臺灣博碩士論文加值系統

以往的研究一直認為由牙周病致病菌包括Porphyromonas gingivalis 和Actinobacillus actinomycetemcomitans (A. a)等感染是造成牙周病變的一個重要原因，但現在很多證據已發現牙周病致病菌感染只是一個起始原因，接下來的引起宿主的免疫系統活化及嚴重的發炎反應，並進而釋放大量的發炎性物質才是誘發牙周病變的一個非常重要的致病原因，此發炎反應甚至會造成牙周病的重要特徵即齒槽骨的流失。先前的研究已發現薑黃素(curcumin)萃取物具有很廣泛的藥理做用包括抗菌、抗氧化和抗發炎作用等，並也有促進傷口復原的效果，安全性也很高，但對牙周病所導致的齒槽骨破壞是否也有療效尚未有文獻報告，為進一步提升農業產業及產值，因此本研究目的即是以本土產薑黃素萃取物為材料，探討對於大白鼠上顎第二大臼齒綑綁絲線後誘發牙周組織發炎所導致齒槽骨吸收的抑制效果。
實驗分成三組: (1) 於大白鼠上顎第二大臼齒綑綁絲線後立即鬆開絲線並給予安慰劑;(2)於大白鼠上顎第二大臼齒綑綁絲線並給予安慰劑;(3)於大白鼠上顎第二大臼齒綑綁絲線並給予口服薑黃素(10 mg/kg/day)。大白鼠分別於綑綁絲線誘發牙周炎後第3、7、10、14天犧牲並取下上顎骨進行顯微電腦斷層掃描及牙齦組織進行脊髓過氧化酶(MPO)活性分析。
顯微電腦斷層影像及組織切片結果顯示給予薑黃素治療的牙周炎大白鼠，其齒槽骨破壞的程度比沒有給予薑黃素治療的牙周炎大白鼠來得少。薑黃素可以有效降低被絲線綑綁大臼齒周遭牙周組織發炎反應的(MPO)活性。另一方面，薑黃素（10 μM）具有明顯抑制RAW 264.7細胞分化為蝕骨細胞的能力。綜合本實驗的結果，我們證實薑黃素具有抗牙周病菌活性以及減緩絲線綑綁誘發大鼠牙齦發炎和齒槽骨流失能力，並能抑制RAW 264.7細胞分化為蝕骨細胞，而使其具有作為抗牙周炎治療藥劑的開發潛力。

摘要 1
誌謝 3
目次 6
圖目錄 7
第一章 牙周病 9
1.1 牙周組織 9
1.2 牙周病成因 10
1.3 牙周病致病機轉 14
1.4薑黃素的功能 24
1.5薑黃素與牙周病 27
1.6絲線綑綁誘發牙周病的機轉 27
1.7薑黃素對誘發牙周病的假設性治療機轉 28
第二章 研究目的 28
第三章 實驗材料與方法 29
3.1實驗設計 29
3.2動物絲線綑綁模式 30
3.3牙齦組織採樣 32
3.4顯微電腦斷層掃描 32
3.5脊髓過氧化酶(Myeloperoxidase, 簡稱MPO)活性檢測 32
3.6抗菌實驗 33
3.7蝕骨細胞特性鑑定：TRAP 染色測定 34
3.8蝕骨細胞(osteoclast)分化 34
第四章 實驗結果 35
4.1薑黃素對牙周炎齒槽骨破壞的影響(顯微電腦斷層) 35
4.2薑黃素對牙周炎齒槽骨破壞的影響(組織切片) 38
4.3薑黃素對MPO活性的影響 40
4.4薑黃素抑制內毒素(LPS)誘導牙周炎的蝕骨細胞性的影響 41
4.5薑黃素對P.g及A.a菌的抗菌效果 43
4.6薑黃素的有效濃度 45
4.7薑黃素抑制蝕骨細胞分化的能力 47
4.8薑黃素抑制蝕骨細胞基因表現的能力 48
4.9薑黃素抑制蝕骨細胞MMP-9活性的能力 51
4.10薑黃素抑制蝕骨細胞造成骨吸收的能力 52
4.11薑黃素對大白鼠的體重影響 54
第五章 討論 55
第六章 結論 57
參考文獻 58














