臺灣博碩士論文加值系統

烏頭與附子使用歷史悠久，早在神農本草經即有記載並列為下品，主要來源為毛茛科（Ranunculaceae）植物的乾燥塊根。現代藥理與化學研究顯示，烏頭、附子類藥材的毒性成分與藥理活性成分均與二萜類生物鹼有關，譬如：aconitine，必須經過炮製才能降低毒性，以利人體服用。
本研究藉由HPLC來分析烏頭類藥材的炮製前後成分含量差異，進而了解烏頭類生藥在醫療上的功效，以提高中藥的醫療品質與利用價值，發現炮製前後aconitine含量相差93％以上，顯示出炮製的重要性，而參照中華人民共和國藥典2005年版第一部所自行炮製的藥材，其aconitine含量經HPLC檢測與市面上炮製品並無太大差異，並且對照TLC-scanner，HPLC與LC MS/MS三者之間分析生草烏的結果相似。而在DPPH自由基清除能力之試驗中，經由不同炮製品的甲醇粗抽物，來比較不同炮製方法對抗氧化活性的影響，發現在臨床上使用製草烏可以有較好的清除自由基能力與較少的毒副作用。
最後參考台灣傳統藥典進行灰分、酸不溶性灰分與白附子二氧化硫殘留量等實驗，建議黑附子乾燥減重百分率必須小於16.30％、總灰分小於12.61％、酸不溶性灰分小於1.94％、水抽提部份必須大於9.00％、稀醇抽提大於9.06％；草烏部份則規範乾燥減重百分率必須小於14.51％、總灰分小於5.59％、酸不溶性灰分小於1.44％、水抽提部份必須大於6.84％、稀醇抽提大於5.13％，而白附子二氧化硫殘留量0.0137 g/Kg，低於500 ppm(0.5 g/Kg)，符合規範。

The Wutou and Fuzi have been used in Traditional Chinese Medicine for a long time. They are all drying roots of the Ranunculaceae family. According to the pharmaceutical and chemical studies, the crude drugs of the Aconitum origin comprise a kind of highly toxic diester-diterpene Aconitum alkaloid, namely aconitine, and it also has marked pharmacological effects. After processing, the toxicity might be decrease and the aconite roots could be used safely for the patients.
In the present studies, We investigated the crude drugs of Aconitum origin by high-performance liquid chromatography (HPLC), TLC-scanner and LC MS/MS methods to quantify determine of the content of aconitine. We found that aconitine can be reduced by as much as 93% before and after processing. That means processing is very important in Traditional Chinese medicine, especially aconite roots. According to the PRC Pharmacopeia ( 2005 edition), we processed those unprocessed Chaowu and compared the content of aconitine with other crude drugs which were bought at the Chinese traditional medicine stores. The content of aconitine was not different by HPLC. We also compare the content of aconitine of the HPLC with the LC/MS/MS and TLC-scanner, and there is little difference too. And on the DPPH scavering test, we found that it exhibited good free radical scavenging effects in the assay for DPPH scavenging effect, especially processed Chaowu. It had good scavenging effect with less toxicity.
According to the Taiwan Herbal Pharmacopeia, We run five tests, including loss on drying, total ash, acid-insoluable ash, diluted ethanol-soluable extractive and water-soluable extractive of those crude drugs of Aconitum origin and investigated the sulfur residue of the white Fuzi. The black Fuzi were recommended that the loss on drying content must be less than 16.30%, total ash content <12.61%, acid-insoluable ash content <1.94%, diluted ethanol-soluable extract content >9.06% and the water-soluable extract content >9.00%; The Chaowu were recommended that the loss on drying content < 14.51%, total ash content <5.59%, acid-insoluable ash content <1.44%, diluted ethanol-soluable extract content >5.13% and the water-soluable extract content must be more than 6.84% . The sulfur residue of the white Fuzi is 0.0137g/kg, and it is less than 500ppm(0.5 g/kg), that means the white Fuzi is safe for clinical used.

