臺灣博碩士論文加值系統

近年來，腎結石變成一種常見的泌尿系統疾病，指發生於腎盂、腎盞及腎孟與輸尿管連接部的結石，多見於30~60歲人群，且男性發病率高於女性，而近年來發病率有上升的趨勢。研究顯示，除泌尿系統感染、梗阻、自身代謝性疾病及遺傳因素外，腎結石的發病與不健康的飲食關係密切，先前研究常用單一中藥方劑治療腎結石其效果有限。

本研究的目的用兩個傳統中藥方劑豬苓湯及芍藥甘草湯做結合來探討治療腎結石之效應，本研究的第一步透過萃取分析與HPLC通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質不同化合物。第二步為製備單水草酸鈣結晶，然後以結晶學分光儀的研究方法，即結晶成核、晶體成長，用四種不同濃度猪苓湯抑制草酸鈣結石形成的抑制作用。第三步為動物實驗，以0.75%乙二醇餵食大白鼠形成腎臟草酸鈣結石作為模型，然後以四種不同濃度的猪苓湯合芍藥甘草湯以及0.75%乙二醇一同餵食三週期間。之後犧牲大白鼠和取腎切片，以顯微鏡觀察各個劑量在腎臟產生草酸鈣結石的多寡，做為評估療效的標準。

研究結果發現，以萃取技術和動物實驗的方法來探討，利用兩種方劑可以抑制草酸鈣結晶吸附在細胞表面，或是將已經吸附在細胞表面的結晶移除，而能將結石排出，故如本實驗方式能抑制草酸鈣結晶吸附細胞表面，四種不同濃度的猪苓湯萃取液，對結晶成核誘導時間有明顯延遲作用(p值<0.0001)及對結晶聚集的抑制百分比增加(p值<0.05)，在大白鼠餵食乙二醇，誘導產生腎結石之實驗中，平均結晶沉積指數減少(p值<0.05)。動物實驗方面正常组表面光滑、柔軟，乙二醇组可見大鼠腎表面粗糙，並有許多白色晶體形成。豬苓湯及芍藥甘草组雖然表面粗糙，但是白色晶體較腎结石组明顯減少，藉由本研究的結晶成核的作用和抑制的機制跟大鼠的動物實驗可以充分的了解中草藥應用於治療腎結石的病症有更確切的療效。

The research aimed to use the Zhulingtang and Shaoyao Gancao Tang to reduce the formation of renal calculus. Initially, the analysis tended to be in accordance with the identification of object which contained different chemical compounds by the extraction and high pressure liquid chromatography. Second, the study applied calcium carbonate crystals which were extracted from waterweeds and the crystallography spectral instruments to trace the progress of the crystal formation of calcium carbonate in Zhulingtang. Animals with normal renal function were fed with or without three weeks of Zhulingtang and Shaoyao Gancao Tang in combination with 0.75% glycol because of establishing the model of the animal experiment. The concentrations of calcium oxalate were a standard subject using a microscope by anesthetizing mice and isolating renal section.
In the results of animal experiment, two doses of extraction could prevent calcium oxalate from absorbing on the cellular membrane and excrete those crystals. Four levels of Zhulingtang extracted liquid suppressed crystal nucleation reaction (P<0.0001) and avoided crystal accumulation (P<0.05). The average of crystal accumulation decreased in association with the increase in renal stones by feeding glycerol to animals (P<0.05). It had been proposed that the kidneys of mice were soft and smooth in control group and those were rough and appeared with crystals in experimental group. This observation had been noted on experimental group adding Zhulingtang and Shaoyao Gancao Tang to decrease crystal formation.
The study concluded that the Chinese herb could approach therapeutic goal of elimination of renal stones by the suppression of crystal nucleation reaction in our experiment.