圖目錄
圖1 牙周組織解剖圖 9
圖2 牙周發炎的漸進過程 10
圖3 牙周炎的臨床表徵 11
圖4 牙周炎囊袋探測圖 11
圖5 牙周炎齒槽骨吸收在X-光片上的表現 12
圖6 牙周炎致病菌形成的過程 13
圖7 蝕骨細胞活化的路徑 14
圖8 IL-1、TNF-α對牙周炎的影響 15
圖9 IL-1及TNF-α的作用機轉 16
圖10 RANKL活化蝕骨細胞的示意圖 18
圖11 OPG攬載RANKL抑制蝕骨細胞活化的示意圖 19
圖12 RANKL及OPG在牙周炎的表現 20
圖13 RANKL及OPG在健康和牙周炎的數量表現 21
圖14 具活性之蝕骨細胞結構 22
圖15 造骨細胞及骨基質細胞會影響蝕骨細胞生成及活性 23
圖16 RANKL及OPG在骨吸收及骨生成的平衡表 24
圖17 Curcuma longa L.的根莖 25
圖18 薑黃素粉末 26
圖19 絲線綑綁誘發牙周病的機轉 27
圖20 薑黃素對絲線綑綁誘發牙周病的假設性治療機轉 28
圖21 實驗設計圖 30
圖22 動物牙周病誘發實驗示意圖 31
圖23 大臼齒絲線綑綁示意圖 32
圖24 顯微電腦斷層上的齒槽骨影像 35
圖25 顯微電腦斷層上的齒槽骨破壞測量部位 36
圖26 上顎第二大臼齒牙根分叉處的齒槽骨破壞情形 36
圖27 上顎第二大臼齒近、遠心處的齒槽骨破壞情形 37
圖28 上顎第一大臼齒遠心及第三大臼齒近心處的齒槽骨破壞情形 37
圖29 上顎第一大臼齒近心及第三大臼齒遠心處的齒槽骨破壞情形 38
圖30 組織切片上第一及第二大臼齒齒間處的齒槽骨高度 39
圖31 上顎第一及第二大臼齒齒間處(interproximal)的齒槽骨破壞情形 39
圖32 組織切片下每毫米平方所含發炎細胞的情形 40
圖33 薑黃素降低MPO activity的效果 41
圖34 Trap染色組織切片下觀察蝕骨細胞聚集在齒槽骨脊(alveolar crest)的情況 42
圖35 組織切片下每毫米平方所含Trap細胞的情形 42
圖36 組織切片下觀察蝕骨細胞造成齒槽骨吸收的範圍 43
圖37 不同濃度的薑黃素對p.gingivalis的抑菌效果 44
圖38 不同濃度的薑黃素對A.actinomycetemcomitans的抑菌效果 44
圖39 不同濃度的薑黃素對Trap activity的抑制效果 45
圖40 不同濃度的薑黃素對細胞產生毒性的影響 46
圖41 絲線綑綁後不同天數給予薑黃素對Trap activity的影響 46
圖42 顯微鏡下不同濃度的薑黃素抑制蝕骨細胞分化的情形 47
圖43 不同濃度的薑黃素抑制蝕骨細胞分化的情形 48
圖44 不同濃度的薑黃素對DC-STAMP基因表現的影響 49
圖45 不同濃度的薑黃素對Cethepsin基因表現的影響 49
圖46 不同濃度的薑黃素對RANK基因表現的影響 50
圖47 不同濃度的薑黃素對c-fms基因表現的影響 50
圖48 不同濃度的薑黃素對MMP-9表現量的影響 51
圖49 不同濃度的薑黃素western blot上對MMP-9表現量的影響 51
圖50 顯微鏡下薑黃素抑制蝕骨細胞功能的情形 52
圖51 薑黃素對與pit formation area的改善情形 53
圖52 薑黃素對與pit formation number的改善情形 53
圖53 大白鼠在實驗後14天的體重變化情形 54
圖54 大白鼠在實驗後7天的體重變化情形 55

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