目錄 I
表目錄 V
圖目錄 VIII
摘要 XI
Abstract XIII
第一章 緒言 1
第二章 總論 3
第一節 烏頭、附子之本草考察 3
第二節 烏頭、附子之藥用植物學考察 8
第三節 烏頭與附子之生藥文獻考察 13
第四節 烏頭、附子炮製之考察 19
第五節 烏頭屬（Aconitum）之植物成分及藥理文獻整理 32
第六節 烏頭、附子aconitine含量檢驗與硫磺燻蒸試驗之方法考察 50
第三章 實驗部份 57
第一節 實驗試劑與儀器 57
第二節 烏頭屬化學成分Aconitine之定量分析 61
第三節 烏頭屬(Aconitum)之自由基清除能力 68
第四節 灰分、乾燥減重、水抽提物與稀醇抽提物之測定 71
第五節 白附子二氧化硫含量試驗 76
第四章 實驗結果 79
第一節 烏頭屬化學成分Aconitine之定量分析 79
第二節 烏頭屬(Aconitum)之自由基清除能力 97
第三節 灰分、乾燥減重、水抽提物與稀醇抽提物測定結果 101
第四節 白附子二氧化硫含量試驗 115
第五章 討論 116
第一節 烏頭屬化學成分Aconitine之定量分析 116
第二節 烏頭屬(Aconitum)之自由基清除能力 125
第三節 總灰分、酸不溶性灰分、乾燥減重、水抽提物與稀醇抽提物測定之討論 127
第四節 白附子二氧化硫含量試驗之討論 133
第六章 結論 135
參考文獻 137


表目錄
Table 2-1：中國歷代附子的炮製方法 28
Table 2-2：川烏A. carmichaeli Debx.植物成分研究考察 34
Table 2-3：北烏頭A. kusnezoffii Reichb.植物成分研究考察 35
Table 2-4：黃草烏A. vilmorinianum Kom.植物成分研究考察 35
Table 2-5：瓜葉烏頭A. hemsleyanum Pritz.植物成分研究考察 36
Table 2-6：松潘烏頭A. sungpanense H.-M. 植物成分研究考察 36
Table 2-7：麗江烏頭A. forrestii Stapf.植物成分研究考察 37
Table 2-8：紫烏頭A. episcopale Levl.植物成分研究考察 37
Table 2-9：蒼山烏頭A. contortum Finet植物成分研究考察 37
Table 2-10：疏毛圓錐烏頭A. paniculatum var.wulingense W.T.Wang植物成分研究考察 38
Table 2-11：多根烏頭A. Karakolicum Rapaics植物成分研究考察 38
Table 4-1：Aconitine的有效線性範圍（HPLC） 81
Table 4-2：各種藥材aconitine含量 83
Table 4-3：台灣中藥店全省抽樣20家黑附子藥材aconitine含量 84
Table 4-4：台灣中藥店全省抽樣21家草烏藥材aconitine含量 85
Table 4-5：市售五廠濃縮中藥aconitine含量 86
Table 4-6：Aconitine同日間及異日間之分析精密度（n=3） 87
Table 4-7：Aconitine的有效線性範圍（LC/MS/MS） 88
Table 4-8：生草烏經由TLC scanner定量結果 95
Table 4-9：TLC scanner相關統計 96
Table 4-10：Aconitum 清除DPPH自由基能力試驗結果 98
Table 4-11：生草烏清除DPPH自由基能力試驗結果 98
Table 4-12：市售Aconitum藥材乾燥減重、總灰分、酸不溶性灰分百分率 102
Table 4-13：市售Aconitum藥材稀醇抽提物與水抽提物百分率 104
Table 4-14：針對全省20家中藥材店市售黑附子乾燥減重百分率 105
Table 4-15：針對全省20家中藥材店市售黑附子總灰份百分率 106
Table 4-16：針對全省20家中藥材店市售黑附子酸不溶灰份百分率 107
Table 4-17：針對全省20家中藥材店市售黑附子水抽提率 108
Table 4-18：針對全省20家中藥材店市售黑附子稀醇抽提率 109
Table 4-19：針對全省20家中藥材店市售草烏乾燥檢重百分率 110
Table 4-20：針對全省20家中藥材店市售草烏總灰份百分率 111
Table 4-21：針對全省20家中藥材店市售草烏酸不溶灰份百分率 112
Table 4-22：針對全省20家中藥材店市售草烏稀醇抽提率 113
Table 4-23：針對全省20家中藥材店市售草烏水抽提率 114
Table 5-1：炮製前後aconitine含量比較 116
Table 5-2：本實驗室炮製藥材與市面上炮製藥材炮製前後aconitine含量比較 117
Table 5-3：濃縮中藥與市售藥材aconitine含量比較表（C廠） 118
Table 5-4：濃縮中藥與市售藥材aconitine含量比較表（D廠） 119
Table 5-5：生草烏經由TLC-scanner與HPLC儀器測定方面的優缺點比較 121
Table 5-6：中華人民共和國藥典2005版ㄧ部中藥品質規範 127
Table 5-7：台灣傳統藥典中藥品質規範 128
Table 5-8：日本藥典與韓國藥典中藥品質規範 128
Table 5-9：本次實驗藥材總灰分、酸不溶性灰分、乾燥減重數據與四國藥典比較 130
Table 5-10：白附子二氧化硫殘留量之比較 134