目錄
中文摘要 i
Abstract iii
目錄 iv
圖索引 vii
表索引 viii
第一章 緒論 1
1.1 研究背景 1
1.2 文獻回顧 3
1.2.1尿路結石相關文獻 8
1.2.1.1微創經皮腎穿刺取石術治療上尿路結石 8
1.2.1.2台灣南部地區尿路結石流行病學之研究 8
1.2.1.3尿路結石之飲食治療與護理指導 8
1.2.1.4 腎臟，膽囊及泌尿結石治療與病理生理學 8
1.2.1.5 慢性脊髓病變患者的膀胱處理及尿路預後處理 9
1.2.1.6高動物性蛋白食物攝取頻率與尿路結石疾病 9
1.2.2 西方應用於結石治療相關文獻 9
1.2.3 中草藥應用於結石治療相關文獻 10
1.2.4 文獻總結 12
1.3 研究動機 15
1.4 研究目的 15
第二章 理論基礎 16
2.1腎結石 16
2.1.1病因 16
2.2症狀 18
2.3西醫治療方法 19
2.4中藥萃取及分析方法 20
2.4.1熱回流萃取法……………………………………………….20
2.4.2高效液相層析儀(HPLC)…………………………………….21
2.4.3 紅外線光譜(IR) 22
2.5中藥材之成分及其藥理作用 24
2.5.1 豬苓 (Polyporus umbellatus) 24
2.5.2豬苓湯 (Zhulingtang) 25
2.5.3芍藥甘草湯 (Scutellariae Radix；SR) 25
第三章 材料與方法 27
3.1豬苓湯及芍藥甘草湯萃取分析 28
3.1.1豬苓湯熱回流萃取分析實驗 28
3.1.2 HPLC測試實驗 29
3.2製備草酸鈣晶種 29
3.3結晶成核的抑制作用 29
3.4結晶成長的抑制實驗 31
3.5動物實驗 31
3.5.1尿液測定 31
3.5.2 組織切片 31
3.6統計分析 32
第四章 結果與討論 33
4.1研究結果 33
4.1.1草酸鈣晶種的製備 33
4.1.2 HPLC測試實驗分析 34
4.1.3成核抑制作用 38
4.1.4成長抑制作用 39
4.1.5 動物實驗結果 40
4.1.1尿液測定結果 40
4.1.2組織切片結果 41
4.2討論 44
第五章 結論與未來展望 47
5.1結論 47
5.2未來展望 47
參考文獻 48

 
圖索引
圖1.1 泌尿系統結石.................................................................................5
圖1.2 平均長度和晶體成長時間的關係............................................10
圖1.3 草酸鈉分析圖..............................................................................11
圖2.1 腎結石圖........................................................................................18
圖2.2 腎結石圖........................................................................................18
圖2.3 熱回流萃取鍋.................................................................................20
圖2.4 高效液相層析(HPLC)....................................................................21
圖2.5 紅外線光譜(IR)...............................................................................23
圖3.1 研究工作關聯圖............................................................................28
圖4.1 草酸鈣晶種....................................................................................33
圖4.2 豬苓湯1μl分析圖.........................................................................34
圖4.3 豬苓湯5μl分析圖........................................................................35
圖4.4 芍藥甘草湯1μl分析圖.................................................................36
圖4.5 芍藥甘草湯5μl分析圖.............................................................37
圖4.6 大鼠解剖取出腎臟........................................................................41
圖4.7 對照組大白鼠餵食三週後之腎切片............................................42
圖4.8 乙二醇組鼠腎切片(100x)..............................................................42
圖4.9 豬苓湯鼠腎切片(100x)..................................................................43
圖4.10 豬苓湯和芍藥甘草湯鼠腎切片(100x)...........................................43
 
表索引
表1 腎結石化合物分析............................................................................17
表2 結晶成核的誘導時間........................................................................38
表3 結晶成長的抑制百分比(%)..............................................................39
表4 各组大鼠尿液晶體成分的變化(餵食前)..........................................40
表5 各组大鼠尿液晶體成分的變化(餵食後)..........................................40
 

