線圖 ……………………………………………… 60
Fig.22 樟芝培養於不同木屑熱水萃取物其菌絲體萃取液於細胞抗氧化試驗 …. 61
Fig.23 樟芝培養於不同木屑超音波酒精萃取物其菌絲體萃取液於細胞抗氧化試驗 …………………………………………………………………………………….. 62
Fig.24 培養於CKH樟芝生長型態…………………………………………………..63
Fig.25 培養於CMH樟芝生長型態 …………………………………………. 64
Fig.26 培養於CCH樟芝生長型態……………………………………………… 65
Fig.27 培養於CKE樟芝生長型態……………………………………………… 66
Fig.28 培養於CME樟芝生長型態……………………………………………… 67
Fig.29 培養於CCE樟芝生長型態………………………………………………. 68
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