圖目錄
Figure 1：烏頭、附子之本草系統圖 3
Figure 2-1：川烏地上部 11
Figure 2-2：草烏地上部 11
Figure 2-3：關白附子 12
Figure 2-4：天南星科白附子（獨腳蓮） 12
Figure 2-5：天南星科白附子（獨腳蓮） 15
Figure 2-6：烏頭屬白附子 15
Figure 2-7：烏頭、附子主要成分的結構式 33
Figure 2-8： 烏頭類生藥經過炮製後的成分變化 33
Figure 2-9：各成分結構式圖 40
Figure 3-1：市售常見烏頭、附子類藥材 59
Figure 3-2：白附子二氧化硫含量試驗裝置圖 78
Figure 3-3：白附子二氧化硫含量試驗裝置圖（氮氣壓力閥） 78
Figure 4-1：Aconitine standard之HPLC層析圖 79
Figure 4-2：生草烏（大陸）之HPLC層析圖 79
Figure 4-3：製草烏之HPLC層析圖 79
Figure 4-4：黑附子之HPLC層析圖 80
Figure 4-5：白附子在HPLC的層析圖 80
Figure 4-6：檢量線1 81
Figure 4-7：檢量線2 82
Figure 4-8：LC/MS/MS檢量線圖 88
Figure 4-9：Aconitine在LC/MS/MS之質譜建檔。 89
Figure 4-10：Aconitine 10.0 ppm標準品在LC/MS/MS的層析圖，上圖為aconitine peak，下圖為內標(sulfamethazine IS) 89
Figure 4-11：生草烏在LC/MS/MS的層析圖，上圖為aconitine peak，下圖為內標(sulfamethazine IS) 90
Figure 4-12：生草烏與aconitine在HPTLC板上之展開圖 91
Figure 4-13：生草烏在HPTLC板上經由TLC scanner所得結果（3D） 92
Figure 4-14：Aconitine standard（1000 ng）在TLC scanner上的個別結果（1D） 92
Figure 4-15：生草烏在TLC scanner上的個別結果（1D） 93
Figure 4-16：Standard control在TLC scanner上的個別結果（1D） 93
Figure 4-17：TLC scanner經由area的分析結果 94
Figure 4-18：TLC scanner經由height的分析結果 94
Figure 4-19：Catechin的清除率 98
Figure 4-20：生草烏的清除率 99
Figure 4-21：製草烏的清除率 99
Figure 4-22：製草烏（G）的清除率 99
Figure 4-23：黑附子的清除率 99
Figure 4-24：白附子的清除率 100
Figure 4-25：Aconitum 清除DPPH自由基能力試驗結果曲線圖 100
Figure 4-26：加混合指示劑三滴後溶液變成紫色 115
Figure 4-27：加入氫氧化鈉溶液至溶液顏色變成橄欖綠色 115

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