【1】耿小茵、賴真、石之嶙、張阮章、徐輝：豬苓湯及澤瀉對腎結石大鼠草酸鈣結晶形成的影響，中國中醫藥信息雜誌，2004；11497-8。
【2】陳立奇，芍藥甘草湯之研究，臺北醫學大學生藥學研究所1997年。
【3】吳靜美，中醫保養泌尿系統，常春 Evergreen，327期。
【4】Stamatelou KK1, Francis ME, Jones CA, Nyberg LM, Curhan GC. Time trends in reported prevalence of kidney stones in the United States: 1976-1994. Kidney Interational. 2003 May ; 63(5)：1817-23.
【5】Atmani F, Khan SR. Effects of an extract from Herniaria hirsuta on calcium oxalate crystallization in vitro.BJU International. 2000 ; 85: 621-625.
【6】胡仲儀、陳以平、查平 : 慢性腎小球腎炎病理分型與中醫治療分析．中國中西醫結合雜誌，1992，12(8)：455。
【7】陳廣平、郭慕依、張月娥 : 大鼠Thy-1抗血清製備及系膜增生性腎炎模型建立臨床實驗與病理學雜誌，1996，12(3)：241。
【8】Saris J J, Brenning M H. Rapid genetic analysis of families with polycystic kidney disease. Lancet，1990，335:1102.
【9】黎磊石，侯凡凡 : 腎臟病研究進展，中華內科雜誌，1986，44(4)：232。
【10】Van D, Woude V, DaHa M, Marieke EA.Soluble aggregate of IgG and immune complexes enhance IL-6 production by renal mesangial cells. Kidney Int, 1993，43:544.
【11】張明、郭慕依、金惠銘 : 肝素對大鼠腎小球系膜細胞的抑製作用中華醫學雜誌，1995，75(5)：273。
【12】Freitas AM, Schor N, Boim MA. The effect of Phyllanthus niruri on urinary inhibitors of calcium oxalate crystallization and other factors associated with renal stone formation.BJU International. 2002 ; 89：829-834.
【13】Joshia VS, Parekha BB, Joshia MJ, Vaidyaba AB. Herbal extracts of Tribulus terrestris and Bergenia ligulata inhibit growth of calcium oxalate monohydrate crystals in vitro.Journal of Crystal Growth. 2005 ; 275：1403-1408.
【14】Dasa I, Guptaa SK, Ansaria SA, Pandeyb VN, Rastogic RP. In vitro inhibition and dissolution of calcium oxalate by edible plant Trianthema monogyna and pulse Macrotyloma uniflorum extracts.Journal of Crystal Growth. 2005 ; 273：546-554.
【15】錢峻，豬苓湯證治療研究概況，吉林中醫藥，1997。
【16】Yasui T, Fujita K, Sato M, Sugimoto M, Iguchi M, Nomura S, Kohri K. The effect of takusha, a kampo medicine, on renal stone formation and osteopontin expression in a rat urolithiasis model. Urological Research. 1997 ; 27：194-199.
【17】Menon M, Resnick MI: Urinary lithiasis: Etiology, diagnosis, and management. In: Wash PC ed: Campbell’s Urology (8th ed.), Chap 96, Saunders, Philadelphia 2002 ; pp 3229-3274.

