1.本實驗以單吮吸電極膜電位鉗定法(single,suctionpipette voltage clamp) 為方法,探討響尾蛇毒(crotamine )及海葵毒素(sea anemone toxinⅡ )在天竺 鼠單一心肌細胞,對鈉管道的作用機轉。比較兩者在(1)鈉電流量,(2)鈉電流 穩定不活化狀態,(3)鈉電流不活化狀態恢復成可活化狀態的速率,(4)單一鈉 電流不活化過程的影響。並研究兩者的交互作用,用以推論兩種毒素作用的異同。 2.在膜電位一鈉電流關係曲線(voltage-current relationship of INa )在膜電 位介於-60mV與-20mV之間時,響尾蛇毒(0.5μg/ml )可以增加鈉電流量 ,其增加的幅度5%至40%之間,激發納電流的閾值電位並不受到響尾蛇毒的作用 而改變。在膜電位介於-60mV與-20mV之間,海葵毒素(5μg/ml )可以增加 納流量,其增加的幅度約為30%至60%之間,激發鈉電流的閾值電位,會因為海 葵毒素作用,而由原來的-60mV改變為-70mV;但兩者對逆轉電位並不影響。 3.當細胞膜電位被鉗定至-20mV時,響尾蛇毒僅略為延長鈉電流的不活化過程; 但是如果細胞在海葵毒素作用之下,則可以使鈉電流的不活化過程延長。如以不活化 時間常數來比較,海葵毒素可以延長此常數10倍以上。 4.在膜電位與鈉電流穩定不活化狀態(steady-state inactivation )關係曲線的 研究中發現響尾蛇毒使此種關係曲線向右移5-10mV。在海葵毒素的處理下,心肌 細胞的膜電位一鈉電流不活化狀態關係曲線會向右移動約40mV;但是如果將第一鉗 定電位的鉗定時間延長至100msec,使第一鉗定電位下,鈉管道能達到完全的不活 化狀態,如此,則這個關係曲線就不會明顯的移動。 5.在鈉電流由不活化狀態恢復成可活化狀態(recovery from inactivation of IN -a)的研究中發現,響尾蛇毒略微加速鈉管道由不活化狀態恢復成可活化狀態的速率 。海葵毒素可以非常有效地將整個恢復所須的時間縮短3至5倍;但是如果將前刺激 (conditioning pulse)的刺激時間延長至100msec,則此恢復常數,僅能被縮短 10至20%。 6.在研究響尾蛇毒與海散毒素之間的交互作用中發現:(1)在響尾蛇毒前處理的 心肌細胞,再加入海葵毒素,仍然可以出現海葵毒素使鈉電流不活化過程延長的作用 。(2)在海葵毒素前處理的心肌細胞,再加入響尾蛇毒後,卻不能發現,鈉電流的 不活化過程有縮短的現象。 7.由上面的結果可知,雖然在神經毒素的分類中,響尾蛇毒與海葵毒同被列為第三 類毒素,它們均可以加強第二類毒素的作用。在本實驗,以天竺鼠單一心肌細胞為材 料的研究中,推論響尾蛇毒與海葵毒素的作用有明顯差異且其作用點並沒有重疊現象 。
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