臺灣博碩士論文加值系統

　　NLRP3發炎體為蛋白質複合物所組成，主要由NLRP3、ASC、caspase-1這三種蛋白質所組成之複合蛋白質體。而NLRP3 發炎體主要調控IL-1β、IL-18這兩種促進發炎因子。NLRP3已被證實在這些疾病的致病過程中扮演重要角色，例如痛風。DF-30為香鱗毛蕨萃取物，已證實在巨噬細胞中可以抑制NLRP3發炎體活化。本研究主要目的是利用小鼠發炎疾病模式，探討DF-30是否能減緩NLRP3發炎體相關之腹膜炎。本實驗以腹腔注射尿酸鹽結晶 (monosodium urate, MSU) 誘導小鼠腹膜炎為實驗模式，實驗小鼠取7週齡之C57BL/6公鼠，實驗共分為五個組別:控制組、疾病組、DF-30處理組、正對照組、單獨DF-30處理組。控制組及疾病組以腹腔注射無菌PBS，DF-30處理組與單獨DF-30處理組及正對照組以腹腔注射DF-30 (50 mg/kg)以及秋水仙素(1 mg/kg)， 1小時後疾病組、DF-30處理組、正對照組以腹腔注射MSU (120 mg/kg)，控制組、單獨DF-30處理組以腹腔注射PBS，四小時後以isoflurane方式犧牲小鼠。小鼠犧牲後取其腹腔灌洗液，離心並收集細胞進行CD45及Gr-1染色。高度表現CD45及Gr-1之細胞為嗜中性球。結果顯示疾病組顯著較控制組提升腹腔嗜中性球浸潤，正對照組秋水仙素能顯著抑制腹腔嗜中性球浸潤，但DF-30處理組與疾病組相比在腹腔嗜中性球浸潤現象沒有顯著差異。接著以西方墨點法分析腹腔浸潤細胞中NLRP3與caspase-1的蛋白表現，疾病組NLRP3及活化態caspase-1 蛋白表現顯著提升，而DF-30處理組及正對照組秋水仙素NLRP3及活化態caspase-1 蛋白表現顯著降低。以ELISA分析腹腔灌洗液中發炎激素的表現，結果發現疾病組IL-1β、IL-6及MCP-1表現量顯著提升，DF-30處理組IL-1β表現量顯著降低，但對IL-6及MCP-1表現量無顯著影響。正對照組秋水仙素IL-1β、IL-6及MCP-1表現量顯著降低。從以上結果證明DF-30可透過抑制NLRP3發炎體來降低MSU引起之小鼠腹膜炎，改善痛風所引起之發炎反應。

NLRP3 inflammasome is a protein complex composed by NLRP3, ASC and caspase-1. NLRP3 inflammasome controls the expression of pro-inflammatory cytokine IL-1β and IL-18. NLRP3 inflammasome is important for the pathogenesis of inflammatory diseases, including gouty inflammation. DF-30, an extract of herbal medicine, inhibited the activation of NLRP3 inflammasome in macrophages. In this study we investigated the anti-inflammatory effects of DF-30 in a mice model of monosodium urate (MSU)-induced peritonitis. We found that the protein expression levels of NLRP3 and active caspase-1 in the peritoneal cells were reduced by DF-30 and colchicine. In addition, the protein expression levels of IL-1β, IL-6 and MCP-1 in lavage fluids were also reduced by DF-30 and colchicine. However, DF-30 did not affect the peritoneal recruitment of neutrophils. These results indicate that DF-30 inhibits MSU-induced peritonitis by inhibiting NLRP3 inflammasome.

中文摘要…………………………………….……………………….……………...……….I
英文摘要………………………………………………….……..…………………………..II
誌謝…………………………………………………………………………………………III
第一章、緒論…………………………………………............................….................……...1
　　第一節、香鱗毛蕨......................................................................................................…..2
　　　　1-1香鱗毛蕨的簡用與應用……………….…………………...……………..…. 2
　　　　1-2香鱗毛蕨生藥學研究……………………………………………..…..…....…2
第二節、香鱗毛蕨藥理作用研究…………………………………………………….….2
　　　　2.1香鱗毛蕨抗腫瘤作用………….……………………………..……………….2
　　　　2.2香鱗毛蕨銀屑病的治療作用…………………….…….………………….….3
　　　　2.3香鱗毛蕨抗氧化藥理作用……………………………….... ………………...3
　　　　2.4香鱗毛蕨抑菌藥理作用……………………………………………................3
　　　　2.5香鱗毛蕨抗發炎藥理作用…………………………………………………....4
　　第三節、香鱗毛蕨30%乙醇萃取物製備及定義….…..….............................................5
　　第四節、痛風之相關研究…. …………………………………………………..………6
　　　　4-1國人罹患高尿酸血症與痛風之調查………………..…... ………….……….6
　　　　4-2痛風的成因…………………………………..……………………….….……6
　　第五節、NLRP3 inflammasome………...…………...………………………………….8
　　第六節、痛風與NLRP3 infalmmasome…………..……………………………….….11
　　第七節、發炎調控因子……………………………………………………………..…13
　　第八節、研究方向與動機………………………………………………..……………14
第二章、研究材料與方法…………………………………………….……………….……15
　　第一節、藥品試劑與試驗儀器………………………………...……………………...16
　　　　1-1實驗動物………………………………………………………...…………...16
　　　　1-2藥品試劑……………………………………………………………………..16
　　　　1-3抗體……………………………………………………...….... ………….….17
　　　　1-4分析試劑………………………………………………....……………….….17
　　　　1-5實驗儀器………………………………………………….………………….17
　　　　1-6實驗耗材………………………………………………………………….….18
　　　　1-7實驗溶劑配方……………………………………...…... ….… …………….18
　　第二節、實驗方法 …………………………………………………………….……...20
　　　　2-1動物實驗………………………………………………….……….…………20
　　　　2-2發炎細胞激素分析……………………………………...…….. ……………21
　　　　2-3白血球浸潤分析…………………………………….……………………….21
　　　　2-4西方墨點法………………………………………………………….……….22
　　　　2-5蛋白質濃縮………………………………..……………...………………….23
　　　　2-6統計分析……………………………………………………...…..………….24
第三章、研究結果…………………………..……….…..…………………………….……25
　　第一節DF-30對尿酸鹽誘發C57BL/6小鼠發炎反應之影響……….....…...…..…..26
　　第二節DF-30對尿酸鹽誘導C57BL/6小鼠生成 NLRP3 蛋白表現之影響……....26
　　第三節DF-30對尿酸鹽誘導C57BL/6小鼠生成 caspase-1 (p10) 蛋白表現之影響……………………………………………………………………………………………26
　　第四節DF-30對尿酸鹽誘發C57BL/6小鼠發炎反應之IL-1β影響..........................26
　　第五節DF-30對尿酸鹽誘發C57BL/6小鼠發炎反應之IL-6影響............................27
　　第六節DF-30對尿酸鹽誘發C57BL/6小鼠發炎反應之MCP-1影響.......................27
第四章、討論…………………………………………………………..……………………28
第五章、結論………………………………………………….……………………….……31
第六章、圖表說明…………………………………………………………………………..33
第七章、參考文獻.……………………………………………….…….……………….….48

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