【18】張永勳、何玉鈴、黃世勳合著，中藥學概論，文興出版事業有限公司，2008年10月。
【19】陳長勛，中藥藥理學，上海科學技術出版社，2006年10月。
【20】張機，傷寒雜病論，第九、第十一安徽醫學院《急腹癥資料》1977：74。
【21】Hess B, Meinhardt U, Zipperle L, Jaeger P: Simultaneous measurement of calcium oxalate crystal nucleation and aggregation ： impact of various modifiers. Urol Res 1995 ;23：231-8.
【22】Zhang L, Chen L, Xu X, Zeng F, Cheung PC: Effect of molecular mass on antitum or activity of heteropoly-saccharide from Poria cocos. Biosci Biotechnol Biochem 2005 ; 69 ： 631-4.
【23】Gapter L, Wang Z, Glinski J, Ng KY: Induction of apoptosis in prostate cancer cells by pachymic acid from Poria cocos. Biochem Biop hys Res Comm on 2005 ; 332 ：11 53-61.
【24】Borghi L, Schianchi T, Meschi T, Guerra A, Allegri F, Maggiore U, Novarini A: Comparison of two diets for the prevention of recurrent stones in idiopathic hypercal ciuria. N Engl J Med 2002; 346 : 77-84.
【25】Robertson WG, Peacock M: Calcium oxalate crystalluria and inhibitors of crystalliz a tion in recurrent renal stone- formers. Clin Sci 1972; 43 : 499-506.
【26】Yang D, Tinnitus treated with combined traditional Chinese medicine and West medicine. Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 1989 ; 9：270-1.
【27】Huang YT, Huang DM, Chueh SC, Teng CM, Guh JH ：Alisol B acetate, atriterpene from Alismatis Rhizoma, induces Bax nuclear translocation and a poptosis in hormone-resistant prostate cancer PC-3 cells. Cancer Lett. 2006 ; 231：270-8.
【28】Utsunomiya M, Koide T, Yamaguchi S, Yoshioka T, Sonoda T, Sugiyama K:The effect of kanpou medicine on the growth and aggregation of calcium oxlate crystals in vitro. Hinyokika Kiyo 1991 ; 37：1097-101.
【29】Kawamura K, Moriyama M, Nakajima C, Miyazawa K, Suzuki K, Ysugawa R: The inhibitory effects of Takusha on the formation, growth and aggregation of calcium oxalate crystals in vitro. Hinyokika Kiyo 1993 ; 39：695-700.
【30】Li Q, Wang SQ, Sun CM:Clinical study of rapid bladder filling agent. Zongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi 1992 ;12：533-4.
【31】Uribarri J, Oh MS, Carroll HJ: The first kidney stone . Ann Intern Med 1989 ; 111:1006-9.
【32】Haranaka K, Satomi N, Sakurai A, Haranaka R, Okada N, Kobayashi M：Antitumor activities and tumor necrisis factor producibility of traditional Chinese medicines and Crude drugs. Cancer Immunol Immunother 1985 ; 20：1-5.
【33】Ito H, Shimura K：Studies on the antitumor activity of traditional Chinese Medicines. Gan To Kagaku Ryoho 1985 ; 12：2145-8.
【34】賴真、王沙燕、耿小茵：猪苓湯治療泌尿系結石40例分析，暨南大學學報，1999；20：75-6。
【35】鈴木明，猪苓湯治療尿路結石的效果，日本東洋醫學雜誌，1993；95。
【36】鈴木明，猪苓湯對輸尿管結石的排石效果，日本東洋醫學雜誌，1995；877-9。
【37】李遜、曾國華，吳開俊：微創經皮腎穿刺取石術治療上尿路結石，臨床泌尿外科雜誌，2003，18（9）：516-518。
【38】李瀛輝、張心湜、陳明村、黃榮慶：台灣南部地區尿路結石流行病學之研究，中華民國泌尿科醫學會雜誌；5卷1期 1994/03/01，P1-7。
【39】Shashi Alok, Sanjay Kumar Jain, Amita Verma, Mayank Kumar, Monika Sabharwa：Pathophysiology of kidney, gallbladder and urinary stones treatment with herbal and allopathic medicine: Asian Pac J Trop Dis 2013 ; 3(6)：496-504.
【40】何淑貞、王豊裕、鴻義章、郭漢崇：高動物性蛋白食物攝取頻率與尿路結石疾病之相關性研究，慈濟醫學雜誌；15卷3期，P155-162。
【41】李思明、曾星：豬苓藥材特性及在泌尿系統疾病中應用研究，廣州中醫藥大學第二附屬醫院中心實驗室，廣東廣州，2012年。
【42】Goldfarb DS, Coe FL: Prevention of recurrent nephrolithiasis. Am Fam Physician. 1999 Nov 15;60（8）：2269-76.
【43】鄧智偉，多喝水可防腎結石，都市日報，21-09-2007，p.30。
【44】沈連生，神農本草經中藥彩色圖譜，pp.377-378。
【45】醫源世界，中國經濟真菌大全。
【46】張仲景．《傷寒論》，中國中醫藥出版社，2009年8月。
【47】鄧中甲．《方劑學》，中國中醫藥出版社，2011年9月。
【48】汪昂．《湯頭歌訣》，中國中醫藥出版社，2007年9月。
【49】陳賢正，關於中藥的100個故事，宇河文化出版有限公司，2011年，pp.14-16。
【50】夏志銀，馬玉華，蔣季傑，等．低分子肝素治療大鼠系膜增殖性腎小球腎炎．江蘇醫藥雜誌，2000，26(10)：778。